第十八章基因診斷與基因醫(yī)治

1、第十八章 基因診斷與基因醫(yī)治一、 單項(xiàng)選擇題1內(nèi)源性基因發(fā)生變異不包括A 基因結(jié)構(gòu)突變B 基因擴(kuò)增C 基因重排D.基因表達(dá)異樣E.病原體基因侵入體內(nèi)2基因診斷的經(jīng)常使用技術(shù)方式不包括A.RFLP分析B.基因測序C.基因剔除D.ASO雜交法E.PCR/SSCP3將突變基因進(jìn)行矯正的基因醫(yī)治方式是A 基因滅活B自殺基因的應(yīng)用C 基因置換D.基因增補(bǔ)E.基因矯正4目前哪一種細(xì)胞不能作為基因醫(yī)治的靶細(xì)胞？A 淋巴細(xì)胞B 肝細(xì)胞C 腫瘤細(xì)胞D.造血細(xì)胞E.生殖細(xì)胞5外源性病原體基因感染人體后要緊引發(fā)哪一種疾病？A 心血管疾病B 遺傳病C 傳染病D.月中瘤E.高血壓6通過目的基因的非定點(diǎn)整合，使其表達(dá)產(chǎn)物

2、補(bǔ)償缺點(diǎn)基因的功能或增強(qiáng)原有功能的基因醫(yī)治方式是A 基因滅活B 基因置換C 基因矯正D.自殺基因的應(yīng)用 E.基因增補(bǔ)7間接體內(nèi)療法的基因程序中不包括A.選擇醫(yī)治基因B.將外源基因直接導(dǎo)入體內(nèi)C.選擇靶細(xì)胞D.選擇載體E.將外源基因?qū)氚屑?xì)胞8以下哪一種技術(shù)不是目前基因醫(yī)治采納的方式A 基因缺失B 基因置換C 基因矯正D.自殺基因的應(yīng)用 E.基因增補(bǔ)9基因組結(jié)構(gòu)突變發(fā)生在生殖細(xì)胞可能引發(fā)A 傳染病B 腫瘤C 心血管疾病D.高血壓E.遺傳病10利用反義核酸阻斷變異基因表達(dá)的基因醫(yī)治方式是A 基因矯正B 基因失活C 自殺基因的應(yīng)用D.基因增補(bǔ)E.基因置換11最確切的基因診斷方式是A 基因測序B 核酸

3、分子雜交C RFLP 分析D.斑點(diǎn)雜交法E. PCR/ASO法12以下哪一種檢測技術(shù)不屬于DNA 診斷A. RFLP分析B. PCRC. ASO雜交D.限制性內(nèi)切酶酶譜分析E. Northern雜交 13目前在基因醫(yī)治的臨床操作當(dāng)選用最多的基因載體是A 腺病毒相關(guān)病毒B PBR322C 噬菌體D.逆轉(zhuǎn)錄病毒載體E.脂質(zhì)體14目前基因醫(yī)治所采納的方式中，最經(jīng)常使用的是A 基因失活B 基因增補(bǔ)C 基因矯正D.自殺基因”應(yīng)用技術(shù)E.基因置換15利用外源基因表達(dá)一種特異性酶，催化藥物前體轉(zhuǎn)化為細(xì)胞毒性物質(zhì)而致使細(xì)胞死亡的基因醫(yī)治方式是（）A 基因矯正B 基因滅活C 自殺基因的應(yīng)用D.基因置換E.基因增

4、補(bǔ)16將外源醫(yī)治性基因?qū)雱游锛?xì)胞的方式不包括A DEAE- 葡聚糖法B 顯微注射法C 電穿孔法D. CaCl2沉淀法E.病毒介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移17. 以下方式中哪一種方式不是基因診斷的經(jīng)常使用技術(shù)或方式A 基因測序B 核酸分子雜交C PCRD. RFLP分析E.細(xì)胞培育 18非病毒介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)移的化學(xué)方式是哪一種？A 顯微注射B 電穿孔C 基因槍技術(shù)D DEAE 一葡聚糖法E DNA 直接注射法19 1990年采納基因醫(yī)治疾病并取得成功的一例是A 糖尿病B 重癥聯(lián)合免疫缺點(diǎn)綜合癥C.高膽固醇血癥D.弛中海貧血E.血友病 20以下哪一種方式不屬于非病毒介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)移的物理方式？C 顯微注射A DNA

