體液中常見(jiàn)酶及同工酶的生物化學(xué)檢驗(yàn)課件

1、體液中常見(jiàn)酶及同工酶的生物化學(xué)檢驗(yàn)廣州醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)系臨床生化教研室前言早在1900年，人們已發(fā)現(xiàn)脂肪酶活性升高對(duì)急性胰腺炎有特異的診斷價(jià)值；1908年，Wohlgemuth開(kāi)始測(cè)定尿液中淀粉酶（AMY）以診斷急性胰腺炎。此后，學(xué)者們對(duì)血液中的重要代謝酶類(lèi)與某些特定組織器官發(fā)生疾病的聯(lián)系逐個(gè)地進(jìn)行了研究，使得診斷酶學(xué)得到了重要的發(fā)展。本節(jié)內(nèi)容一、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶的測(cè)定二、門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶及其同工酶的測(cè)定三、-谷氨酰基轉(zhuǎn)移酶及其同工酶的測(cè)定四、肌酸激酶及其同工酶測(cè)定五、乳酸脫氫酶及其同工酶的測(cè)定六、堿性磷酸酶及其同工酶的測(cè)定七、酸性磷酸酶及其同工酶八、淀粉酶酶及其同工酶的測(cè)定九、脂肪酶十、膽堿

2、酯酶一、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶的測(cè)定丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（L-Alanine aminotransferse，ALT），俗稱(chēng)為谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT），廣泛分布于全身各組織，尤其以肝臟中最豐富，且絕大多數(shù)存在于肝細(xì)胞的胞漿中。主要催化丙氨酸和-酮戊二酸之間的氨基轉(zhuǎn)移反應(yīng)。ALT有兩種不同活性的同工酶（ALTs）和同工酶（ALTm），分別存在于細(xì)胞質(zhì)及線粒體，后者的活性為前者的16倍。肝細(xì)胞壞死血液中以ALTm為主。（一）適應(yīng)癥疾病的診斷和鑒別診斷，疾病期的監(jiān)測(cè)和治療效果的監(jiān)測(cè)。如肝膽疾病、藥物的篩查等。（二）測(cè)定方法轉(zhuǎn)氨酶的測(cè)定方法有許多種，以往多用比色法如賴(lài)氏法(Reitman-Frankel)、金氏法(

3、King)和改良穆氏法(Mohun)，主要不同點(diǎn)為單位定義和標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制方法有差異。其中以賴(lài)氏法最常用，由于此法操作簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)，一些小型實(shí)驗(yàn)室仍在使用。目前，國(guó)內(nèi)外實(shí)驗(yàn)室多采用IFCC推薦的方法對(duì)ALT進(jìn)行測(cè)定。測(cè)定原理 上述反應(yīng)在最適條件下，NADH的氧化速率與標(biāo)本中酶活性呈正比；在340nm連續(xù)監(jiān)測(cè)吸光度，根據(jù)線性反應(yīng)期吸光度下降速率(-A/min)，計(jì)算ALT的活力單位。（三）臨床意義ALT在臨床上主要用于肝臟疾病的診斷。由于肝細(xì)胞中ALT濃度比血液高約7000倍，只要有1/1000肝細(xì)胞中的ALT進(jìn)入血液就足以使血中ALT升高1倍，故此酶是反映肝損傷的一個(gè)很靈敏指標(biāo)。各種急性病毒性肝炎

4、、藥物或酒精中毒等引起的急性肝損害時(shí)，血液ALT 水平可在臨床癥狀（如黃疸）出現(xiàn)之前就急劇升高，峰值可為20ULN以上，且ALTAST。一般而言，急性肝炎時(shí)血液ALT高低與臨床病情輕重相平行，且往往是肝炎恢復(fù)期最后降至正常的酶，是判斷急性肝炎是否恢復(fù)的一個(gè)很好指標(biāo)。同時(shí)測(cè)定并計(jì)算AST/ALT比值（DeRitis比值），對(duì)急、慢性肝炎的診斷和鑒別診斷以及判斷肝炎的轉(zhuǎn)歸有特別價(jià)值。急性肝炎是時(shí)DeRitis比值1，肝硬化時(shí)DeRitis比值2，肝癌時(shí)DeRitis比值3。應(yīng)特別注意的是，重癥肝炎時(shí)由于大量肝細(xì)胞壞死，血中ALT可僅輕度增高，臨終時(shí)常明顯下降，但膽紅素卻進(jìn)行性升高，出現(xiàn)所謂“酶膽分

