去甲斑蝥素鈉小鼠體內(nèi)組織分布研究

1、去甲斑蝥素鈉小鼠體內(nèi)組織分布研究【摘要】本文建立快速靈敏的HPLC-MS/MT法測(cè)定血漿和組織中去甲斑螫素鈉的濃度，研究去甲斑蝥素鈉小鼠體內(nèi)組織分布。【關(guān)鍵詞】去甲斑蝥素鈉 體內(nèi)組織 分布實(shí)驗(yàn)方法儀器與試藥儀器 Agilent 1200 Series/6410 Series HPLC/MS/MS高效液相色 / 質(zhì)譜儀（安捷倫科學(xué)技術(shù)公司） ; 梅特勒 - 托利多 AX -205 電子天平（梅特勒- 托利多儀器上海有限公司）；PROIND離心機(jī)（賀立氏）；XW-80A型旋渦混合器（上海精科實(shí)業(yè)有限公司）；PK514BP超聲清洗器（德國(guó) BANDEL , BHW-IV型電熱恒溫水溫箱（北京醫(yī)療設(shè)備

2、 廠）。藥品 去甲斑蝥素鈉，實(shí)驗(yàn)室自制，純度99.4%; 去甲斑蝥素標(biāo)準(zhǔn)品由山東莒南制藥廠提供 ; 利巴韋林標(biāo)準(zhǔn)品（純度），中國(guó)藥品生物制品檢定所。試劑乙腈，批號(hào)501287; 乙酸銨，批號(hào) 110020; 甲酸，批號(hào)406014; 丙酮，批號(hào)405160均為色譜純，美國(guó) TEDIA COMPANYINC生產(chǎn)。標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備去甲斑蝥素鈉和利巴韋林儲(chǔ)備液及標(biāo)準(zhǔn)系列的配制同前。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昆明種小白鼠，體重252克，雌雄各半，購(gòu)于山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)于給藥后 0.25 ， 1， 2， 4， 8 h 經(jīng)摘眼球取血后脫頸處死小鼠，取出心、肝、脾、肺、腎、腦、腸、胃、睪丸/ 子宮，組織用生理鹽水沖

3、洗干凈后用濾紙吸干，- 20保存待測(cè)。樣本分析色譜條件C18色譜柱（150X 4.6 mm, 5 （成；流動(dòng)相乙睛-水（20: 80, 2 mM乙酸鏤, 含0.1%甲酸）；在線脫氣，流速1.0 mL min-1;柱溫25C;進(jìn)樣量10八。質(zhì)譜條件AP-ESI離子源，正離子模式，干燥氣（N2）流速12.0 L min-1 ,干燥氣 壓力50 psi ,干燥氣溫度為350C,毛細(xì)管電壓 4000 V,多級(jí)反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM模式，選 擇性離子對(duì)（M/Z）為16g 123 （去甲斑螫素鈉）和 267.1-135.1 （內(nèi)標(biāo)利巴韋林），碎 片電壓分別為 120 V 和 170 V ，碰撞能分別為5 eV

4、和 13eV。組織樣品處理 取動(dòng)物臟器，精密稱重，剪碎后按2 mg-1比例加入生理鹽水，冰浴條件下用組織勻漿機(jī)進(jìn)行勻漿。取組織勻漿液0.3 mL,置離心管中，加10 (g-mL1利巴韋林溶液30 (L (心、脾、腦組織加 1 (g-mL-1利巴韋林溶液30 (L),渦旋30 秒，加入100 (L 1MHC1,渦旋30秒，然后加入1 mL丙酮渦旋1 min , 5000r min-1離 心10 min ,取上清液1 mL置離心管中，40c氮?dú)獯蹈?，殘留物?00 (L水復(fù)溶，取10( L 進(jìn)樣測(cè)定。數(shù)據(jù)處理組織分布參數(shù)計(jì)算根據(jù)計(jì)算得到的組織中藥物濃度- 時(shí)間數(shù)據(jù)，計(jì)算藥時(shí)曲線下面積AUC MRT

