醫(yī)學(xué)專題血液學(xué)檢驗-1-現(xiàn)代造血理論

1、第一篇 造血細(xì)胞及其檢驗 第一章 現(xiàn)代造血理論12021/7/20 星期二造血（hematopoiesis）是指血細(xì)胞的生成過程。造血干細(xì)胞在造血微環(huán)境中增殖、分化為各類血細(xì)胞。造血系統(tǒng)通過造血器官、造血干細(xì)胞、造血調(diào)控因子等組成的復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)來維持血液細(xì)胞的動態(tài)平衡。22021/7/20 星期二第一節(jié) 造血器官和造血微環(huán)境 一、造血器官人體的造血器官是生成血液的器官起源于中胚葉，主要包括骨髓、胸腺、淋巴結(jié)、 肝臟和脾等其造血過程分為胚胎期造血和出生后造血32021/7/20 星期二（一）胚胎期造血器官人類的血液細(xì)胞首先在卵黃囊中形成，肝、脾、胸腺和骨髓均參與造血根據(jù)發(fā)育過程中造血中心的轉(zhuǎn)移，胚胎

2、期造血又分為三個時期： 卵黃囊造血期 、肝造血期 、骨髓造血期42021/7/20 星期二1卵黃囊造血期（中胚葉造血期）始于胚胎3周左右，卵黃囊壁上的中胚層細(xì)胞開始分化聚集成團(tuán)，稱為血島（blood island）。血島是人類最初的造血中心。血島外周的細(xì)胞逐漸變長，分化為血管內(nèi)皮細(xì)胞52021/7/20 星期二血島中央的細(xì)胞形成多能造血干細(xì)胞，繼爾分化成幼稚紅細(xì)胞，以后大量的多能造血干細(xì)胞遷移至肝、脾、骨髓和淋巴組織繼續(xù)增殖、分化為干細(xì)胞。胚胎 2個月后，卵黃囊逐漸退化、萎縮,被肝、脾取代其造血功能。 62021/7/20 星期二2肝造血期 始于胚胎第6周，是卵黃囊血島的造血干細(xì)胞移植到肝臟的

3、結(jié)果，以造紅細(xì)胞為主，后期可生成粒細(xì)胞和巨核細(xì)胞。肝臟是胚胎25個月的造血中心，持續(xù)至第7個月時，逐漸被骨髓造血替代。此外脾、胸腺、淋巴結(jié)等也參與造血。72021/7/20 星期二 胎肝造血的規(guī)律：造血細(xì)胞分布在肝竇、肝細(xì)胞索之間。胎肝造血以幼稚紅細(xì)胞為主，巨核細(xì)胞常與紅系細(xì)胞在一起。胎肝造血細(xì)胞的密度隨妊娠日期的不同而變化。證明肝造血在第15周以前為上升期，1530周為旺盛期，24周以后為減退時期，至出生前停止。故肝造血為第二代造血。82021/7/20 星期二脾造血 始于胚胎第3個月，主要生成紅細(xì)胞、粒細(xì)胞，第5個月時產(chǎn)生淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞，而紅細(xì)胞和粒細(xì)胞的產(chǎn)生逐漸減少。至出生時，脾已成

4、為產(chǎn)生淋巴細(xì)胞的器官。胸腺 在胚胎期主要產(chǎn)生淋巴細(xì)胞和少量紅細(xì)胞、粒細(xì)胞，胚胎后期成為誘導(dǎo)和分化T淋巴細(xì)胞的器官。淋巴結(jié) 在胚胎早期可產(chǎn)生紅細(xì)胞，但時間很短，在胚胎4個月以后，成為終生制造淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞的器官。 92021/7/20 星期二3骨髓造血期 自胚胎第14周骨髓開始造血，5個月以后成為胚胎期的造血中心。骨髓中的造血干細(xì)胞來源于肝、脾的種植，可維持終生。胚胎期的骨髓主要生成紅細(xì)胞、粒細(xì)胞和巨核細(xì)胞，也生成淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞。102021/7/20 星期二胚胎期造血的三個時期是不能截然分開，而是此消彼長，互為交錯。112021/7/20 星期二（二）出生后造血出生后造血主要靠骨髓。在正

