新冠核酸檢測實驗室推薦書模板一

1、新冠核酸檢測實驗室建設(shè)方案項目建設(shè)公司:項目聯(lián)系人:聯(lián)系方式:一、新冠核酸建設(shè)實驗室的建設(shè)簡介PCR技術(shù)在整個生命科學(xué)領(lǐng)域具有很高的先進(jìn)性，但是，如果缺乏對PCR技術(shù)完 整深入的了解，以及相應(yīng)的質(zhì)量保證措施，就會導(dǎo)致檢驗結(jié)果有很大的主觀 性 和隨意性，常常出現(xiàn)假陽性和假陰性。根據(jù)基因擴(kuò)增檢驗技術(shù)的特點和臨床疾病診斷的需要，國家衛(wèi)生部于2002年1 月下發(fā)了臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室管理暫行辦法，對基因擴(kuò)增檢驗實驗室的 設(shè)置、技術(shù)驗收、人員培訓(xùn)、監(jiān)督管理等作了全面的規(guī)定，要求從事臨床基因擴(kuò) 增檢驗的技術(shù)人員必須經(jīng)過上崗培訓(xùn)，持證上崗。臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室是整 個PCR實驗的操作場所，它的設(shè)置是否合

2、理直接影響到PCR實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性， 所以它必須按照國家衛(wèi)生部頒布的臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室基本設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)進(jìn) 行設(shè)置。標(biāo)準(zhǔn)PCR實驗室是一種規(guī)格、大小、排列、布局、設(shè)置、工作規(guī)范、操作程序和 管理制度等都一定，且經(jīng)過多位專家和多家醫(yī)院反復(fù)論證，并符合國家衛(wèi)生部的 臨床基因擴(kuò)增檢測實驗室基本設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)要求的臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室。它 采用全自動熒光定量PCR檢測系統(tǒng)，只要設(shè)置三個工作區(qū)域，即：試劑準(zhǔn)備區(qū)， 標(biāo)本制備區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)。二、新冠核酸檢測PCR實驗室建設(shè)依據(jù)新型冠狀病毒實驗室生物安全指南（第二版）GB19489-2008實驗室生物安全通用要求GB50346-2011生物安全實驗室建筑技術(shù)規(guī)范

3、WS233-2017病原微生物實驗室生物安全通用準(zhǔn)則臨床基因擴(kuò)增實驗室管理暫行辦法衛(wèi)生部醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室管理辦法衛(wèi)辦醫(yī)政發(fā)【2010】194號 醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室工作導(dǎo)則三、了解PCR實驗室如何避免污染是臨床基因擴(kuò)增實驗室設(shè)計的關(guān)鍵問題。因此，實驗室的布 局、空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)計、風(fēng)量控制等都是圍繞這一核心問題展開的。（1）現(xiàn)場要求高。需要標(biāo)準(zhǔn)的四區(qū)分離和氣流控制：試劑制備、 樣品制備、PCR擴(kuò)增檢測和擴(kuò)增產(chǎn)物檢測。每個獨立的實驗區(qū)都有一個緩沖區(qū)。 同時，每個區(qū)域均采用氣壓調(diào)節(jié)，使試劑和樣品在整個PCR實驗過程中不受氣溶 膠污染，減少擴(kuò)增產(chǎn)物對人和環(huán)境的污染。機(jī)械連鎖不銹

4、鋼傳遞窗確保試劑和樣 品在轉(zhuǎn)移過程中不受污染（人員分流）。（2）人員要求高。進(jìn)入PCR實驗室，需要接受基礎(chǔ)理論、實驗原理、 標(biāo)準(zhǔn)操作、質(zhì)量保證、注意事項等方面的標(biāo)準(zhǔn)培訓(xùn)，并取得PCR工作證。（3）高檢測風(fēng)險。在檢測過程中，由于樣品蓋的打開、核酸提取的 振動和離心作用，可能產(chǎn)生氣溶膠，存在感染的風(fēng)險。（4）防護(hù)要求高。個人防護(hù)必須按照生物安全三級實驗室的個人防 護(hù)要求進(jìn)行。核酸檢洌實驗室平面圖四、新冠核酸檢測實驗室設(shè)計參數(shù)區(qū)域潔凈度等 級最小換氣 次數(shù)（次/ 小時）與室外方向上相鄰相通房間最小壓差（Pa）溫度（6相對濕度（%）風(fēng)速（m/s）噪聲dB(A)試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)812+10182640-

