PCR儀操作規(guī)程

1、 一、目 的：建立PCR儀操作規(guī)程，規(guī)范其操作。 二、范 圍：PCR儀。 三、責 任 人：質檢部負責人、檢驗員、設備負責人。 四、內 容： 1.開機，打開機器后部的主開關。 2.將樣品放入樣品槽后，將熱蓋上的旋鈕按順時針方向旋至對應的管型處使其緊閉。 3.設計程序 3.1常規(guī)PCR反應：出現主菜單后，按standard或new方式編制要運行的PCR程序，在輸入預變性的溫度及時間、變性的溫度及時間、退火的溫度及時間、延伸的溫度及時間、Sock的溫度后，按start/stop鍵開始啟動運行當前程序。 如果設計程序時選擇了CNTRL/TUBE命令，則程序啟動后需要輸入反應管的相應型號和樣品體積。用S

2、EL鍵選擇反應管的型號，用ENTER鍵確認。輸入溶液體積，用Enter鍵確認。當程序運行時，按Opt鍵可以顯示大概的運行時間和預期結束的時間。 3.2梯度PCR反應： 開機后按照常規(guī)PCR反應設置程序，按控制面板上的四個方向選擇鍵將閃爍的光標移至程序退火這一步的數字序號處（一般為3），按住控制面板上的OPTIONS鍵，則進入溫度梯度程序設計。 按方向選擇鍵將光標移至G=0.0（輸入數值范圍0-12），一旦輸入這個數值，即對樣品槽的每一列設定了不同的溫度，預設的溫度在樣品槽的中間，沿著樣品槽從做至右溫度依次升高。用0.2ml的管可設置12個不同的溫度，用0.5ml的管則可設置11個不同的溫度。在

3、Option/Gradient中查看溫度分布。反應槽最高溫度不能超過99。 4.其它參數設置及說明：T輸入溫度、循環(huán)次數、以及相關選項。0.0溫度變異量（0.0）：每一個循環(huán)溫度增加或減少的量。必須注意溫度不能超過99。例如，變異量是+0.1，25個循環(huán)，則起始溫度不能超過96.5。先輸入數值，然后輸入加減號。+：溫度上升；-：溫度下降。0.00時間變異量（S）：輸入每個循環(huán)時間的增加或減少（最大為1分鐘）R=3.0/SRamp(K/S)代表了一個循環(huán)曲線的升降溫速率。這個值越高，則加熱或降溫就越快。允許值范圍：0.3-3.0K/S。0.0/SRampincrement(S):輸入升降溫速率的

4、變異量。該速率不能超過3K/S，因此，如果起始速率為0.3，變異量為0.1，則最大循環(huán)次數為27個。 5.程序運行 程序設計好后可直接按控制面板上的start鍵運行，如果設計程序時選擇了CNTRL/TUBE命令，則程序啟動后需要輸入反應管的相應型號和樣品體積。用SEL鍵選擇反應管的型號，用ENTER鍵確認。輸入溶液體積，用Enter鍵確認。當程序運行時，按Opt鍵可以顯示大概的運行時間和預期結束的時間。Lid用來確定熱蓋的溫度。允許值為0-110。啟動時，NOWAIT無需熱蓋溫度，程序直接啟動。WAIT程序直到熱蓋達到預設的溫度才啟動。 6.關機,程序運行結束后，按Exit退出原程序。關閉機器

5、后部的開關。7.注意：7.1Sock時，溫度應設為10，時間不要超過30分鐘。溫度過高，時間過長，易導致儀器的損壞。 7.2操作時，要嚴格遵守以上原則，及時記錄儀器運行的情況。 8.保養(yǎng)： 8.1樣品池的清洗,先打開蓋子，然后用95%乙醇或10%清洗液浸泡樣品池5min，然后清洗被污染的孔；用微量移液器吸取液體，用棉簽吸干剩余液體；打開PCR儀，設定保持溫度為50的PCR程序并使之運行，讓殘余液體揮發(fā)去除。一般510min即可。 8.2熱蓋的清洗,對于熒光定量PCR儀，當有熒光污染出現，而且這一污染并非來自樣品池時；或當有污染或殘跡物影響到熱蓋的松緊時，需要用壓縮空氣或純水清洗墊蓋底面，確保樣品池的