5、常情況下骨髓是唯一能產(chǎn)生紅細(xì)胞、粒細(xì)胞和血小板的場所，也生成淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞。脾和淋巴結(jié)為終生制造淋巴細(xì)胞的器官。122021/7/20 星期二1骨髓 骨髓是位于骨髓腔內(nèi)的海綿樣膠狀組織，有紅骨髓和黃骨髓之分。嬰幼兒的骨髓幾乎都參與造血，即全為紅骨髓。大約從5歲開始，長骨的髓腔內(nèi)出現(xiàn)脂肪細(xì)胞，隨年齡增長，長骨遠(yuǎn)端的紅骨髓逐漸被脂肪組織代替轉(zhuǎn)化為黃骨髓。132021/7/20 星期二到18歲以后，紅骨髓只限于顱骨、脊椎骨、肋骨、胸骨、骼骨以及長骨的近心端。因此，在作骨髓穿刺或活檢時，成人可選擇的部位是骼骨、棘突、胸骨等處，脛骨粗隆則只適用于2歲以下的幼兒。成人的紅骨髓和黃骨髓約各占50%，但黃

6、骨髓仍有造血潛能，當(dāng)機(jī)體需要時又轉(zhuǎn)變?yōu)榧t骨髓而參與造血。142021/7/20 星期二2.淋巴器官 分為中樞淋巴器官和周圍淋巴器官。中樞淋巴器官主要包括胸腺和骨髓，主導(dǎo)淋巴細(xì)胞的產(chǎn)生、增殖、分化和成熟。周圍淋巴器官主要包括淋巴結(jié)、脾、腸粘膜相關(guān)淋巴組織等，是淋巴細(xì)胞聚集和免疫應(yīng)答發(fā)生的場所。 152021/7/20 星期二(1)胸腺（thymus）來自骨髓的淋巴干細(xì)胞經(jīng)增殖和在胸腺素的作用下，誘導(dǎo)分化為免疫活性細(xì)胞，進(jìn)人胸腺髓質(zhì)，然后釋放人血并遷移到外周淋巴器官的胸腺依賴區(qū)成為胸腺依賴淋巴細(xì)胞即T細(xì)胞。青春期后，胸腺逐漸退化，被脂肪組織取代。 162021/7/20 星期二(2)淋巴結(jié)（lym

7、ph node）淋巴結(jié)的外周部分為皮質(zhì)，B細(xì)胞在淋巴結(jié)皮質(zhì)區(qū)濾泡中央增殖、發(fā)育；皮質(zhì)深層和濾泡間隙為副皮質(zhì)區(qū)，富含由胸腺遷移而來的T細(xì)胞，又稱胸腺依賴區(qū)；淋巴結(jié)中央部分為髓質(zhì)，髓質(zhì)區(qū)的B細(xì)胞、漿細(xì)胞及巨噬細(xì)胞集結(jié)構(gòu)成髓索172021/7/20 星期二(3)脾脾切面大部分呈暗紅色，稱紅髓，其中散布著許多灰白色小結(jié)節(jié)，為白髓。白髓是淋巴細(xì)胞的聚集處，在中央小動脈周圍主要是T細(xì)胞，是脾的胸腺依區(qū)；白髓中的脾小結(jié)位于脾動脈周圍淋巴鞘內(nèi)一側(cè)，內(nèi)有生發(fā)中心，主要由B細(xì)胞構(gòu)成。脾具有造血、儲血及免疫等多種功能，是T、B細(xì)胞分化成熟的主要場所之一。182021/7/20 星期二3.髓外造血正常情況下，胎兒出生

8、2個月以后，骨髓以外的組織如肝、脾淋巴結(jié)等不再制造紅細(xì)胞、粒細(xì)胞和血小板。但在某些病理情況下，如骨髓纖維化、骨髓增生性疾病及某些貧血，這些組織又恢復(fù)造血功能（?？蓪?dǎo)致相應(yīng)器官腫大），稱為髓外造血。192021/7/20 星期二髓外造血是機(jī)體對血細(xì)胞的需求特別增高或?qū)撬柙煅系K的一種補償，尤其常見于兒童。這種代償作用有限且不完善。髓外造血部位除肝、脾、淋巴結(jié)外，也可以累及胸腺、腎、腎上腺、腹腔后脂肪及胃腸道。202021/7/20 星期二二、造血微環(huán)境造血微環(huán)境（hematopoietic microenvironment）是指造血細(xì)胞生長、發(fā)育的內(nèi)環(huán)境。由微血管系統(tǒng)、末梢神經(jīng)、基質(zhì)、基質(zhì)細(xì)胞