5、離”現(xiàn)象，常是肝壞死的前兆。除肝炎外，心臟、骨骼肌等組織受損及其他肝膽疾病如膽石癥、膽囊炎、肝癌和肝淤血時(shí)血液ALT水平也可升高。有些藥物如異煙肼、利福平、氯丙嗪、地巴唑等也可引起血中ALT升高。但一般而言，這些疾病ALT升高很少超過(guò)10ULN，常以400U/L為界，超過(guò)此值絕大多數(shù)可診斷為肝炎。二、門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶及其同工酶的測(cè)定門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（L-Aspartate aminotransferse，AST），俗稱(chēng)為谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT），廣泛分布于全身各組織，尤其以心臟、肝臟、骨骼肌、腎臟中最豐富。與ALT不同，它在細(xì)胞內(nèi)定位于線粒體（m-AST）和胞漿（c-AST）中。主要催化門(mén)冬氨

6、酸和-酮戊二酸之間的氨基轉(zhuǎn)移反應(yīng)。（一）適應(yīng)癥主要用于疾病的診斷和鑒別，疾病期的監(jiān)測(cè)和治療效果的監(jiān)測(cè)。如心肌梗死、肝膽疾病、骨骼肌損傷、藥物的篩查等。（二）測(cè)定方法AST與ALT的測(cè)定方法和方法演變大同小異。國(guó)內(nèi)外實(shí)驗(yàn)室多采用IFCC推薦的方法對(duì)AST進(jìn)行測(cè)定。m-AST的測(cè)定方法很多，有電泳法、免疫沉淀法、層析法、動(dòng)力學(xué)方法等。前兩者臨床使用較多。AST測(cè)定原理（三）臨床意義AST以往多用于AMI的診斷。AMI發(fā)病68h即升高，4860h達(dá)到高峰，4d5d恢復(fù)正常。但由于AST在AMI 時(shí)升高遲于CK，恢復(fù)早于LD，故診斷AMI價(jià)值不大。肝中AST含量雖低于心肌，但絕對(duì)含量（U/mg）仍高于

7、ALT。肝中AST和ALT含量比值約為2.5：1.0。但由于ALT主要存在于細(xì)胞質(zhì)中，AST主要存在于線粒體中，肝臟疾病病變較輕時(shí)，如急性肝炎，血中AST雖亦顯著升高，但升高程度不及ALT；但在慢性肝炎，特別是肝硬化時(shí)，病變累及線粒體，此時(shí)AST升高程度超過(guò)ALT。故對(duì)疑是肝炎患者時(shí)，常同時(shí)測(cè)AST和ALT，并計(jì)算AST/ALT比值。m-AST在判斷肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞的損害程度、急慢性肝病的鑒別等方面有一定價(jià)值。三、-谷氨?；D(zhuǎn)移酶及其同工酶的測(cè)定-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（L-glutamyltransferase，-GT或GGT）又稱(chēng)-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（-GTP或GGTP），是一種含巰基的線粒體酶。-GT是催化-

8、谷氨?；D(zhuǎn)移反應(yīng)的一種酶，參與體內(nèi)谷胱甘肽的代謝。主要分布在腎、胰、肝、腸和前列腺中，血液中的-GT主要來(lái)源于肝膽，以多種形式存在，在紅細(xì)胞中含量甚低。-GT具有多種含量不同的唾液酸、帶電性質(zhì)不同的分子形式。（一）適應(yīng)癥主要用于肝膽管疾病的診斷、鑒別診斷和監(jiān)測(cè)；結(jié)合其他實(shí)驗(yàn)監(jiān)測(cè)慢性酒精中毒。（二）測(cè)定方法國(guó)內(nèi)外實(shí)驗(yàn)室多采用IFCC參考方法測(cè)定-GT。-GT同工酶目前主要用電泳法來(lái)測(cè)定，但使用不同支持物進(jìn)行電泳，分離出來(lái)的同工酶區(qū)帶數(shù)量和位置可以不同。-GT測(cè)定原理 式中GCNA為L(zhǎng)-谷氨酰-3-羧基-對(duì)硝基苯胺，雙甘肽為甘氨酰甘氨酸；產(chǎn)物2-硝基-5-氨基苯甲酸為黃色，在410nm波長(zhǎng)處直接連

