擬南芥抗鹽突變體篩選中鹽濃度的確定

1、擬南芥抗鹽突變體挑選中鹽濃度確實(shí)定摘要將擬南芥種子播種于1/2s培養(yǎng)基上,豎直培養(yǎng),待根生長(zhǎng)至1.52.0時(shí),轉(zhuǎn)入含有不同nal濃度的1/2s培養(yǎng)基上,倒置培養(yǎng),觀察各個(gè)鹽濃度下根的生長(zhǎng)情況。試驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明,在170、180、190l/l的nal濃度下,擬南芥的根生長(zhǎng)雖然都表現(xiàn)出一定的延遲,但最終還可以生長(zhǎng);而在200l/l時(shí),根生長(zhǎng)完全受到抑制,最終白化死亡,由此確定其生長(zhǎng)的臨界鹽濃度為200l/l。關(guān)鍵詞擬南芥;突變體挑選;鹽濃度中圖分類號(hào)q945.78文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼a文章編號(hào)1007-5739(2022)23-0025-01形式植物擬南芥(arabidpsisthaliana)為十字花科擬南芥

2、屬一年生草本植物,它具有基因組孝個(gè)體孝生長(zhǎng)周期短、種子繁殖系數(shù)高、嚴(yán)格的自花閉花授粉、易于遺傳轉(zhuǎn)化、便于栽培管理等特點(diǎn)。擬南芥是典型的甜土植物,本身并不抗鹽,但是大量研究說(shuō)明它包含了大多數(shù)的抗鹽基因,擬南芥基因組的全序列物理圖譜已于2000年12月公布1(thearabidpsisgeneinitiative2000),這是第一個(gè)被全部測(cè)序的植物。目前在擬南芥中,只有少數(shù)基因的功能被確定2,對(duì)擬南芥抗鹽突變體的研究,有助于基因功能的探究,而前期工作突變體挑選條件確實(shí)定尤為重要3-4,是后續(xù)試驗(yàn)成功的關(guān)鍵。1材料與方法1.1試驗(yàn)材料野生型擬南芥種子;根本培養(yǎng)基:1/2s培養(yǎng)基;含鹽培養(yǎng)基:分別含

3、有170、180、190、200l/lnal濃度的1/2s培養(yǎng)基。1.2試驗(yàn)方法1.2.1播種與培養(yǎng)。將經(jīng)過(guò)10h氯氣熏蒸滅菌的野生型擬南芥種子程度排列播種于根本培養(yǎng)基上,置于4冰箱放置2d,以確保種子發(fā)芽時(shí)間根本一致。2d后,從冰箱中移出,置于2223組培室中豎直培養(yǎng),每天給予14h充足光照和10h黑暗。1.2.2轉(zhuǎn)移與培養(yǎng)。待根生長(zhǎng)至1.52.0時(shí),挑選根長(zhǎng)度根本一樣且較為強(qiáng)健的幼苗分別移入含有170、180、190、200l/l的nal培養(yǎng)基,并在培養(yǎng)皿上標(biāo)記好根生長(zhǎng)的初始位置,倒立豎直培養(yǎng),培養(yǎng)條件與前一樣。1.3觀察與記錄每天觀察不同鹽濃度下根的生長(zhǎng)情況、彎曲程度以及幼苗的生理狀態(tài),

4、每隔一定時(shí)間在培養(yǎng)皿上對(duì)根的生長(zhǎng)位置進(jìn)展標(biāo)記,并做好記錄。2結(jié)果與分析將幼苗移入含有不同鹽濃度的培養(yǎng)基后,都表現(xiàn)出一定程度的生長(zhǎng)抑制,可能由于不同鹽濃度對(duì)根的生長(zhǎng)都造成了一定的延遲。經(jīng)過(guò)生長(zhǎng)延遲后,幼苗適應(yīng)了相應(yīng)鹽濃度,在部分濃度下根出現(xiàn)了彎曲生長(zhǎng)(圖1):在170l/l濃度下,根經(jīng)過(guò)短暫的遲延開(kāi)始彎曲生長(zhǎng),且彎曲的程度較大,生長(zhǎng)較快。在180l/l濃度下,根的生長(zhǎng)狀況與170l/l濃度下幾乎一樣,生長(zhǎng)較快,彎曲程度較大。在190l/l濃度下,根的生長(zhǎng)受到了短暫的抑制,但隨后出現(xiàn)彎曲生長(zhǎng)。在200l/l濃度下,根的生長(zhǎng)完全受到了抑制,沒(méi)有出現(xiàn)彎曲現(xiàn)象,且很快萎蔫,白化死亡。3結(jié)論與討論試驗(yàn)結(jié)果

5、說(shuō)明,在170、180、190l/l的nal濃度下,根的生長(zhǎng)雖然都表現(xiàn)出一定的延遲,生長(zhǎng)速度不太一致,但最終還是可以生長(zhǎng),出現(xiàn)了一定程度的彎曲,而在200l/l的nal濃度下,根的生長(zhǎng)完全受到了抑制,沒(méi)有出現(xiàn)任何程度的彎曲,經(jīng)過(guò)一定時(shí)間后萎蔫,因此確定200l/lnal為挑選濃度。該鹽濃度經(jīng)過(guò)屢次反復(fù)驗(yàn)證,可作為擬南芥抗鹽突變體的挑選條件5-6。編輯4參考文獻(xiàn)1agi.analysisfthegenesequenefthefleringplantarabidpsisthalianaj.nature,2000,408(6814):796-815.2buhen,buhezd.arabidpsisgeneknkut:phentypesantedj.urrentpinininplantbilgy,2001,4(2):111-117.3einked,herryj,dean,etal.arabidpsisthaliana:adelplantfrgeneanalysisj.siene,1998(5389):662,679-682.4趙淑清.一種挑選擬南芥突變體的有效方法j.遺傳,2001,23(3):260-261.5郝建平,郭美麗,裴雁曦.擬南芥抗鹽突變體的rapd分析j.西