實驗三雙水相萃取茶葉中茶多酚

1、實驗三雙水相萃取茶葉中茶多酚一、實驗?zāi)康?掌握雙水相萃取的原理及其萃取茶多酚的操作二、實驗原理雙水相萃取技術(shù)是指把兩種聚合物或一種聚合物與一種鹽的水溶液混合在一起，由于聚 合物與聚合物之間或聚合物與鹽之間的不相溶性形成兩相，溶質(zhì)（包括蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)、 稀有金屬以及貴金屬的絡(luò)合物、中草藥成分等）在雙水相體系中服從Nernst分配定律。因此 雙水相萃取在生物工程、藥物分析、金屬分離和分離環(huán)境污染物等方面具有廣泛的應(yīng)用。茶多酚又叫茶單寧，是茶葉中多酚類物質(zhì)的總稱，具有很強的抗氧化和捕獲自由基作用， 是許多中草藥的有效成分。開展茶葉的綜合利用，尤其是利用低檔茶葉或茶葉加工的下腳料 來生產(chǎn)高附加值茶

2、多酚的研究成為國內(nèi)外開發(fā)“綠色工程”的熱門課題之一。提取茶多酚的主要 方法有溶劑萃取法、樹脂吸附分離法、離子沉淀法、超聲波浸提法、超臨界流體萃取法、微 波浸提法等。雙水相萃取依據(jù)組分在兩相間的選擇性分配實現(xiàn)目標成分的分離，因其萃取分 離過程條件溫和，可調(diào)節(jié)因素多，易于放大和操作，特別適用于生物物質(zhì)的分離和提純。有研究表明異丙醇、乙醇等低成本的普通有機物與無機鹽和水以適當濃度混合時，也能 形成雙水相體系。茶多酚在乙醇/磷酸氫二鉀雙水相體系的上下相中的不同分配情況，茶多酚 在上相中富集，這樣由于茶多酚上下相中含量的差異，可以獲得較高茶多酚萃取率。三、實驗用品儀器：250mL燒杯；1mL移液管；25

3、mL容量瓶；玻璃棒；恒溫水浴鍋；50mL帶蓋離心 管；離心機；電子天平；紫外可見分光光度計。試劑：綠茶；無水乙醇；酒石酸鉀鈉；磷酸二氫鉀；磷酸氫二鉀；硫酸亞鐵。四、實驗方法配置溶液：1.1酒石酸亞鐵溶液：稱取1g（準確至0.0001）硫酸亞鐵，5g酒石酸鉀鈉（準確至0.0001），用水 溶解并定容至1L（低溫保存，有效期10天）。1.2 pH為7.5的磷酸緩沖溶液：取磷酸二氫鉀1.36g，加0.1mol/L氫氧化鈉溶液79ml，用水 稀釋至200ml，即得。茶多酚粗提液的制備稱取20 g茶葉放入燒杯中，加入200 mL的蒸餾水，攪拌下開始加熱，溫度達到80度時 保持30 min，放置至室溫備用

4、。雙水相體系的建立取10mL的茶葉提取液，加入到10mL配置好的80%乙醇與磷酸氫二鉀水溶液（0.33g/mL） 的雙水相溶液中，搖勻后離心，靜置觀察分相情況。茶多酚的檢測采用酒石酸亞鐵法（國標GB 8313-87）定量分析茶多酚的上相（富含乙醇水相）提取液，萃取 體系中的c2h5oh和磷酸氫二鉀對測定結(jié)果的干擾很小。4.1分相后上相中茶多酚的吸光度準確吸取1.0 mL分相后上相溶液，加入到25 mL的容量瓶中，然后依次加入4mL的蒸 餾水和5 mL的酒石酸亞鐵溶液，充分混合后，加入磷酸緩沖溶液搖勻定容。用10 mm的比 色皿，在波長540nm處，以試劑空白溶液作參比，測定溶液的吸光度。測定兩次，取平均值。4.2分相前提取液中茶多酚的吸光度方法同操作3和4.1，測定兩次，取平均值。萃取率的計算萃取率=分