9、續(xù)監(jiān)測(cè)，吸光度的增高速率與-GT活性成正比關(guān)系。（三）臨床意義-GT是肝臟和膽管中一種特異性酶，肝膽疾病的檢出陽(yáng)性率最高。肝膽疾病檢出陽(yáng)性率-GT（95）ALT（83）膽堿酯酶，如同時(shí)測(cè)此三種酶，陽(yáng)性率可達(dá)99。膽道疾病，如膽石癥、膽道炎癥、肝外梗阻時(shí)，-GT不僅陽(yáng)性率高，而且升高明顯，可高達(dá)530ULN。肝實(shí)質(zhì)疾病，如肝炎、脂肪肝、肝硬化時(shí)-GT一般只是中度升高（ULN的25倍），這點(diǎn)有助于肝膽疾病的鑒別診斷。若ALP升高而-GT正?？赏耆懦鼳LP的肝來(lái)源，若ALP和-GT均增加，則應(yīng)先排除肝外引起-GT增加的原因，一旦排除，則-GT增高即為肝病所致。-GT 還可用于判斷惡性腫瘤有無(wú)肝轉(zhuǎn)移

10、，腫瘤患者如有-GT 的升高，常說(shuō)明有肝轉(zhuǎn)移可能。乙醇可對(duì)肝細(xì)胞線粒體進(jìn)行誘導(dǎo)導(dǎo)致-GT活性升高，故對(duì)乙醇性中毒的判定有相當(dāng)?shù)膬r(jià)值。四、肌酸激酶及其同工酶測(cè)定肌酸激酶（Creatine Kinase, CK），以前稱(chēng)肌酸磷酸激酶（CPK），主要分布于肌肉組織（骨骼肌、心肌和平滑?。┖湍X組織中?？纱呋吣芰姿徭I在肌酸和ATP之間轉(zhuǎn)換，生成磷酸肌酸和ADP的可逆反應(yīng)。含高能磷酸鍵的磷酸肌酸是肌肉收縮時(shí)能量的直接來(lái)源。CK分子為二聚體，由M和B兩個(gè)亞基構(gòu)成，可組成CK-MM，CK-MB，CK-BB三種同功酶。骨骼肌中幾乎都是CK-MM；平滑肌中CK-BB含量相對(duì)較高，腦中CK-BB含量明顯高于其他組

11、織；心肌是唯一含CK-MB較多的器官。（一）指征主要用于心肌和骨骼肌疾病的輔助診斷和監(jiān)測(cè)，尤其是有臨床和ECG表示的典型心肌梗死、介入療法有禁忌證的患者、治療血栓溶解的評(píng)價(jià)、依據(jù)WHO判斷標(biāo)準(zhǔn)排除心肌梗死、對(duì)心絞痛患者危險(xiǎn)分級(jí)、心肌炎等。也用于監(jiān)測(cè)癌癥患者的治療。（二）測(cè)定方法CK的測(cè)定方法有比色法、紫外分光光度法和熒光法等。由于以磷酸肌酸為底物的逆向反應(yīng)速度為正向反應(yīng)速度的6倍，所以采用逆向反應(yīng)進(jìn)行測(cè)定較為普及。如肌酸顯色法和酶偶聯(lián)法，其中后者最常用，為國(guó)內(nèi)外測(cè)定CK的參考方法。CK同工酶多用電泳和免疫抑制法測(cè)定，但兩法均會(huì)受溶血和巨CK的干擾，免疫抑制法還會(huì)受到CK-BB的干擾。因此現(xiàn)在推

