課題3　分解纖維素的微生物的分離 (2)

1、課題3 分解纖維素的微生物的分離吳江汾湖高級中學(xué)計春娟1簡述纖維素酶的種類及作用2說出剛果紅染色法及其原理3掌握從土壤中分離出分解纖維素的微生物的方法、了解這類微生物的應(yīng)用復(fù)習(xí)目標一、纖維素與纖維素酶纖維素纖維素酶組成分布作用探究活動一由葡萄糖組成的多聚體由C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶組成的復(fù)合酶棉花、木材、作物秸稈等微生物細胞內(nèi)與果膠構(gòu)成植物的細胞壁水解纖維素【即時訓(xùn)練】下列關(guān)于纖維素酶的敘述中，錯誤的是( )A.纖維素酶只有一種，只能將纖維素分解為葡萄糖B.纖維素酶是一種復(fù)合酶，至少包括C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶三種組分C.纖維素可被纖維素酶水解成葡萄糖，為微生物提供營養(yǎng)物質(zhì)D.分解纖維素的

2、細菌、真菌和放線菌，都是通過產(chǎn)生纖維素酶來分解纖維素的A纖維素分解菌二、纖維素分解菌的篩選1.方法： 方法一和方法二各自的優(yōu)缺點 2.原理：探究活動二方法一中NaCl溶液的作用？二、纖維素分解菌的篩選1.方法： 2.原理：剛果紅纖維素分解菌剛果紅倒平板紅色纖維素分解菌NaCl的作用：漂洗，洗去結(jié)合不牢的剛果紅染色法優(yōu)點缺點方法一方法二顏色反應(yīng)基本上是纖維素分解菌的作用操作繁瑣剛果紅會使菌落之間發(fā)生混雜操作簡便、不存在菌落混雜問題1.產(chǎn)生淀粉酶的微生物也產(chǎn)生模糊透明圈2.有些微生物能降解色素，形成明顯的透明圈。R代表透明圈的直徑r代表菌落的直徑一般挑選R/r的比值最大的菌落Rr透明圈大小與纖維素

3、酶的量與活性有關(guān)三、實 驗 設(shè) 計土壤取樣選擇培養(yǎng)梯度稀釋 將樣品涂布在鑒別纖 維素分解菌的培養(yǎng)基上 篩選產(chǎn)生透 明圈的菌落探究活動三三、分離分解纖維素的微生物的實驗設(shè)計流程： 纖維素纖維素梯度稀釋鑒別培養(yǎng)基涂布平板透明圈纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)基組成提供主要的營養(yǎng)物質(zhì)纖維素粉 5gNaNO3 1gKCl 0.5g Na2HPO47H2O 1.2gKH2PO4 0.9g MgSO4 7H2O 0.5g酵母膏 0.5g水解酵素 0.5g溶解后，蒸餾水定容至1000mL水碳源氮源、無機鹽無機鹽碳源、氮源、生長因子氮源、生長因子培養(yǎng)基組成提供的主要營養(yǎng)物質(zhì)CMC-Na 510g酵母膏 1gKH2

4、PO4 0.25g土豆汁 100mL瓊脂 15g上述物質(zhì)溶解后，加蒸餾水定容至1000mL水鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基(水溶性羧甲基纖維素鈉)碳源碳源、氮源、生長因子無機鹽碳源、生長因子凝固劑項目物理性質(zhì)微生物生長情況 目的選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基增加纖維素分解菌的濃度 鑒別微生物的種類以纖維素作為碳源和能源的微生物可以正常生長絕大多數(shù)微生物都可以正常生長判斷某個培養(yǎng)基是否具有選擇作用時，應(yīng)設(shè)立基礎(chǔ)培養(yǎng)基進行對照。判斷所使用的培養(yǎng)基是否被雜菌污染時，應(yīng)設(shè)立不接該菌種的培養(yǎng)基進行空白對照。未接種培養(yǎng)基 接種培養(yǎng)基 無菌落產(chǎn)生有菌落產(chǎn)生課題延伸：(1)為確定透明圈內(nèi)的菌落是否是纖維素

5、分解菌，需要進行 的實驗，纖維素酶的發(fā)酵方法有_和_兩種。(2)纖維素酶的測定方法，一般是對纖維素酶分解_等纖維素后所產(chǎn)生的_進行定量的測定。 液體發(fā)酵固體發(fā)酵濾紙葡萄糖發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶尿素分解菌的分離與鑒定纖維素分解菌的分離與鑒定分離條件 作為唯一氮源 作為主要碳源鑒定方法培養(yǎng)基中加入 ，變在以纖維素為主要碳源的培養(yǎng)基上，利用 法，出現(xiàn)鑒定原理分解尿素的微生物合成 ，將尿素分解產(chǎn)生氨，使PH ，加入酚紅變紅色分解纖維素的微生物產(chǎn)生 ，將纖維素分解為纖維二糖或葡萄糖，使纖維素-剛果紅復(fù)合物降解而出現(xiàn) 步驟土壤取樣制備培養(yǎng)基樣品梯度稀釋涂布平板培養(yǎng)觀察進一步鑒定土壤取樣制備培養(yǎng)基 梯度稀釋涂布培養(yǎng) 挑選菌落進一步鑒定尿素纖維素酚紅