9、及基質(zhì)細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子等組成，不僅是造血細(xì)胞的支架，還可通過細(xì)胞之間的相互作用和釋放的細(xì)胞因子影響造血活動。212021/7/20 星期二（一）骨髓微血管系統(tǒng)骨髓微血管系統(tǒng)是造血微環(huán)境的重要組成部分,其功能在于向造血組織輸送營養(yǎng)物質(zhì)，排出代謝廢物，從而有利于造血細(xì)胞的更新。毛細(xì)血管注人管腔膨大的靜脈竇，再彼此溝通匯集成集合竇，最后進(jìn)人中央靜脈。靜脈竇與集合竇（統(tǒng)稱為骨髓血竇）是骨髓血管系統(tǒng)的核心結(jié)構(gòu)。222021/7/20 星期二血竇（Sinusoid） 是動脈毛細(xì)血管分成的不規(guī)則竇狀腔隙。血竇內(nèi)是成熟的血細(xì)胞，血竇之間則充以骨髓實質(zhì)(造血索)，主要是活躍的造血實質(zhì)細(xì)胞。血竇壁是由連續(xù)的內(nèi)皮

10、細(xì)胞、顆粒狀基底膜和外皮細(xì)胞所組成，其竇壁的薄厚是可變的,絕大多數(shù)的竇壁僅有一層內(nèi)皮細(xì)胞組成，平時無孔，當(dāng)血細(xì)胞穿過內(nèi)皮細(xì)胞時形成臨時通道。232021/7/20 星期二不同造血功能的骨髓其微血管的結(jié)構(gòu)不同造血功能旺盛時，骨髓血竇很豐富，竇壁孔隙增多；造血功能低下的骨髓，骨髓血竇減少，無造血功能的黃骨髓中，微血管呈毛細(xì)管狀。骨髓的微血管系統(tǒng)通過調(diào)節(jié)物質(zhì)與能量的交換、血細(xì)胞的釋放、組織內(nèi)的酸堿度、氧和二氧化碳分壓等影響造血細(xì)胞的增殖和分化。242021/7/20 星期二（二）骨髓神經(jīng)骨髓的神經(jīng)來源于脊神經(jīng)，其神經(jīng)供應(yīng)十分廣泛，骨髓的全部動脈都伴有神經(jīng)束，其分支纏繞于動脈壁呈網(wǎng)狀，神經(jīng)纖維終止于動

11、脈壁的平滑肌纖維。骨髓小動脈上的交感神經(jīng)纖維受延髓血管運動中樞的控制，但絕大多數(shù)的骨髓微血管床主要受血管活性物質(zhì)的調(diào)節(jié)。252021/7/20 星期二骨髓神經(jīng)的作用：（1）通過調(diào)節(jié)血管的舒縮，改變血竇的大小及血流速度的快慢等影響造血（2）神經(jīng)分泌的體液因子可直接作用于造血細(xì)胞（3）基質(zhì)細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子調(diào)節(jié)造血功能262021/7/20 星期二（三）基質(zhì)細(xì)胞及其分泌的調(diào)控因子骨髓基質(zhì)細(xì)胞包括成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、脂肪細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等，它們通過與造血干細(xì)胞的密切接觸起到支持和營養(yǎng)造血細(xì)胞的作用。各種基質(zhì)細(xì)胞都有分泌細(xì)胞因子的功能，其分泌的生物大分子物質(zhì)都與造血細(xì)胞的粘附有關(guān)，可粘附固定造血細(xì)胞。

12、272021/7/20 星期二基質(zhì)細(xì)胞還分泌多種細(xì)胞因子，如白細(xì)胞介素、FLT-3配基、干細(xì)胞因子、粒一巨噬細(xì)胞集落刺激因子、粒細(xì)胞集落刺激因子、巨噬細(xì)胞集落刺激因子等，這些細(xì)胞因子不僅直接作用于造血細(xì)胞，而且作用于基質(zhì)細(xì)胞，改變基質(zhì)細(xì)胞的增殖和分泌狀況，誘導(dǎo)其它細(xì)胞因子的生成。對造血細(xì)胞的增殖、分化和發(fā)育成熟起重要的調(diào)控作用。282021/7/20 星期二Go on. 292021/7/20 星期二第二節(jié) 造血細(xì)胞的生長發(fā)育和造血調(diào)控一、造血細(xì)胞的生長發(fā)育胚胎造血組織的發(fā)育是血細(xì)胞發(fā)生、發(fā)育研究的基礎(chǔ)，也是血液學(xué)研究必不可少前提。造血細(xì)胞的生長發(fā)育是一個連續(xù)不斷的復(fù)雜過程，造血器官內(nèi)的各種造