5、結(jié)合Cmax Tmax等參數(shù)考察藥物在體內(nèi)組織分布情況及動(dòng)力學(xué)過(guò)程。結(jié)果組織稱重及處理將給藥后 0.25 ， 1， 2， 4， 8 h 采集的組織樣本經(jīng)生理鹽水沖洗，濾紙吸干后用電子 天平精密稱量，稱重原始數(shù)據(jù)。小鼠組織中去甲斑蝥素鈉濃度- 時(shí)間數(shù)據(jù)根據(jù)HPLC-MS/MSfe測(cè)定得到的組織中去甲斑螫素鈉的濃度和精密稱量的組織重量， 計(jì)算每克組織中藥物含量(w g - g -1 ) =C測(cè)V/W稱，其中C測(cè)為測(cè)定得到組織勻漿中去 甲斑螫素鈉濃度(g mL-1 ) ;V為所加生理鹽水體積(mD ;亞稱為組織重量。由結(jié)果看出，小鼠灌胃給予去甲斑蝥素鈉溶液后，在各組織中分布廣泛，給藥后不同時(shí)間點(diǎn)各組

6、織中藥物濃度依次為：0.25h，小腸 子宮胃 腎睪丸 月肺心脾腦;加，胃小腸子宮腎肝睪丸肺 心脾 腦;2h，小腸 胃子宮 腎睪丸 月脾肺心腦;4卜， 腎小腸 肝子宮 胃睪丸 肺心脾腦;8 h ，小腸子宮 胃肝睪丸 腎肺脾心腦。組織中藥物濃度- 時(shí)間分布圖根據(jù)各組織平均濃度- 時(shí)間數(shù)據(jù)繪制組織中藥物濃度- 時(shí)間分布圖。由結(jié)果可知，除脾臟是1 h 達(dá)峰外，去甲斑蝥素鈉在其他組織均在15 min 達(dá)到最高濃度，然后隨時(shí)間逐漸降低; 給藥后 4 h ，在心、肝、肺、腎的濃度再次升高，隨后降低;而腦、胃、睪丸、子宮隨時(shí)間濃度逐漸降低。去甲斑蝥素鈉在腸、胃和子宮的分布最高，腎和睪丸次之，在心、肝、脾和肺的

7、分布 較低，腦中藥物量極低。組織藥 - 時(shí)曲線下面積和平均滯留時(shí)間數(shù)據(jù)根據(jù)DAS 2.0計(jì)算小鼠灌服去甲斑螫素鈉溶液后各組織藥-時(shí)曲線下面積（AUC和平均滯留時(shí)間（MRT ,以AUE指標(biāo)進(jìn)一步分析去甲斑螫素鈉在小鼠組織的分布，以 MRT 為指標(biāo)分析去甲斑蝥素鈉在小鼠組織的消除情況。由結(jié)果可知，給藥后各組織藥時(shí)曲線下面積依次為：小腸胃 子宮 腎 睪丸 肝肺 脾心腦。給藥后各組織體內(nèi)平均滯留時(shí)間依次為：肺肝睪丸 腦脾腎子宮 心胃小腸。討論給藥后各組織藥時(shí)曲線下面積依次為：小腸胃 子宮 腎 睪丸肝肺 脾 心腦。給藥后各組織體內(nèi)平均滯留時(shí)間依次為：肺肝睪丸腦脾腎子宮心胃小腸。由此可以看出，去甲斑蝥素鈉

8、在胃、小腸等消化道組織中分布最高，為其在消化道癌癥的臨床應(yīng)用提供藥動(dòng)學(xué)理論依據(jù); 其次，子宮中去甲斑蝥素鈉的分布較多，體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)去甲斑蝥素對(duì)宮頸癌（HeLa）具有較強(qiáng)的抗癌作用，但臨床在子宮癌或?qū)m頸癌的應(yīng)用較少，可以此為理論基礎(chǔ)增加其臨床適應(yīng)癥; 去甲斑蝥素鈉在腎中的分布仍較高，臨床表現(xiàn)為泌尿系統(tǒng)刺激性 ; 去甲斑蝥素鈉在臨床主要用于肝癌的治療，但實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明肝中去甲斑蝥素鈉的濃度較低 ; 藥物在睪丸、肺、脾、心和腦的分布較低，特別是腦組織中的濃度極低，說(shuō)明 其不易透過(guò)血腦屏障，與其極性大、脂溶性低有關(guān)。給藥后各組織體內(nèi)平均滯留時(shí)間依次為：肺肝睪丸 腦脾腎子宮心胃小腸，其在肺和肝中的滯留時(shí)間較長(zhǎng)，消除比較慢，可以增強(qiáng)藥物的療效，因此臨床常用于肝癌的治療。從兩項(xiàng)結(jié)果可以看出，去甲斑蝥素鈉在分布較高組織滯留時(shí)間較短，分布較低的組織 滯留時(shí)間較長(zhǎng)，決定其在臨床上作用廣泛。參考文獻(xiàn)：董成 .