12、薦用免疫化學(xué)方法直接測(cè)定CK-MBmass，可不受溶血和巨CK的干擾。CK同工酶亞型（CK-MM亞型和CK-MB亞型）多用瓊脂糖凝膠高壓電泳和等電聚焦電泳等。CK測(cè)定原理（三）臨床意義CK及其同工酶和亞型是目前臨床上測(cè)定次數(shù)最多的酶，主要用于心肌、骨骼肌和腦疾患的診斷和鑒別診斷及預(yù)后判斷。AMI時(shí)總CK活性升高顯著，約在梗死后38h即升高，1024h達(dá)峰值，3d4d恢復(fù)正常。CK極度升高（3 000U/L）主要見(jiàn)于全身疾病，特別是肌肉疾病，此時(shí)CK 測(cè)定有助于肌萎縮病因的鑒別，如進(jìn)行性肌萎縮時(shí)可見(jiàn)CK顯著升高。此外，病毒、細(xì)菌、寄生蟲(chóng)感染引起的肌肉感染性疾?。ㄈ缧募⊙?、皮肌炎等），都能引起CK

13、升高。但神經(jīng)疾病引起的肌萎縮，CK活性一般正常。五、乳酸脫氫酶及其同工酶的測(cè)定乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase，LD或LDH）存在于所有體細(xì)胞的胞漿中，以腎、心和骨骼肌中含量最為豐富。主要催化乳酸和丙酮酸之間的氧化還原反應(yīng)。LD是由M和H亞基組成的四聚體，共形成5種結(jié)構(gòu)不同的同功酶。按電泳向陽(yáng)極泳動(dòng)快慢，分別命名為L(zhǎng)D1(H4)，LD2(H3M)，LD3(H2M2)，LD4(HM3)和LD5(M4)。LD1主要分布在心肌，可占總LD1活性50%以上，也存在于紅細(xì)胞內(nèi)；LD5主要存在于橫紋肌和肝臟；LD3主要存在于脾、肺。（一）適應(yīng)癥主要用于以下情況，懷疑心肌梗死或心肌梗死

14、的檢測(cè)；懷疑肺栓塞；區(qū)分黃疸；懷疑溶血性貧血；診斷器官損傷；惡性疾病的診斷和隨訪。（二）測(cè)定方法根據(jù)LD催化反應(yīng)方向的不同，有兩類(lèi)檢測(cè)方法：以丙酮酸為底物（反應(yīng)方向PL）的逆向反應(yīng)（稱(chēng)LD-P法）；以乳酸為底物（反應(yīng)方向LP）的順向反應(yīng)（稱(chēng)LD-L法）。其中后者為IFCC推薦方法，目前國(guó)內(nèi)多使用該方法。LD同工酶測(cè)定常用電泳法、免疫沉淀法和免疫抑制法等。目前以瓊脂糖凝膠電泳法更多用。一般成年人存在如下規(guī)律：LD2LD1LD3LD4LD5，部分正常兒童血中可見(jiàn)LD1LD2。LD測(cè)定原理 （三）臨床意義臨床上測(cè)定LD及其同工酶常用于診斷和鑒別診斷心、肝和骨骼肌的疾病。AMI時(shí)，LD由于分子量較大，

15、在常用心肌酶中升高最遲，通常在梗死818h升高，48144h達(dá)峰值，可顯著升高5ULN；因其半壽期較長(zhǎng)，增高持續(xù)時(shí)間可達(dá)5d10d，此時(shí)其他酶已恢復(fù)正常，在亞急性心肌梗死診斷上有一定價(jià)值。但其診斷AMI特異性差，肝炎、白血病、溶血性貧血及晚期惡性腫瘤等均可有不同程度升高，中度升高3ULN5ULN。另外運(yùn)動(dòng)后、腎病綜合征、肝病、膽道炎、甲狀腺機(jī)能減退等可呈現(xiàn)輕度升高3ULN。心肌梗死和心肌炎時(shí)以LD1和LD2升高為主，且絕大多數(shù)的AMI患者血中LD同工酶都出現(xiàn)LD1/ LD21，即所謂“反轉(zhuǎn)比率”（flipped LD ratio）現(xiàn)象，且持續(xù)的時(shí)間長(zhǎng)。骨骼肌和肝細(xì)胞損傷時(shí)常出現(xiàn)LD5LD4。肺