5、600.1560樣本制備 區(qū)815-10182640-600.1560核酸擴(kuò)增 區(qū)815-15182640-600.1560產(chǎn)物分析 區(qū)815-20182640-600.1560緩沖間-60182640-6060PCR專用走廊-65182640-6060一般情況下，PCR實驗室沒有嚴(yán)格的凈化要求，因此有必要根據(jù)實驗內(nèi)容來確 定實驗室的潔凈度。當(dāng)PCR實驗樣品需要保護(hù)時，實驗室應(yīng)設(shè)潔凈空調(diào)系統(tǒng)。 對于新冠核酸檢測實驗室，建議設(shè)置10萬級凈化。五、新冠核酸檢測實驗室建設(shè)的幾個關(guān)鍵點1、建立PCR實驗室質(zhì)量管理體系根據(jù)實驗室的具體情況編寫質(zhì)量體系文件，質(zhì)量手冊、程序文件、作 業(yè)指導(dǎo)書，并保證管理體系

6、運行有效。管理體系的特點是應(yīng)有明確的目的、規(guī)范的管理、有效的制約、高效的機(jī)制、能 自我發(fā)展的整體。建立完善的SOP文件，對完成各項質(zhì)量活動的方法作出規(guī)定，每個SOP都應(yīng)對一 個或一組相互關(guān)系的活動進(jìn)行描述。每個SOP文件應(yīng)說明該項質(zhì)量各環(huán)節(jié)的輸 入、轉(zhuǎn)換和輸出所需的文件、物資、人員、記錄以及它們與有關(guān)活動的接口關(guān)系。 明確每個環(huán)節(jié)轉(zhuǎn)換過程中各項因素的要求，即由誰做、做什么、做到什么程序、 達(dá)到什么要求，如何控制、形成什么記錄和報告，以及相應(yīng)的審批手續(xù)。規(guī)定在 質(zhì)量活動中需要注意的例外或特殊情況的糾正措施。SOP應(yīng)簡練、明確和易懂并 且工作人員熟練掌握和嚴(yán)格遵守。2、PCR實驗室的相關(guān)設(shè)置要完成

7、一組PCR實驗，通常需要經(jīng)過試劑配制、樣品處理、核酸擴(kuò)增和產(chǎn)物分析 4個實驗過程。這4個實驗過程的實驗用房應(yīng)相鄰布置，組成一個獨立的PCR實 驗區(qū)。標(biāo)準(zhǔn)的PCR實驗區(qū)包括:試劑準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)、產(chǎn)物分析區(qū)、 各區(qū)配套的緩沖區(qū)及公共走廊。2.1PCR實驗室整體平面布局某醫(yī)院PCR實驗室平面布局如圖1所示，整個區(qū)域有一個公用走廊，每個獨立實 驗區(qū)設(shè)有專門的緩沖區(qū)。通過壓差控制，使整個PCR實驗過程中試劑和標(biāo)本免受 氣溶膠的污染，并且降低擴(kuò)增產(chǎn)物對人員和環(huán)境的污染。*更衣J 洶柚I】-妁FJ : J：r 產(chǎn)腳分折區(qū)I以安凝:.Am5 :.DNA C h Mil宜普U.HOW圖表1、某醫(yī)院P

8、CR實驗室平面圖2.2試劑準(zhǔn)備區(qū)該實驗區(qū)主要進(jìn)行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應(yīng)混合液的制 備。試劑和用于標(biāo)本制作的材料應(yīng)直接運送至該區(qū)，不得經(jīng)過其他區(qū)域。試劑原 材料必須貯存在本區(qū)內(nèi)，并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑。試劑準(zhǔn)備區(qū)配備有 28 C冰箱和-80 C冰箱，計算冷負(fù)荷時，需要將它們計算在內(nèi)。房間的面積宜控制在15m220m2。本區(qū)的壓力梯度要求為:相對正壓狀態(tài)，以防 止外界含核酸氣溶膠的空氣進(jìn)入，造成污染。2.3標(biāo)本制備區(qū)該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為臨床標(biāo)本的保存、核酸（RNA、DNA）提取、貯存及其加入 至擴(kuò)增反應(yīng)管和測定RNA時cDNA的合成。標(biāo)本制備區(qū)配備有28 C冰箱和-2

9、0 C冰箱，計算冷負(fù)荷時，需要將它們計算 在內(nèi)。在標(biāo)本制備區(qū)，還需要配備生物安全柜，用于進(jìn)行提取核酸的操作。為避 免提取的核酸在柜內(nèi)反復(fù)循環(huán)，造成標(biāo)本之間的交叉污染，出現(xiàn)假陽性結(jié)果，該 區(qū)域配備的生物安全柜必須是B2型的。生物安全柜工作區(qū)垂直氣流全部來自實 驗室，排風(fēng)經(jīng)過高效過濾器過濾后直接排至室外，不允許回到安全柜和實驗室中。 根據(jù)經(jīng)驗，如果實驗室內(nèi)配備生物安全柜，每配備一臺，實驗室的面積增加10m2; 標(biāo)本制備區(qū)的面積宜在25m230m2之間。本區(qū)的壓力梯度要求為:相對于鄰近區(qū) 域為正壓，以避免從鄰近區(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染。2.4擴(kuò)增室該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為DNA或cDNA擴(kuò)增。此外，已制

