3200QTrap液質(zhì)聯(lián)用儀作業(yè)指導(dǎo)書

1、ABI3200QTrap高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀作業(yè)指導(dǎo)書（草稿）*食品檢測(cè)中心實(shí)驗(yàn)室（2008年12月修訂）本作業(yè)指導(dǎo)書依據(jù)高效液相色譜儀方法通則（JY/T024-1996）、有機(jī)質(zhì)譜分析方法通則（JY/T003-1996）和美國應(yīng)用生物系統(tǒng)公司3200QTRAP液質(zhì)聯(lián)用儀操作手冊(cè)有關(guān)內(nèi)容編寫。一、檢測(cè)儀器1、儀器名稱高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀（簡(jiǎn)稱LC-MS-MS）。型號(hào)：3200QTRAP（美國AppliedBiosystems公司）。2、儀器組成液相色譜部分：Agilent1200RRLC，配有在線脫氣機(jī)、超高壓二元泵、自動(dòng)進(jìn)樣器；串聯(lián)質(zhì)譜部分：ABI3200QTRAP，配有Turb

2、oVTM離子源、串聯(lián)四級(jí)桿/線性離子阱。3、主要性能指標(biāo)離子化方式：ESI和APCI電離質(zhì)量范圍：（51700）amu分辨率：6900質(zhì)量穩(wěn)定性：0.1amu/12h靈敏度：1pgreserpine,ESI+,MRM掃描（m/z:609/195），信噪比S/N120:1掃描速度：4000amu/sec質(zhì)量準(zhǔn)確度：0.01%（全質(zhì)量數(shù)范圍）4、方法原理高效液相色譜二元泵將流動(dòng)相泵人系統(tǒng)并混合，自動(dòng)進(jìn)樣器將待測(cè)樣品注入流動(dòng)相中，隨流動(dòng)相進(jìn)入色譜柱，由于樣品不同組分在色譜柱中保留時(shí)間不同，各組分被分開，依次進(jìn)入離子源。在離子源中，各組分以ESI或APCI方式電離，被加速后進(jìn)入質(zhì)量分析器。3200QT

3、RAP的質(zhì)量分析器主要由Q1、Q2、Q3三組四級(jí)桿串聯(lián)組成（如圖1所示）。Q1可將分子離子按質(zhì)荷比（m/z）大小分開；Q2是碰撞室，可將母離子進(jìn)一步破碎為碎片離子；Q3具有四級(jí)桿和線性離子阱兩種功能，作為四級(jí)桿時(shí)可將分子離子或碎片離子按質(zhì)荷比大小分開，作為離子阱還可富集離子從而提高檢測(cè)靈敏度。各組分的不同離子在質(zhì)量分析器中被破碎、分離，并按質(zhì)荷比大小依次抵達(dá)監(jiān)測(cè)器，經(jīng)記錄即得到按不同質(zhì)荷比排列的離子質(zhì)譜圖。3200QTRAP通過串聯(lián)四級(jí)桿/線性離子阱兩種不同質(zhì)譜技術(shù)的結(jié)合，可以在單次分析中對(duì)復(fù)雜樣本中的單個(gè)成分同時(shí)進(jìn)行定性和定量，也可以對(duì)多個(gè)化合物進(jìn)行定量分析。整臺(tái)儀器的控制、數(shù)據(jù)采集、數(shù)據(jù)處

4、理、結(jié)果輸出均由PC計(jì)算機(jī)WindowsXP操作系統(tǒng)支持下的Analystl.5軟件控制完成。離子源質(zhì)量分析器監(jiān)測(cè)器圖13200QTRAP質(zhì)量分析器示意圖二、樣品1、樣品要求本儀器適合分子量在51700amu范圍內(nèi)的有機(jī)樣品的定性及定量分析。待測(cè)樣品必須能溶解于水或其它有機(jī)溶劑中。若樣品或配制的樣品溶液發(fā)生沉淀、揮發(fā)、變質(zhì)等異?，F(xiàn)象時(shí)，應(yīng)重新取樣或重新配制溶液。2、試劑要求所有的試劑均選用色譜純級(jí)，所用水的電導(dǎo)率應(yīng)大于18KQ。流動(dòng)相必須用0.2pm或0.45pm濾膜過濾后方可使用。3、分離條件要求在液相色譜儀上確定分離條件，使待測(cè)組分能完全分離，且該色譜條件中流動(dòng)相不應(yīng)含有不揮發(fā)性鹽，如磷酸

5、鹽。三、操作步驟實(shí)施檢測(cè)操作的人員，必須熟悉該儀器的操作規(guī)程，儀器的工作狀態(tài)、包括檢測(cè)靈敏度和分辨率，必須滿足檢測(cè)項(xiàng)目的要求。1、開機(jī)前準(zhǔn)備開機(jī)前應(yīng)檢查儀器室內(nèi)電、氣的供應(yīng)情況及空調(diào)機(jī)的工作狀態(tài)是否穩(wěn)定，檢查真空機(jī)械泵泵油是否需要更換。只有當(dāng)UPS工作正常，Gas1/Gas2、CurtainGas和ExhaustGas的壓力分別穩(wěn)定在0.35、0.35和0.7Mpa,環(huán)境溫度為1030C，相對(duì)濕度小于70%時(shí)才能開機(jī)。2、開機(jī)1）打開真空機(jī)械泵上的電源開關(guān)。2）真空機(jī)械泵繼續(xù)工作至少15分鐘后，打開MS電源主開關(guān)。3）等真空度達(dá)到2x10-5Torr（綠色指示燈不閃）后，打開PC計(jì)算機(jī)電源。3

