聚合酶鏈式反應應用指南

1、聚合酶鏈式反應應用指南PCR歷史演變PCR技術簡介PCR的臨床應用1984年，教授發(fā)明了具有劃時代意義的PCR技術。并因此項技術于1993年獲得諾貝爾化學獎。 1985年，實驗室技術成熟并逐步在臨床上應用。二十世紀九十年代開始，在國內各級醫(yī)院廣泛開展。2000年左右，全國開始規(guī)范化管理，工作人員需要培訓資質，實驗室需經(jīng)過相關機構認證。PCR歷史演變PCR技術簡介 所謂PCR技術，指的是在體外，以某一保守區(qū)段為模板，以一對特異性引物進行誘導，以游離的堿基為原料，在Taq酶的催化下，對目的基因迅速擴增的一種分子生物學技術。一、PCR的概念1、體外擴增2、迅速大量擴增3、靈敏度高4、特異性高二、技術

2、特點變性：使雙鏈DNA變?yōu)閱捂?。退火：使引物和互補模板結合 。延伸：按53方向以引物為起始點復制循環(huán)次數(shù) DNA的鏈數(shù) 1 21 2 2 22 4 3 23 8 10 210 1024 20 220 1,048,576 30 230 1,073,741,824 10億 三、PCR技術分類1、普通PCR檢測技術2、實時熒光定量PCR檢測技術3、高敏感度內標熒光定量PCR檢測技術PCR的臨床應用用于苛養(yǎng)病原菌的鑒定用于培養(yǎng)周期較長的病原菌檢測用于目前難以或者不能培養(yǎng)病原菌檢測病原菌載量分析病毒類疾病診斷需要快速匯報結果的病原菌檢測細菌或腫瘤細胞耐藥基因檢測遺傳代謝病的分子診斷（一）、檢測適宜人群1

3、、疑似肝炎患者。2、需要進行抗病毒治療效果評估患者。3、需調整抗肝炎病毒治療方案者。4、有肝炎病史且已治愈的擬受孕及孕期女性。5、有肝炎病史且已治愈的擬母乳喂養(yǎng)及哺乳期婦女。6、有肝炎病史且已治愈的擬生育男性。7、肝炎所致肝癌后做過肝移植手術以后患者。8、血液制品及獻血員篩查。9、轉氨酶正常、血清學指標改變后，需要停止藥物治療的患者。一、乙型肝炎/丙型肝炎檢測（二）、如何檢測1、疑似病人隨時抽血進行檢測。2、乙型肝炎患者抗病毒治療期間，至少每3個月監(jiān)測一次HBV-DNA水平。3、對于抗HCV陽性者、考慮接受抗病毒治療者，在開始治療前、治療第4周、第12周，均需要進行HCV-RNA檢測。4、有肝

4、炎病史且已治愈的擬生育男、女性，應在受孕前進行病毒載量檢測。5、有肝炎病史且已治愈的孕期婦女，應在受孕早期、中期及晚期均進行病毒載量檢測。6、有肝炎病史且已治愈的生育后婦女，若想母乳喂養(yǎng)嬰兒，應在哺乳期間，定期進行病毒載量檢測。7、獻血員及肝移植術后患者應定期進行病毒載量檢測。（三）、標本采集 采集EDTA抗凝（紫帽血常規(guī)管）靜脈血2-3ml。患者抽血前需要空腹。注意：標本要及時送到實驗室，尤其是丙型肝炎病毒，應于采血后盡快送檢。二、HPV（人類乳頭瘤病毒）檢測 HPV病毒感染與子宮頸糜爛、尖銳濕疣和宮頸癌等婦科疾病高度相關，其中高危型HPV持續(xù)感染時導致宮頸癌的主要原因，而且從感染HPV到發(fā)

5、展成為宮頸癌大約需要10年時間。HPV感染所致宮頸癌是唯一一種病因明確，可以早期預防與治療及徹底根治的腫瘤。 一項調查表明，我國約18%的女性高危型HPV檢測陽性，但是25歲以上，有超過80%的人從未做過宮頸癌預防篩查。（一）檢測適宜人群1、有性生活史的女性2、有不潔性交史的男性或女性3、疑似尖銳濕疣患者診斷4、25歲以上女性健康普查（二）、如何檢測 疑似宮頸癌患者檢測通常采用細胞形態(tài)學檢測（TCT）和病原學檢測兩種方法。但由于HPV感染早期，細胞形態(tài)學改變不顯著，單純依靠TCT結果會造成漏檢。采取PCR與反向雜交技術進行檢測，是明確診斷的關鍵手段。（三）、標本采集 1、使用窺器暴露宮頸，使用

6、專用的HPV采樣刷置于宮頸口，逆時針方向轉三圈，并停留十秒。把采樣刷放入專用的標本儲存瓶里，折斷采樣刷多余的部份，切勿將采樣刷丟掉，以保留足量標本。蓋好蓋子，標記好送檢驗室檢測。 2、若為尖銳濕疣患者，可以采集疣體組織進行送檢。 3、男性患者可以采集尿道拭子送檢。 注意：采集HPV標本前三天不要陰道用藥或沖洗；避免經(jīng)期采樣，少量血液不影響檢測結果；采樣前不要進行醋酸或碘液涂抹。三、性病三項（NG、CT、UU）檢測 淋病奈瑟菌（NG）、沙眼衣原體（CT）、解脲支原體（UU）是引起淋病性尿道炎/陰道炎、非淋病性尿道炎/陰道炎的病原體。常規(guī)檢測采用細菌培養(yǎng)技術，由于NG抵抗力差，易死亡；CT目前上不能夠體外培養(yǎng)；UU培養(yǎng)較為困難，故傳統(tǒng)微生物法檢測存在困難。（一）檢測適宜人群1、疑似性病患者診斷2、有不潔性交史者篩查3、夫妻雙方一方患有性病，另一方篩查1、男性：清潔尿道后，采用專用拭子插入尿道2cm處，旋轉后取出，放置在無菌管中送檢。2、女性：清潔外陰后，采用專用拭子在子宮頸口處采集標本（停留數(shù)秒），轉入無菌管中送檢。3、尿道炎患者若無明顯分泌物，可以采集前段晨尿作為標本送檢。（二）標本采集四、其他病原體檢測EB檢測：依據(jù)病原體寄生及復制釋放部位，建議采用咽拭子和血液標本同時檢測。