13、血細(xì)胞在造血微環(huán)境中通過細(xì)胞與細(xì)胞之間的相互作用，在各種細(xì)胞因子的誘導(dǎo)下，按一定的規(guī)律發(fā)育成為各種成熟的血細(xì)胞，然后釋放入血循環(huán)中。302021/7/20 星期二 （一）造血細(xì)胞生長發(fā)育的概念造血細(xì)胞的生長發(fā)育包括增殖、分化、成熟和釋放四個方面。造血細(xì)胞的增殖是指血細(xì)胞通過分裂而使其數(shù)量增加的過程。有絲分裂是造血細(xì)胞的主要增殖方式。312021/7/20 星期二母細(xì)胞有絲分裂后形成的子細(xì)胞同時都傾向分化成熟。子細(xì)胞還可進(jìn)一步增殖，每增殖一次就越傾向于進(jìn)一步分化。一般來講，一個原始細(xì)胞到成熟細(xì)胞可經(jīng)過45次分裂，如1個原始紅細(xì)胞可產(chǎn)生32個或64個成熟紅細(xì)胞。而巨核細(xì)胞的增殖（連續(xù)雙倍增殖DNA

14、）與其他系統(tǒng)血細(xì)胞的增殖方式不同，每增殖一次，核增大一倍，但胞質(zhì)并不分裂，屬多倍體細(xì)胞，形態(tài)上也表現(xiàn)為從原始到成熟胞體逐漸變大。322021/7/20 星期二造血細(xì)胞的分化（differentiation）是指細(xì)胞發(fā)育過程中失去某些潛能又獲得新的功能的過程，即由多潛能轉(zhuǎn)變?yōu)閱螡撃艿倪^程。分裂后的細(xì)胞在形態(tài)和功能上產(chǎn)生了新的特征，分化過程是不可逆的。332021/7/20 星期二造血細(xì)胞的成熟（maturation）是細(xì)胞從造血干細(xì)胞定向分化后，從原始經(jīng)幼稚到成熟的細(xì)胞發(fā)育過程，血細(xì)胞越成熟其形態(tài)越易辨認(rèn)，功能也日趨完善。342021/7/20 星期二成熟的血細(xì)胞在骨髓內(nèi)通過“髓血屏障”釋放入血

15、循環(huán)中，各種調(diào)節(jié)因素控制著血細(xì)胞的增殖、分化、成熟和釋放，從而維持血細(xì)胞數(shù)量和質(zhì)量的穩(wěn)定。352021/7/20 星期二（二）造血細(xì)胞生長發(fā)育的過程根據(jù)造血細(xì)胞的功能和形態(tài)特征，造血細(xì)胞的生長發(fā)育過程可為：造血干細(xì)胞、造血祖細(xì)胞、原始及幼稚細(xì)胞三個階段。原始及幼稚細(xì)胞階段的細(xì)胞是在骨髓涂片中從形態(tài)學(xué)上可以辨認(rèn)各系各階段的血細(xì)胞。362021/7/20 星期二造血干細(xì)胞階段造血組細(xì)胞階段原始及幼稚細(xì)胞階段成熟細(xì)胞372021/7/20 星期二二、造血干祖細(xì)胞干細(xì)胞（stem cell）是具有自我復(fù)制和多向分化能力的細(xì)胞。早期胚胎中的原始生殖細(xì)胞即胚胎干細(xì)胞，具有廣泛的發(fā)育和分化潛能，稱為全能干細(xì)

16、胞（totipotent hematopoietic stem cell,T HSC）。胚胎干細(xì)胞可分化為各類組織干細(xì)胞，造血組織中存在造血干細(xì)胞、血管干細(xì)胞和間質(zhì)干細(xì)胞。382021/7/20 星期二（一）造血干細(xì)胞造血干細(xì)胞（hematopoietic stem cell, HSC）的概念于20世紀(jì)初就有人提出，但當(dāng)時的含義不甚明確，研究內(nèi)容模糊不清，直至發(fā)現(xiàn)了脾集落形成單位之后，造血干細(xì)胞在六七十年代引起了人們的關(guān)注。隨著新技術(shù)的發(fā)展，造血干細(xì)胞在臨床應(yīng)用等方面潛在的巨大價值被逐步發(fā)現(xiàn)，目前已成為生命科學(xué)研究領(lǐng)域的熱門課題。392021/7/20 星期二造血干細(xì)胞又稱多能干細(xì)胞，由中胚層