16、、胰、脾、淋巴結(jié)壞死和炎癥及各種惡性疾病時(shí)LD2、LD3、LD4升高；溶血性疾病、鐮形細(xì)胞性貧血、地中海貧血、體外循環(huán)術(shù)后引起溶血、陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿時(shí)均有LD1和LD2升高，但仍為L(zhǎng)D2LD1；惡性腫瘤如轉(zhuǎn)移到肝臟往往伴有LD4、LD5升高。六、堿性磷酸酶及其同工酶的測(cè)定堿性磷酸酶（Alkaline phosphatase，ALP）是一組底物特異性較低，在堿性條件下能水解磷酸單酯化合物的酶。廣泛分布于機(jī)體各器官組織，在肝、腎、胎盤(pán)、小腸、骨骼等組織含量較高。成人血液中的ALP主要來(lái)源于肝臟，小部分來(lái)源于骨骼。ALP同工酶分為四型：腸型（IAP）、生殖細(xì)胞型（GCAP）、胎盤(pán)型（PALP）

17、和非特異組織型（TUAP）。非特異組織型是在酶蛋白合成后，經(jīng)過(guò)不同形式的修飾和加工，形成的肝型、膽型、腎型、骨骼型等酶的多種形式。臨床價(jià)值較大的同工酶及酶多種形式有骨骼型、Regan和高分子型等。（一）適應(yīng)癥肝膽疾病和骨病的診斷和監(jiān)測(cè)，如梗阻性黃疸、膽汁性肝硬變、佝僂病、骨軟化癥等；以及家族性磷酸酶過(guò)少癥、透析患者的骨缺乏性疾病、甲狀腺功能底下、軟骨發(fā)育不良、營(yíng)養(yǎng)不良等。（二）測(cè)定堿性磷酸酶ALP的測(cè)定方法有多種，磷酸苯二鈉比色法（King-Amstrong法）曾在我國(guó)應(yīng)用較廣。目前國(guó)內(nèi)應(yīng)用較多的方法為中華醫(yī)學(xué)會(huì)推薦法。測(cè)定原理式中4-NPP為磷酸對(duì)硝基酚，AMP 為2-氨基-2-甲基-1-丙

18、醇，4-NP為對(duì)硝基苯酚。后者在堿性溶液中為黃色。在波長(zhǎng)405nm處連續(xù)監(jiān)測(cè)吸光度增高速率，計(jì)算ALP活性。（三）臨床意義臨床上測(cè)定ALP主要用于骨骼、肝膽系統(tǒng)疾病等的診斷和鑒別診斷，尤其是黃疸的鑒別診斷。對(duì)于原因不明的高ALP血液水平，可測(cè)定同工酶以協(xié)助明確其器官來(lái)源。應(yīng)注意在骨生長(zhǎng)、妊娠、成長(zhǎng)、成熟和脂肪餐后分泌等生理情況下，ALP活性也可增高。ALP和骨化過(guò)程密切相關(guān)，很多骨骼疾病，如變形性骨炎（Paget病）、副甲狀旁腺功能亢進(jìn)、佝僂病、軟骨癥、原發(fā)性和繼發(fā)性骨腫瘤、骨折和肢端肥大癥的患者血中ALP都可升高，尤其是骨ALP同工酶增高。急性肝炎包括病毒性肝炎和中毒性肝炎，ALP增高達(dá)2

19、ULN5ULN，而肝硬化、膽石癥和腫瘤引起的膽汁淤積，ALP增高達(dá)ULN的520倍。90%以上的肝外膽道阻塞患者血液ALP升高，升高的程度常和阻塞程度及病程成正比。如果血液中ALP持續(xù)低值，則阻塞性黃疸的可能性很小。若血液膽紅素逐漸升高，而ALP不斷下降表示病情惡化。肝外阻塞性黃疸、轉(zhuǎn)移性肝癌、肝膿腫和膽石癥時(shí)膽汁ALP檢出率很高，并伴有肝ALP增加，而肝內(nèi)膽汁淤積、急性肝炎、原發(fā)性肝癌等主要表現(xiàn)為肝ALP增多，大多數(shù)不出現(xiàn)膽汁ALP。七、酸性磷酸酶及其同工酶酸性磷酸酶（Acid phosphatase,ACP）是一組作用類(lèi)似ALP的磷酸酶，不同點(diǎn)是最適pH偏酸，從pH4.57.0。它幾乎存在