5、直接注射法B 電穿孔D.脂質(zhì)體介導(dǎo)E.基因槍技術(shù)21基因診斷的技術(shù)特點(diǎn)不正確的選項(xiàng)是A 診斷靈敏度高B 屬于病因診斷，針對性強(qiáng)C.有很高的特異性D.技術(shù)單一，對操作人員要求低E.適用性強(qiáng)，診斷范圍廣:、多項(xiàng)選擇題1基因診斷可用于C 惡性腫瘤)A 遺傳病B 親子鑒定D.器官移植E.感染性疾病2以核酸分子雜交為基礎(chǔ)的基因診斷方式有B 限制性核酸內(nèi)切酶酶譜分析法A 基因序列測定C.基因剔除D.等位基因特異寡核甘酸探針雜交法E DNA 限制性片段長度多態(tài)性分析法3在基因醫(yī)治中，將外源基因?qū)雱游锛?xì)胞的物理方式有A 基因槍技術(shù)B 電穿孔C 氯化鈣沉淀法D.顯微注射E. DNA直接注射法4基因診斷中經(jīng)常使

6、用的分子生物學(xué)技術(shù)有A 基因測序B 細(xì)胞培育C 核酸分子雜交D DNA 芯片技術(shù)E PCR5基因醫(yī)治中最常利用的病毒載體有A 肝炎病毒D .腺相關(guān)病毒B HIVE.腺病毒C 逆轉(zhuǎn)錄病毒6.目前在基因醫(yī)治中常選用的基因載體是A.逆轉(zhuǎn)錄病毒B .質(zhì)粒D. HIVE.腺病毒.基因醫(yī)治可用于A.惡性月中瘤B.遺傳病D.心血管疾病E.免疫缺點(diǎn).基因醫(yī)治能夠采納的方式有A.應(yīng)用自殺基因B.基因矯正D.基因置換E.基因增補(bǔ).內(nèi)源基因的結(jié)構(gòu)突變包括A.基因重排B.轉(zhuǎn)導(dǎo)D.基因表達(dá)異樣E.基因擴(kuò)增C .腺病毒相關(guān)病毒C. AIDSC.基因失活C.點(diǎn)突變?nèi)⑻羁疹}.基因突變可致使 的改變，從而引發(fā) 。.外源性基因

7、變異是指 疾病。.膜上印跡雜交方式包括 、和 等類型。. Southern blotting式于1975年由 初創(chuàng)，該法可用于檢測 。. Nouthern blotting方式于1977年由 成立，該法可用于檢測 。. PCR技術(shù)的工作原理是模擬體內(nèi) 進(jìn)程；其改良的地方是用 取 代DNA聚合酶，用合成的 代替RNA引物。. PCR進(jìn)程中，每循環(huán)一次包括 、和 三大步。. PCR循環(huán)進(jìn)程中，變性是指 ;退火是指;延伸是指。. RT-PCRg指;其能夠歸納為三個(gè)時(shí)期： 、和。. PC叱術(shù)應(yīng)用十分普遍，如 、和 等。.基因診斷可用于 、和 等。.基因變異致病的要緊類型是 和。.目前基因醫(yī)治的要緊策略

8、有 、和 等。.基因診斷經(jīng)常使用技術(shù)方式有 、和。.內(nèi)源基因的變異可分為 和。.基因診斷中最經(jīng)常使用診斷技術(shù)是 和。.基因轉(zhuǎn)移方式歸納地講有 、和.目前用作基因轉(zhuǎn)移載體的病毒有逆轉(zhuǎn)錄病毒 和.目前基因醫(yī)治中導(dǎo)入基因的方式有 和。.對已知基因突變位點(diǎn)的檢測需人工合成兩種寡核甘酸探針，一種是與 立補(bǔ)的寡核甘酸，另一種是與 互補(bǔ)的寡核甘酸四、名詞說明1.基因失活5.基因診斷9.自殺基因13.基因置換4. Southern blotting8.生物芯片12.核酸分子雜交16. PCR技術(shù).RNAi3.基因矯正.反義RNA7.基因醫(yī)治.免疫基因醫(yī)治11.基因增補(bǔ). Northern blotting 1