10、備的DNA模板和合成的 cDNA（來自樣本制備區(qū)）的加入和主反應(yīng)混合液（來自試劑貯存和制備區(qū)）制備成 反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。在巢式PCR測定中，通常在第一輪擴(kuò)增后必須 打開反應(yīng)管，因此巢式擴(kuò)增有較高的污染危險性，第二次加樣必須在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。擴(kuò)增室主要配備PCR實驗室的核心儀器PCR儀，本文實例中使用了 ABI7500和 ABI9700兩種PCR儀。在實驗室建造過程中，需要給PCR儀配備專門的UPS電源， 以保證其正常工作。該區(qū)面積控制在15m220m2。本區(qū)的壓力梯度要求為:相對于鄰近區(qū)域為負(fù)壓，以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。為 避免氣溶膠所致的污染，應(yīng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)的不必要的走動。個別操

11、作如加樣 等應(yīng)在超凈臺內(nèi)進(jìn)行。建議采用510Pa壓差，在控制上比較容易實現(xiàn)。2.5產(chǎn)物分析區(qū)該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為擴(kuò)增片段的測定。如使用全自動封閉分析儀器檢測，此 區(qū)域可不設(shè)。在室內(nèi)配備通風(fēng)櫥，保證房間內(nèi)的相對負(fù)壓，空氣從室外流向室內(nèi)。 該區(qū)面積控制在15m2 20m2o本區(qū)是最主要的擴(kuò)增產(chǎn)物污染來源，因此對本區(qū)的壓力梯度的要求為：相對于鄰 近區(qū)域為負(fù)壓，以避免擴(kuò)增產(chǎn)物從本區(qū)擴(kuò)散至其它區(qū)域。建議采用510Pa壓差， 在控制上比較容易實現(xiàn)。3、正負(fù)壓區(qū)域緩沖室的設(shè)置根據(jù)壓力梯度的要求，試劑配制室和樣品處理室為相對正壓，擴(kuò)增室和產(chǎn)物分析 室為相對負(fù)壓，要求正壓的區(qū)域和要求負(fù)壓的區(qū)域的緩沖室內(nèi)的壓力

12、設(shè)計大不相 同。正壓緩沖室符合一般正壓潔凈室的緩沖原則，主要是防止室外環(huán)境空氣中的氣溶 膠進(jìn)入室內(nèi)。正壓緩沖室的布置如圖2所示。試劑準(zhǔn)備間標(biāo)本自備區(qū)+ IOPa緩沖間+5Pa走廊+OPa圖表2、正壓緩沖室的布置圖負(fù)壓緩沖室則是要求緩沖室對核酸擴(kuò)增室及產(chǎn)物分析區(qū)保持正壓，對緩沖室外也 保持正壓（主要是滿足室內(nèi)凈化需要，如室內(nèi)無潔凈要求，此處可以為0壓）。負(fù) 壓緩沖室的布置如圖3所示。擴(kuò)增區(qū) 產(chǎn)物分析區(qū) 5Pa緩沖間5Pa走廊OPa圖表3、負(fù)壓緩沖室的布置圖4、污染的預(yù)防與控制PCR實驗室設(shè)計的核心問題是如何避免污染。在實際工作中，常見的有以下幾種 污染類型:擴(kuò)增產(chǎn)物的污染；天然基因組DNA的污染

13、;試劑的污染以及標(biāo)本間的污 染。因此要避免污染，首先應(yīng)是預(yù)防，而不是排除。工作區(qū)域的嚴(yán)格劃分，各個實驗區(qū)域要有明顯的標(biāo)記（如醒目的門牌或不同的地 面顏色等），以避免各個不同實驗區(qū)域設(shè)備物品、試劑等發(fā)生混淆。合理的系統(tǒng)設(shè)置，合理的空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)置，盡量采用全送全排的空調(diào)系統(tǒng)；嚴(yán) 格的氣流壓力控制，保證不同的實驗區(qū)內(nèi)不同的壓力要求。規(guī)范的操作，臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室的技術(shù)人員必須進(jìn)行上崗培訓(xùn)，在實驗操 作過程中，操作者必須戴手套，并經(jīng)常更換。清潔工作及時、正確。實驗工作結(jié) 束后，必須立即對本區(qū)進(jìn)行清潔。嚴(yán)格的管理:嚴(yán)格控制進(jìn)出實驗室的人員。在各個實驗區(qū)域使用帶有明顯區(qū)別標(biāo) 志的工作服（如不同顏色）