17、細(xì)胞分化而來，是各種血細(xì)胞的始祖，具有高度自我更新、多向分化和增殖能力，并且在造血組織中含量極少，其形態(tài)酷似小淋巴樣細(xì)胞而難以辨認(rèn)。在體內(nèi)造血干細(xì)胞多數(shù)處于Go期。造血干細(xì)胞可增殖分化為髓系干細(xì)胞和淋巴干細(xì)胞。402021/7/20 星期二1.造血干細(xì)胞的基本特征(1)自我更新：即細(xì)胞通過有絲分裂產(chǎn)生的兩個子代細(xì)胞與親代細(xì)胞具有相同的特征。造血干細(xì)胞的自我更新是維持其數(shù)量平衡的基礎(chǔ)，亦稱自我維持。高度的自我更新能力是造血干細(xì)胞基本的生物學(xué)特征之一。412021/7/20 星期二(2）多向分化：即造血干細(xì)胞具備分化為各系造血祖細(xì)胞的潛能，是造血干細(xì)胞的另一個基本的生物學(xué)特征，造血干細(xì)胞的分化受到

18、多種正負(fù)調(diào)控因子的調(diào)節(jié)，在特定的條件下可以分化成紅細(xì)胞、粒細(xì)胞（中性、嗜酸性、嗜堿性）、單核細(xì)胞、血小板、組織嗜堿細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞及自然殺傷細(xì)胞等的祖細(xì)胞。分化是不可逆的，造血干細(xì)胞一旦定向分化為某種祖細(xì)胞，就不可能再變成其他的祖細(xì)胞。422021/7/20 星期二2造血干細(xì)胞檢測 單個細(xì)胞在生物體內(nèi)有能力長期重建造血是判斷該細(xì)胞為造血干細(xì)胞的“金標(biāo)準(zhǔn)”。由于造血干細(xì)胞的數(shù)量極少，且形態(tài)上不能區(qū)別，也沒有造血干細(xì)胞的表面標(biāo)志，目前還沒有建立體外直接測定造血干細(xì)胞的方法。432021/7/20 星期二（1）脾集落測試法 1961年Till等首先采用體內(nèi)試驗小鼠脾集落形成間接證明了造血

19、干細(xì)胞的存在：將受體小鼠以致死劑量射線照射后，破壞全部造血細(xì)胞，動物因造血功能衰竭而死亡；如輸以供體骨髓或血液，小鼠能存活，并在受體小鼠脾中形成紅系、粒系、巨核系細(xì)胞組成的結(jié)節(jié)即脾集落，經(jīng)證實所有這些細(xì)胞都是由單個細(xì)胞增殖分化而來，即脾集落形成單位（CFU-S）；如將脾結(jié)節(jié)細(xì)胞靜脈注射給受體小鼠，該小鼠也能存活。證實了骨髓或血液中存在血液細(xì)胞的祖先細(xì)胞。442021/7/20 星期二20世紀(jì)80年代出現(xiàn)了一系列體外檢測造血干細(xì)胞的試驗方法，但只能部分證實造血干細(xì)胞自我更新和多向分化兩個特征，如混合集落(CFU-Mix )培養(yǎng)， 高增殖潛能細(xì)胞(HPP-CFC）培養(yǎng)， 原始細(xì)胞集落形成細(xì)胞（CF

20、U-Blast )培養(yǎng)，長期培養(yǎng)起始細(xì)胞（LTC-IC )檢測等。452021/7/20 星期二（2）單克隆抗體法 利用FACS自動細(xì)胞分選系統(tǒng)分選出單個CD34+細(xì)胞亞群細(xì)胞-CD34+CD38+及CD34+CD38，在無血清體系中加入各種細(xì)胞因子（如SCF、IL-3、IL-6、GM-CSF及Epo）刺激，結(jié)果表明，CD34+ CD38單個細(xì)胞可形成原代集落，并可向紅系、粒系、巨噬系、巨核系等 細(xì)胞分化。證明了CD34+CD38細(xì)胞的性能接近于造血干細(xì)胞，同時也證明了造血干細(xì)胞具有多向分化的能力，還有實驗表明，造血干細(xì)胞具有向淋巴細(xì)胞分化的能力。462021/7/20 星期二目前造血干細(xì)胞的