9、5.探針17.中性突變18。限制性片段長度多態(tài)性五、問答題.簡述核酸分子雜交的大體原理。.基因醫(yī)治要符合哪些要求？.當(dāng)前基因醫(yī)治擬采納哪些方式？.簡述基因診斷的特點(diǎn)。.試述內(nèi)源基因結(jié)構(gòu)突變的要緊類型和內(nèi)源基因結(jié)構(gòu)突變所致的疾病。.簡述基因診斷的臨床應(yīng)用概況。.目前基因診斷可應(yīng)用于哪些疾病？.簡述基因醫(yī)治的大體進(jìn)程。.簡述核酸分子雜交（周相）操作的要緊步驟。.簡述PCR技術(shù)原理和大體進(jìn)程。.何謂Southern blotting ? 其要緊有哪些用途。.何謂Nouthern blotting?其要緊有哪些用途。參考答案一、 單項(xiàng)選擇題21 D二、多項(xiàng)選擇題A、B、 C、E 2B、 D、E 3 A

10、、 B、 D、 E4A、 C、 D、 E5C、D、 E6 A、 C、 E7 A、 B、 C、 D 、 E8A、 B 、 C、 D、 E9 A 、 C、 E四、填空題1相應(yīng)表型；疾病。2病原體感染性Southern blotting Nouthern blotting 斑點(diǎn)雜交Edwin Southern 基因組 DNA 特異堿基序列Alwine 總 RNA或 mRNADNA復(fù)制 TaqDNA聚合酶 DNA引物7變性退火延伸8 DNA 雙鏈解開為單鏈模板鏈與引物的結(jié)合 引物的延伸9逆轉(zhuǎn)錄PCR 提取 RNA RT PCR. DNA 的微量分析克隆目的基因 病原體檢查 腫瘤診斷遺傳病的基因診斷惡性

11、腫瘤的基因診斷感染性疾病的基因診斷法醫(yī)鑒定12內(nèi)源基因突變外源基因的入侵13基因矯正基因置換基因增補(bǔ) 基因失活14核酸雜交PCR 基因芯片 基因測序15基因結(jié)構(gòu)突變表達(dá)異樣16核酸分子雜交PCR17化學(xué)法物理法 生物 （病毒）法18物理方式化學(xué)方式19間接體內(nèi)療法直接體內(nèi)療法20突變基因堿基序列 正常基因堿基序列五、名詞說明1是將特定的反義核酸（反義 RNA 、反義 DNA 和核酶 ）導(dǎo)入細(xì)胞，在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平阻遏某些基因的異樣表達(dá)，從而達(dá)到醫(yī)治目的。2. RNAi是指在特定因子作用下，由導(dǎo)入胞內(nèi)的雙鏈RNA降解成的約22nt&右的SiRNA ,后者利用堿基配對原那么與特異基因表達(dá)的 mRNA

12、 結(jié)合，并促使其降解，從而在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控基因的表達(dá)。3是指將致病基因中的異樣堿基進(jìn)行糾正，而正常部份予以保留的基因醫(yī)治技術(shù)。 DNA 分子經(jīng)限制性內(nèi)切酶酶切和凝膠電泳后，可按分子量大小分離，再進(jìn)行變性處置后， 將單鏈 DNA 從凝膠中吸附轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜或尼龍膜上， 然后在該濾膜上與標(biāo)記探針進(jìn)行雜交反映，稱為SouthernER跡雜交法。.是利用分子生物學(xué)技術(shù)，直接檢測體內(nèi)DNA或RNA的結(jié)構(gòu)及其表達(dá)是不是異樣，從而對疾病做出診斷，為醫(yī)治提供依據(jù)。6反義RNA 即是與其mRNA 堿基序列互補(bǔ)的 RNA 。7是運(yùn)用基因工程技術(shù)改換、校正或增補(bǔ)靶細(xì)胞內(nèi)有缺點(diǎn)的基因，以達(dá)到醫(yī)治疾病的目的。8.基