14、，當(dāng)工作人員離開時不得將本區(qū)的工作服帶至其它區(qū)域; 盡量減少在實驗區(qū)內(nèi)不必要的走動以減少交叉污染的可能性。擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)是 最主要的擴(kuò)增產(chǎn)物污染來源，廢液不能在實驗室中傾倒，必須經(jīng)消毒液浸泡消毒 后在遠(yuǎn)離實驗室的地方棄掉，用過的吸頭等一次性材料也應(yīng)經(jīng)消毒液浸泡消毒后 統(tǒng)一處理，如焚燒等；總之，實驗室建設(shè)是一個復(fù)雜的問題，這里不討論人員的問題，實驗室人員的培 養(yǎng)與沉淀，也需要一個過程，在建設(shè)的過程中要因地制宜，不要生搬硬套，結(jié)合 自己的實際慢慢摸索出適合自己發(fā)展的建設(shè)思路。科學(xué)合理建設(shè)實驗室，更好的 發(fā)揮實驗室的作用。五、新冠核酸檢測實驗室氣流組織建議（1）氣流組織宜采用上送下排，送風(fēng)口和排風(fēng)口

15、布置應(yīng)使室內(nèi)氣流停滯的空間降低到最小程度。在生物安全柜操作面或其他有氣溶膠操作地點的上方附件不得設(shè)送風(fēng)口高效過濾器排風(fēng)口應(yīng)設(shè)在室內(nèi)被污染風(fēng)險最高的區(qū)域，單向布置，不得有障礙；不能以回(排)風(fēng)夾墻代替排風(fēng)直管，排風(fēng)高效過濾裝置與排 風(fēng)總管的連接必須全部是實體風(fēng)管。六、新冠核酸檢測實驗室裝飾裝修核酸檢測實驗室有設(shè)計理念、裝修要求、凈化空調(diào)系統(tǒng)、通風(fēng)、自 控、工藝設(shè)備等幾個關(guān)鍵點。材質(zhì)：隔墻及吊頂一一凈化彩鋼板、地面一一同質(zhì)透芯PVC地板、 凈化實驗室專用門、觀察窗；要求：墻面：光潔、不產(chǎn)塵積塵、耐腐蝕，易清潔消毒、無縫隙；地面：防靜電、耐腐蝕、無縫隙、無滲漏;陰陽角：均用圓弧角密封處理；門：必須設(shè)

16、置自動互鎖（機(jī)械或電子）；凈化空調(diào)、通風(fēng)系統(tǒng)、自控系統(tǒng)1.避免交叉污染，采用全新風(fēng)空調(diào)系統(tǒng);樣品制備區(qū)嚴(yán)格按照BSL-2設(shè)計施工；排風(fēng)系統(tǒng)全部按照要求采用高效過濾器凈化；氣流組織：采用上送下排形式；壓力梯度控制通過微壓差計及精密自控系統(tǒng)控制；實驗室入口處顯示房間內(nèi)各項指標(biāo)參數(shù)，并設(shè)置偏離報警；工藝設(shè)備實驗臺下部均留空，無死角；全部采用不銹鋼304制作；樣品制備區(qū)生物安全柜:BSC-|-B2型；樣品制備區(qū)設(shè)置洗眼裝置，必要時應(yīng)有應(yīng)急噴淋裝置；非接觸式操作理念（感應(yīng)式水龍頭、感應(yīng)式自動門、互鎖傳遞窗 等）；實驗室建設(shè)涉及到材料選擇、穩(wěn)定性、精度控制等多個技術(shù)和知識 領(lǐng)域。不同的實驗室由于試驗樣品和

17、試驗方法的不同，對實驗室建設(shè)有不同的要 求。可以說有很多不同之處。一個完善的實驗室在分析檢測中起著重要的作用， 對保證實驗室工作人員的健康也起著重要的作用。參考資料：中華人民共和國住房和城鄉(xiāng)建設(shè)部，中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗 檢疫總局.GB50591-2010，潔凈室施工及驗收規(guī)范S.北京:光明日報出版社， 2010.許鐘麟.空氣潔凈技術(shù)原理（3版）M.北京:科學(xué)出版社，2004.臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室管理暫行辦法（衛(wèi)醫(yī)發(fā)200210號）.劉書慶，謝逢潔.質(zhì)量管理體系建立與實施維護(hù)J工業(yè)工程，2003.2010年，衛(wèi)生部辦公廳關(guān)于印發(fā)醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增實驗室管理辦 法的通知附件1:報價報設(shè)備名稱數(shù)量品牌型號報價超凈工作臺1臺海爾 HCB-1300V42300高速離心機(jī)1臺嘉利克斯 H-1532000低溫冷藏冷凍 冰箱2臺松下 MPR-440F108200移液器 (0.5-10ul)3支艾本德12850移液器 (5-50ul)3支艾本德12850移液器 (20-200ul)3支艾本德12850移液器 (100-1000ul)3支艾本德12850自動核酸提