21、表面標(biāo)記尚未確定。一般認(rèn)為CD34陽性細(xì)胞具有長期重建造血的能力，推測部分造血干細(xì)胞CD34陽性；CD34陽性CD38陰性細(xì)胞比CD34陽性細(xì)胞具有更強(qiáng)的長期造血能力；AC 133陽性細(xì)胞也被認(rèn)為是早期造血細(xì)胞的標(biāo)志。明確造血干細(xì)胞的表面標(biāo)記不但具有重要理論價值，也有助于分離純化高質(zhì)量的造血干細(xì)胞供臨床應(yīng)用。472021/7/20 星期二（二）造血祖細(xì)胞造血干細(xì)胞進(jìn)一步分化為各種造血祖細(xì)胞（hematopoietic progenitor cell）。造血祖細(xì)胞是一類由造血干細(xì)胞分化而來，但失去自我更新能力的過渡性、增殖性的細(xì)胞群，過去稱為定向干細(xì)胞。482021/7/20 星期二造血祖細(xì)胞有

22、年齡結(jié)構(gòu)，根據(jù)其分化能力，可分為多向祖細(xì)胞和單向祖細(xì)胞，多向祖細(xì)胞可進(jìn)一步分化 為單向祖細(xì)胞。通過體外造血細(xì)胞半固體培養(yǎng)證實了造血祖細(xì)胞的存在。492021/7/20 星期二產(chǎn)生紅細(xì)胞的祖細(xì)胞稱為： 紅細(xì)胞爆式集落形成單位（BFU-E)（早期） 和紅細(xì)胞集落形成單位(CFU-E)BFU-E 502021/7/20 星期二 產(chǎn)生粒細(xì)胞和單核細(xì)胞的祖細(xì)胞稱為： 粒-單核細(xì)胞集落形成單位（CFU-GM）CFU-GM512021/7/20 星期二產(chǎn)生巨核細(xì)胞的祖細(xì)胞稱： 巨核細(xì)胞集落形成單位（CFU-Meg）CFU-Meg522021/7/20 星期二另外，產(chǎn)生嗜酸性粒細(xì)胞的祖細(xì)胞稱為嗜酸性粒細(xì)胞集落

23、形成單位（CFU-Eo）；產(chǎn)生嗜堿性粒細(xì)胞的祖細(xì)胞稱為嗜堿性粒細(xì)胞集落形成單位（CFU-Bas）；產(chǎn)生T淋巴細(xì)胞的祖細(xì)胞稱為T淋巴細(xì)胞集落形成單位（CFU-TL）；產(chǎn)生B淋巴細(xì)胞的祖細(xì)胞稱為B淋巴細(xì)胞集落形成單位(CFU-BL) 。這些祖細(xì)胞失去了自我更新的能力，但有較強(qiáng)的增殖和定向分化能力。造血祖細(xì)胞表面的主要免疫標(biāo)記已明確，因此，根據(jù)這一特性，可采用流式細(xì)胞術(shù)或其他免疫學(xué)技術(shù)來分析造血祖細(xì)胞，甚至可以使之分離純化。532021/7/20 星期二（三）造血干祖細(xì)胞的臨床應(yīng)用造血干祖細(xì)胞的臨床應(yīng)用主要涉及到造血干祖細(xì)胞移植。目前造血干祖細(xì)胞主要來源于骨髓、外周血和臍血，不同來源的造血干祖細(xì)胞的

24、移植在臨床上各有其優(yōu)缺點。542021/7/20 星期二造血干祖細(xì)胞移植主要應(yīng)用于：1.血液系統(tǒng)惡性腫瘤，如急、慢性白血病等；2.血液系統(tǒng)非惡性腫瘤性疾病，如再生障礙性貧血、異常血紅蛋白病、Fanconi貧血、難治性貧血等；3.實體腫瘤化療后造血重建，如乳腺癌、卵巢癌、神經(jīng)母細(xì)胞瘤等；4.其他，如重癥聯(lián)合免疫缺陷癥、自身免疫性疾病、基因治療等。552021/7/20 星期二 三、造血調(diào)控造血細(xì)胞的增殖、分化受控于不同的調(diào)控系統(tǒng)，以保持各種血細(xì)胞數(shù)量和質(zhì)量的相對穩(wěn)定。造血調(diào)控作用于血細(xì)胞發(fā)育的每一階段，體內(nèi)許多因素參與了這一過程，其中細(xì)胞因子的調(diào)控占重要地位。細(xì)胞因子（cytokines）是一組