13、因芯片又叫DNA芯片、cDNA芯片、寡核甘酸陣列。其要緊是利用固相支持物上數(shù)以萬計(jì)的已知堿基序列的寡核苷酸片段，與標(biāo)記樣品進(jìn)行分子雜交，通過檢測、分析雜交信號的強(qiáng)弱，以研究組織細(xì)胞內(nèi)基因表達(dá)譜或基因不同表達(dá)等。9在病毒或細(xì)菌中的某個(gè)基因可產(chǎn)生一種特異性酶，它可將本來無細(xì)胞毒或低細(xì)胞毒藥物前體轉(zhuǎn)化為細(xì)胞毒性物質(zhì)，將感染細(xì)胞殺死，此種基因稱為 “自殺基因” 。10將編碼外源性抗原的基因?qū)塍w細(xì)胞表達(dá)抗原蛋白，誘導(dǎo)機(jī)體免疫系統(tǒng)激活，達(dá)到防病醫(yī)治目的。11在保留異樣基因的情形下把正常基因?qū)塍w細(xì)胞，通過基因的非定點(diǎn)整合進(jìn)入體細(xì)胞 DNA ，并使其表達(dá)，以補(bǔ)償缺點(diǎn)基因的功能；或?qū)氚屑?xì)胞原先不表達(dá)的基因

14、，利用其表達(dá)產(chǎn)物醫(yī)治疾病。12核酸分子經(jīng)變性與復(fù)性，兩條具有互補(bǔ)堿基序列的單鏈核酸分子結(jié)合成雜化雙鏈的進(jìn)程。13是將特定的目的基因?qū)塍w內(nèi)，對其缺點(diǎn)基因進(jìn)行精準(zhǔn)的原位替換，使細(xì)胞內(nèi)基因得以正常表達(dá)。14將提取的RNA 樣本經(jīng)變性瓊脂糖凝膠電泳分離后，轉(zhuǎn)移到硝酸纖維薄膜上，再采納標(biāo)記探針與之雜交，經(jīng)顯影或顯色，檢測信號強(qiáng)度，以用于組織細(xì)胞中總RNA或mRNA的定性和定量分析。一般是指帶有標(biāo)記的、并已知堿基序列的DNA或RNA片段，能與待測樣本中單鏈核 酸分子互補(bǔ)配對結(jié)合，進(jìn)而檢測是不是有同源序列。又稱基因擴(kuò)增技術(shù)。在TaqDNA聚合酶催化下，以目的基因?yàn)槟０?、dNTP為原料， 在特異性引物基礎(chǔ)上

15、沿著模板鏈延伸合成互補(bǔ)鏈。反復(fù)通過變性、退火和延伸這一循環(huán)進(jìn)程，使目的基因呈指數(shù)擴(kuò)增。錯(cuò)義突變假設(shè)發(fā)生在蛋白編碼的非必需區(qū)，編碼蛋白的活性不改變，這種突變稱為中性突變。18若是突變發(fā)生在限制性核酸內(nèi)切酶的識別位點(diǎn)上，用相關(guān)的限制酶切割基因組DNA，就會產(chǎn)生長度改變的片斷，稱為限制性片斷長度多態(tài)性（RFLP） 。五、問答題1核酸分子雜交的大體原理是依據(jù)DNA 雙鏈堿基互補(bǔ)、變性和復(fù)性的原理，用帶有標(biāo)記的、并已知堿基序列的核酸片段作為探針，與待測樣本中單鏈核酸分子互補(bǔ)配對結(jié)合，進(jìn)而檢測樣本中是不是存在與其互補(bǔ)的同源核酸序列。2.基因醫(yī)治要符合：屬于已明確的單基因缺點(diǎn)性疾??；僅限于體細(xì)胞；靶細(xì)胞 有

16、親緣性和可操作性等；有明顯療效和無或低危害性等；表達(dá)水平穩(wěn)固，時(shí)程長； 必需有動物實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)3目前基因醫(yī)治擬采納的方式有基因矯正、基因置換、基因增補(bǔ)、反義核酸技術(shù)及自殺基因的應(yīng)用等。4.基因診斷的對象是基因，它具有一樣診斷所不具有的以下特點(diǎn)：針對性強(qiáng)、特異性高，以特定的基因?yàn)樘綔y靶點(diǎn)；診斷靈敏度高，PCR技術(shù)具有放大效應(yīng)，PCR技術(shù)的幾何擴(kuò)增效應(yīng)可檢出pg水平的靶基因；適用性強(qiáng)、診斷范圍廣，可用于內(nèi)源性基因 和外源性基因的檢測；簡便快速、易行。5內(nèi)源基因結(jié)構(gòu)突變包括點(diǎn)突變、缺失或插入突變、染色體易位、基因重排、基因擴(kuò)增等。突變假設(shè)發(fā)生在生殖細(xì)胞，可引發(fā)各類遺傳性疾病；假設(shè)發(fā)生在其他細(xì)胞，可致使腫