20、于體內(nèi)所有細(xì)胞中，如前列腺、紅細(xì)胞、血小板、腎臟、肝臟、脾臟、胃、肌肉及骨髓等，以前列腺含量最多。正常男性血液中ACP 約有1/3和1/2來(lái)自前列腺，其余部分和女性血中ACP可能來(lái)自血小板或破骨細(xì)胞。ACP同工酶分前列腺ACP（PAP）和非前列腺ACP（如紅細(xì)胞ACP、溶酶體ACP、破骨細(xì)胞或吞噬細(xì)胞ACP等）兩大類(lèi)。（一）適應(yīng)癥主要用于前列腺癌、骨腫瘤和轉(zhuǎn)移的診斷和鑒別診斷。（二）測(cè)定方法ACP的測(cè)定底物、原理和方法與ALP 相似，只是反應(yīng)pH為酸性。如利用磷酸苯二鈉法和磷酸對(duì)硝基酚法等在酸性條件下測(cè)定ACP。國(guó)外多推薦使用磷酸百里酚酞為底物的比色法，因?yàn)榍傲邢貯CP對(duì)此底物親合力高，測(cè)定結(jié)

21、果基本能反映ACP含量高低。不同方法參考值也不同。此外還可通過(guò)用L-酒石酸這類(lèi)抑制劑鑒別和估量PAP活性。由于ACP不穩(wěn)定，酶活性測(cè)定困難，目前已發(fā)展一些免疫學(xué)方法特異而靈敏地測(cè)定ACP特別是PAP。（三）臨床意義總ACP升高可作為前列腺癌、骨疾病或網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)疾病的診斷指標(biāo)。前列腺癌時(shí)血液ACP活性顯著升高，轉(zhuǎn)移性癌患者可達(dá)4050ULN。急性尿潴留、變形性骨炎、癌腫骨轉(zhuǎn)移及甲亢時(shí)ACP可輕度升高。前列腺癌患者血液PAP也明顯增高，其中腫瘤分化較好者增高尤為顯著。此外，慢性粒細(xì)胞性白血病PAP增高，而高雪病、尼曼匹克病、網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞白血病或毛細(xì)胞性白血病均為非PAP增高。是否為抗酒石酸鹽的非

22、PAP增高為毛細(xì)胞性白血病的重要鑒別要點(diǎn)。八、淀粉酶酶及其同工酶的測(cè)定-淀粉酶（-Amylase，AMY或AMS）即1，4-D-葡萄糖4-葡聚糖水解酶，作用于-1，4糖苷鍵，是一種鈣依賴(lài)性金屬蛋白酶，鹵素和其他陰離子有激活作用。主要存在于胰腺和唾液腺中。AMY有兩種同工酶，即唾液型（S-AMY）和胰腺型（P-AMY），又可以分為多種亞型，S1、S2、S3、S4、和P1、P2、P3，淀粉酶分子量小，可以從腎小球?yàn)V過(guò)出現(xiàn)在尿液中。有時(shí)淀粉酶與抗淀粉酶自身抗體形成高分子復(fù)合物，稱(chēng)為巨型淀粉酶。（一）適應(yīng)癥急性胰腺炎的檢測(cè)和排除，如出現(xiàn)急性上腹疼痛時(shí)；慢性（復(fù)發(fā)性）胰腺炎；胰管阻塞；腹部不適、外科手術(shù)