6、、儀器調(diào)諧參照3200QTRAP操作指南和3200QTRAP安裝指南進(jìn)行調(diào)諧校準(zhǔn)，使得到的標(biāo)準(zhǔn)譜圖的質(zhì)量準(zhǔn)確度、質(zhì)量穩(wěn)定性、掃描分辨率和靈敏度達(dá)到要求的指標(biāo)。4、建立分析方法雙擊Analyst圖標(biāo)打開軟件，建立或選擇Project，在Configure模式中雙擊HardwareConfiguration，打開HardwareConfigurationEditor，激活MassSpectrometryOnly。雙擊TuneandCalibrate模式中的ManualTuning，用針泵進(jìn)樣，然后手動(dòng)優(yōu)化DP、EP、CEP、CXP、CE、CAD等Compound-dependent參數(shù)，保存質(zhì)譜方

7、法。打開HardwareConfigurationEditor，激活MassSpectrometry、Pump、Autosampler和Oven，在Acquire模式中雙擊BuildAcquisitionMethod，在File菜單中點(diǎn)擊Open，打開保存的方法，在AcquisitionMethod右上角，點(diǎn)擊鼠標(biāo)右鍵出現(xiàn)Add/RemoveDeviceMethod，添加Pump、Autosampler和Oven。根據(jù)液相色譜儀上確定的分離條件設(shè)置相關(guān)參數(shù)，選擇采集同步模式，然后保存該方法，在方法名中加入“LC”以示區(qū)別。雙擊TuneandCalibrate模式中的CompoundOptimi

8、zation，然后用FIA進(jìn)樣方式自動(dòng)優(yōu)化CurtainGas、Gas1、Gas2、TEM等Source-dependent參數(shù)，此時(shí)不用接色譜柱，優(yōu)化完成后保存方法，連接色譜柱，試運(yùn)行該方法，根據(jù)實(shí)際情況對(duì)方法進(jìn)行修改和完善。5、分析樣品雙擊Analyst圖標(biāo)打開軟件，選擇Project，在Configure模式中雙擊HardwareConfiguration打開HardwareConfigurationEditor，激活MassSpectrometry、Pump、Autosampler和Oveno在Acquire模式中雙擊BuildAcquisitionBatch，打開BatchEdito

9、r，添加Set，然后添加sample，選擇檢測(cè)方法，更改樣品名稱，選擇樣品盤類型，設(shè)置樣品瓶在樣品盤上的位置，這樣就建立了一個(gè)Batch。進(jìn)入submit選項(xiàng)卡，選擇要提交的樣品，點(diǎn)擊submit提交。點(diǎn)擊ViewQueue圖標(biāo)，打開QueueManager窗口，查看提交后待測(cè)樣品的狀態(tài)。點(diǎn)擊Equilibrate平衡鈕，選用采集方法，設(shè)置預(yù)平衡時(shí)間510分鐘，進(jìn)行預(yù)先平衡：待柱壓平衡后，點(diǎn)擊StartSample開始數(shù)據(jù)采集。采集完成后，沖洗色譜柱及流路至少30分鐘。打開HardwareConfigurationEditor，滅活系統(tǒng)。6、關(guān)機(jī)(無特殊情況不關(guān)MS主機(jī)，只關(guān)閉PC計(jì)算機(jī)即可)

10、關(guān)閉PC計(jì)算機(jī)系統(tǒng)。關(guān)閉MS電源主開關(guān)停止分子渦輪泵系統(tǒng)。待機(jī)械泵繼續(xù)工作至少15分鐘，然后關(guān)掉機(jī)械泵上的電源開關(guān)。等待至少15分鐘讓儀器“自然”卸真空，然后通過儀器后部真空管接口卸掉全部真空。四、測(cè)試結(jié)果1、分析數(shù)據(jù)調(diào)出譜圖，根據(jù)定性及定量分析的需要，分別打開離子流圖和質(zhì)譜圖，進(jìn)行分析。若譜圖未達(dá)到要求，需檢查儀器并重新優(yōu)化色譜、質(zhì)譜條件。2、實(shí)驗(yàn)報(bào)告按要求填寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告，附原始譜圖，注明儀器型號(hào)，電離方式，測(cè)試日期，測(cè)試條件(電離方式、掃描形式、質(zhì)量掃描范圍等)等。五、維護(hù)與保養(yǎng)1、離子源的維護(hù)1)每天檢測(cè)完后沖洗離子源流路；2)每周清洗一次離子源腔體和CurtainPlateOrifice；3)發(fā)現(xiàn)噴霧針、PEEK管堵塞時(shí)要及時(shí)更換。2、真空機(jī)械泵的維護(hù)1)每周檢查泵油的油量；2)每三個(gè)月更換一次泵油，以保持儀器性能穩(wěn)定與長壽。3、其他項(xiàng)目每三個(gè)月進(jìn)行一次儀器除塵，清洗或更換空氣過濾網(wǎng)、傾倒廢液收集瓶；每次開關(guān)機(jī)時(shí)用PPG進(jìn)行質(zhì)量校正；發(fā)現(xiàn)靈敏度下降時(shí)需要清洗InterfaceQ0；色譜柱用完后及時(shí)沖洗，保存時(shí)按說明書要求充滿甲醇或乙腈。六、出現(xiàn)故障及處理方法1、若出現(xiàn)異?，F(xiàn)