17、瘤、心血管疾病等。6.基因診斷臨床應(yīng)用概況：遺傳病的基因診斷：如鐮刀形紅細(xì)胞貧血病的琳蛋白基因的第六個(gè)密碼子發(fā)生單個(gè)堿基突變。這一突變改變了該基因內(nèi)部的一個(gè)內(nèi)切酶Mst n作用位點(diǎn)。當(dāng)把正常人和帶有基因突變者的基因組 DNA用Mst R酶解后，用 琳蛋白基 因探針雜交， 結(jié)果會顯現(xiàn)不同的 DNA 條帶， 依此對其進(jìn)行基因診斷。 腫瘤的基因診斷：從分子生物學(xué)角度來看， 腫瘤的發(fā)生是由某些因素的作用所致的多個(gè)癌基因的激活或抑癌基因的缺失。因此有人以為腫瘤是一種多基因異樣性疾病。依其基因突變事實(shí)，可采納相應(yīng)的技術(shù)對腫瘤進(jìn)行基因診斷。診斷結(jié)果對了解癌變機(jī)制，腫瘤分類分型及預(yù)后均有指導(dǎo)意義。感染性疾病的

18、基因診斷：采納分子雜交技術(shù)和PCR技術(shù)等對感染性疾病進(jìn)行基因診斷， 能夠快速準(zhǔn)確地診斷出致病微生物的種類； 檢測出帶菌者和潛在感染性；檢測病原微生物耐藥性，及進(jìn)行病原流行病學(xué)調(diào)查等。7目前基因診斷可應(yīng)用于遺傳性疾病、腫瘤、感染性疾病和某些傳染性流行病等的診斷、分類分型；還可用于器官移植的組織配型。8.大體進(jìn)程如下：a）醫(yī)治基因的選擇 選擇對疾病有醫(yī)治作用的特定目的基因是醫(yī)治的 首要問題。b）基因載體的選擇有病毒載體和非病毒載體。經(jīng)常使用病毒載體，如逆轉(zhuǎn)錄病毒等。c）靶細(xì)胞的選擇 僅限選擇體細(xì)胞，如淋巴細(xì)胞、造血細(xì)胞，上皮細(xì)胞等。d）基因轉(zhuǎn)移是重要環(huán)節(jié)。導(dǎo)入哺乳動物細(xì)胞的方式有非病毒介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)移

19、和病毒介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移。 非病毒介導(dǎo)的包括物理的和化學(xué)的方式。 如顯微注射、 電穿孔等物理方式，磷酸鈣沉淀、脂質(zhì)體介導(dǎo)等化學(xué)方式。e）外源基因表達(dá)的挑選利用載體中的標(biāo)志基因?qū)D(zhuǎn)染細(xì)胞進(jìn)行挑選。 f） 回輸體內(nèi) 將醫(yī)治性基因修飾的細(xì)胞以不同方式回輸體內(nèi)以發(fā)揮醫(yī)治成效。如淋巴細(xì)胞可經(jīng)靜脈回輸入血。9要緊步驟為：（ 1）待測核酸樣本制備；（2）凝膠電泳分離待測DNA； （3）用變性液讓凝膠中的DN度性；（4） Southern印跡轉(zhuǎn)移；（5） DNA勺固定；（6）特異性探針的制備與 標(biāo)記；（ 7）預(yù)雜交、雜交；（ 8）雜交信號檢測；（ 9）結(jié)果分析判定。PCR大體原理：在體外進(jìn)行DNA復(fù)制進(jìn)程，以目的基因?yàn)槟０澹O(shè)計(jì)的特異寡核 甘酸為引物，dNTP為原料，由TaqDNA聚合酶催化在引物基礎(chǔ)上進(jìn)行延伸合成互補(bǔ)鏈， 通過變性、退火和延伸這一進(jìn)程的反復(fù)進(jìn)行，可使目的基因在短時(shí)刻內(nèi)呈指數(shù)擴(kuò)增。大體成份：DNA模板、特異性DNA引物、TaqDNA聚合酶