25、基因編碼的低分子量蛋白質(zhì)細(xì)胞外信號分子，有的是糖蛋白，有的則不含糖基，在機(jī)體內(nèi)含量極低，半衰期短，主要功能是在細(xì)胞間傳遞信息，從而影響造血活動。562021/7/20 星期二（一）集落刺激因子類( colony-stimulating factors, CSFs )CSFs在半固體細(xì)胞培養(yǎng)中能促進(jìn)造血細(xì)胞集落形成。主要有以下幾種：1.紅細(xì)胞生成素（erythropoietin，EPO） 主要的生物學(xué)功能是刺激紅系祖細(xì)胞的增殖和分化，以提高紅細(xì)胞數(shù)量。2.粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF) 除促進(jìn)粒系祖細(xì)胞形成集落外，G-CSF可誘導(dǎo)某些白血病細(xì)胞株分化成熟，激活中性粒細(xì)胞的吞噬功能，誘導(dǎo)早期造血

26、干祖細(xì)胞從場期進(jìn)人細(xì)胞周期。572021/7/20 星期二3.粒一巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF) GM-CSF除了促進(jìn)中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞祖細(xì)胞增殖、分化成熟外，對成熟細(xì)胞也產(chǎn)生作用4.巨噬細(xì)胞集落刺激因子（M-CSF） 促進(jìn)單核系祖細(xì)胞的增殖和分化，激活巨噬細(xì)胞的吞噬和分泌功能。5.多系集落刺激因子（multi-CSF） 促進(jìn)造血干祖細(xì)胞的增殖、分化，促進(jìn)多系集落生長。6.血小板生成素（thrombopoietin, TPO）促進(jìn)造血干祖細(xì)胞的增殖、分化；促進(jìn)巨核細(xì)胞集落形成。582021/7/20 星期二（二）白細(xì)胞介素（interleukin, IL)白細(xì)胞介素主要是白細(xì)胞產(chǎn)生的信

27、號分子，不僅在免疫系統(tǒng)中傳遞信息，同時也參與造血系統(tǒng)的造血調(diào)控，其主要生物學(xué)功能見（臨床免疫學(xué)檢驗。592021/7/20 星期二（三）其他細(xì)胞因子1.干細(xì)胞因子（stem cell factor, SCF） 又稱肥大細(xì)胞生長因子 促進(jìn)肥大細(xì)胞生長；協(xié)同促進(jìn)造血干祖細(xì)胞增殖、分化。2FLT-3配基(FLT-3 ligand, FL) 誘導(dǎo)處于靜止期的造血干祖細(xì)胞進(jìn)人細(xì)胞周期，促進(jìn)其擴(kuò)增。602021/7/20 星期二目前發(fā)現(xiàn)對造血有調(diào)節(jié)作用的細(xì)胞因子有近50種，它們對造血的調(diào)控有正向和負(fù)向調(diào)節(jié)，一種細(xì)胞因子對一類細(xì)胞可能以正向調(diào)節(jié)為主，而對另一類細(xì)胞則可能是反向抑制，并且不同的濃度作用效果也不一樣。大多數(shù)人類的細(xì)胞因子可以通過基因工程制備，有的已成功用于臨床，如EPO較早地用來治療各種貧血，尤其是與腎功能衰竭、化療、腫瘤骨髓浸潤有關(guān)的貧血，取得了顯著療效；G-CSF應(yīng)用于治療化療引起的中性粒細(xì)胞減少癥，骨髓移植和外周血造血干祖細(xì)胞的動員等。612021/7/20 星期二 第三節(jié) 造血干祖細(xì)胞體外培養(yǎng)技術(shù) 體內(nèi)造血干祖細(xì)胞在一個極復(fù)雜的造血微環(huán)境中增殖、分化生成血液細(xì)胞。體外造血祖細(xì)胞培養(yǎng)就是在體外模擬體內(nèi)的生理環(huán)境，將從機(jī)體中分離出的造血祖細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，使之生存、增殖分化。622021/7/20 星