23、、厭食和食欲過(guò)盛涉及的檢查；逆行膽胰造影后的隨訪；腮腺炎（流行性、消瘦性、酒精性）。（二）測(cè)定方法AMY活性測(cè)定方法可分為粘度測(cè)量法、比濁法、碘量法、糖化法和染料釋放法5種。目前國(guó)內(nèi)外臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用較多的是以麥芽多糖為底物的方法，如2-氯-對(duì)硝基苯麥芽三糖苷（CNP-G3）和亞乙基封閉的對(duì)硝基苯麥芽庚糖苷（4NP-G7）法（亦稱(chēng)EPS 法），以后者最常用，也是IFCC的推薦方法。測(cè)定原理式中G為葡萄糖，4NP為對(duì)硝基酚（黃色）。對(duì)硝基苯酚的生成量在一定范圍內(nèi)與AMY活性成正比，在405nm可以進(jìn)行連續(xù)監(jiān)測(cè)即可測(cè)出AMY的活性。（三）臨床意義臨床上測(cè)定血液AMY主要用于診斷急性胰腺炎，此酶常在腹

24、痛后23h 開(kāi)始升高（也有延至12h后升高者），多在1224h 達(dá)峰值，25d下降至正常。峰值一般為4ULN6ULN，最高可達(dá)40倍。此值的高低和疾病預(yù)后關(guān)系不大，但此值愈高，急性胰腺炎的可能性就愈大，約在34天內(nèi)AMY活性恢復(fù)正常。如持續(xù)性升高達(dá)數(shù)周，常提示胰腺炎有反復(fù)，或有并發(fā)癥發(fā)生。尿AMY約于發(fā)病后1224h開(kāi)始升高，下降也比血液AMY慢，因此在急性胰腺炎后期測(cè)定尿AMY更有價(jià)值。唾液腺疾病如腮腺炎患者血AMY也可升高，但臨床上不難鑒別，且主要為S-AMY升高，有別于胰腺炎以P-AMY升高為主。進(jìn)一步測(cè)定AMY同工酶，發(fā)現(xiàn)在腮腺、骨骼肌、輸卵管、子宮、胃和肺內(nèi)并無(wú)P-AMY，只含S-A

25、MY，而胰腺和睪丸內(nèi)無(wú)S-AMY，只含P-AMY。因此，上述組織損傷時(shí)，血液中必然有不同的同工酶水平升高。急性胰腺炎、服用嗎啡可顯著升高(5ULN)；胰腺癌、腎衰竭、十二指腸潰瘍、腸穿孔、急性膽囊炎、尿毒癥、糖尿病、易位妊娠等可中度升高(35ULN)。九、脂肪酶脂肪酶（lipase，LPS）又稱(chēng)三脂酰甘油脂酰水解酶或甘油三酯酶，是胰腺外分泌酶。LPS可被巰基化合物、膽汁酸、Ca2+及輔脂肪酶（colipase）等激活劑激活，而被重金屬、絲氨酸所抑制。血液中LPS主要來(lái)自胰腺，少量來(lái)自胃腸黏膜。（一）適應(yīng)癥急性胰腺炎的檢測(cè)和排除，如出現(xiàn)急性上腹疼痛時(shí)；慢性（復(fù)發(fā)性）胰腺炎；胰管阻塞；腹部疾病累及

26、胰腺的檢查。（二）測(cè)定方法迄今測(cè)定LPS的方法可分為3類(lèi)：測(cè)定產(chǎn)物（游離脂肪酸）的增加（如滴定法、比色法、分光光度法、熒光法和pH電極法等）；測(cè)定底物的減少量（如比濁法、擴(kuò)散法等）；測(cè)定LPS的實(shí)際質(zhì)量（雙抗體夾心免疫分析法、乳膠凝集法）。目前在國(guó)內(nèi)大多實(shí)驗(yàn)室主要以滴定法、比濁法和分光光度法為主。（三）臨床意義正常人血液LPS 含量極少，但在急性胰腺炎時(shí)，212h血液LPS顯著升高，24h至峰值，可達(dá)10ULN，甚至5060ULN，至4872h可能恢復(fù)正常，但隨后又可持續(xù)升高815d。由于血液LPS在急性胰腺炎時(shí)活性升高的時(shí)間早，上升的幅度的大，持續(xù)的時(shí)間長(zhǎng)，故其診斷價(jià)值優(yōu)于AMY。臨床觀察發(fā)現(xiàn)，凡血液AMY升高的病例，其LPS均升高；而LPS升高者AMY不一定升高，約有2/3AMY正常的胰腺炎病人，其LPS正常；非胰腺炎的急腹癥有血液AMY升高而LP