微生物第八章病原學(xué)診斷與防治

1、第八章 病原學(xué)診斷(zhndun)與防治廣州醫(yī)學(xué)院病原(bngyun)生物學(xué)教研室 陳 曉 湘共三十六頁診斷病原學(xué)檢測血清學(xué)檢測防治特異性防治：人工主動免疫、人工被動免疫(bi dn min y)非特異性防治：抗生素、抗病毒藥物、抗真菌藥物共三十六頁第一節(jié) 細(xì)菌學(xué)診斷(zhndun)細(xì)菌學(xué)診斷(zhndun)檢測病原菌及其抗原，產(chǎn)物或核酸血清學(xué)診斷檢測患者血清中特異性抗體共三十六頁一、病原菌檢測(jin c)標(biāo)本采集與送檢原則：根據(jù)不同疾病和不同病期，采取不同標(biāo)本。無菌操作，避免雜菌污染。應(yīng)在使用抗菌藥物前采集標(biāo)本。盡可能采集病變明顯部位的材料。標(biāo)本必須新鮮(xn xin)，采集后盡快送檢。送

2、檢過程中要采取適當(dāng)?shù)谋４娣绞健Ｗ龊脴?biāo)記，詳細(xì)填寫化驗單，保證各環(huán)節(jié)準(zhǔn)確無誤。共三十六頁致病菌的檢驗(jinyn)程序標(biāo)本(biobn)形態(tài)結(jié)構(gòu)檢查分離培養(yǎng)與鑒定病原菌抗原檢測 其它檢測光鏡、電鏡、染色法形態(tài)特征培養(yǎng)特征生化反應(yīng)藥敏試驗血清學(xué)反應(yīng)沉淀反應(yīng)協(xié)同凝集免疫熒光對流免疫電泳酶免疫測定免疫印跡細(xì)菌代謝產(chǎn)物（氣相色譜）PCR查細(xì)菌核酸噬菌體分型細(xì)菌素測定分子生物學(xué)技術(shù)動物試驗共三十六頁人體受致病菌感染(gnrn)后，免疫系統(tǒng)產(chǎn)生特異性抗體?？贵w的量常隨病程而增加，表現(xiàn)為效價（滴度）升高。用已知的細(xì)菌或抗原檢測患者體液中有無相應(yīng)特異性抗體和其效價的動態(tài)變化，可作為感染性疾病的輔助診斷。由于一般

3、采取病人血清進(jìn)行試驗，故稱為血清學(xué)診斷(serological diagnosis)。血清學(xué)診斷試驗最好取患者急性期和恢復(fù)期雙份血清，當(dāng)后者的抗體效價比前者升高大于等于4倍時方有意義。常用方法：直接凝集試驗、乳膠凝集試驗、沉淀試驗、補(bǔ)體結(jié)合試驗、中和試驗、ELISA。二、血清學(xué)診斷(zhndun)共三十六頁第二節(jié) 病毒學(xué)診斷(zhndun) 一、標(biāo)本的采集與送檢(sn jin)早期（前驅(qū)期、急性期、發(fā)病前12天）根據(jù)不同病毒感染，采集不同部位標(biāo)本病毒室溫易失活，應(yīng)低溫保存，快速送檢無菌采集與抗生素處理（防止細(xì)菌污染）血清學(xué)實驗檢查抗體應(yīng)采集雙份血清共三十六頁二、病毒的分離培養(yǎng)(piyng)與鑒

4、定（一）病毒的分離動物接種：選擇(xunz)易感動物及適宜接種部位，觀察發(fā)病情況雞胚培養(yǎng)：不同病毒選擇不同接種部位（絨毛尿囊膜，尿囊腔，羊膜腔，卵黃囊），分離流感病毒最常用。細(xì)胞培養(yǎng)：分離病毒最常用的方法（1）原代細(xì)胞來源于動物、雞胚、人胚組織細(xì)胞，對多種病毒敏感，但只能傳2-3代。（2）二倍體細(xì)胞在體外分裂50-100代后仍保持2倍體染色體數(shù)目的單層細(xì)胞，可用于病毒分離和疫苗生產(chǎn)。（3）傳代細(xì)胞能在體外無限傳代的細(xì)胞，多由癌細(xì)胞或二倍體細(xì)胞突變而來，不能用于疫苗生產(chǎn)。共三十六頁病毒在培養(yǎng)細(xì)胞中增殖(zngzh)的指標(biāo)細(xì)胞的變化細(xì)胞病變效應(yīng)（CPE）：即某些病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖引起的特有的細(xì)胞病變

5、（細(xì)胞變圓、聚集、壞死、溶解、脫落(tulu)等）細(xì)胞融合：形成多巨核細(xì)胞包涵體：某些病毒在培養(yǎng)細(xì)胞胞漿或核內(nèi)形成的嗜酸或嗜堿性的團(tuán)塊狀結(jié)構(gòu)。紅細(xì)胞吸附干擾現(xiàn)象細(xì)胞代謝改變（pH）共三十六頁正常(zhngchng)細(xì)胞病變(bngbin)細(xì)胞共三十六頁（二）病毒(bngd)的數(shù)量與感染性測定滴定：測定單位體積中感染性病毒的數(shù)量 蝕斑測定法病毒感染單層細(xì)胞后，產(chǎn)生的局限性病灶，稱蝕斑。蝕斑是由一個感染性病毒體復(fù)制形成的，稱蝕斑形成單位，病毒懸液中的感染性病毒量以每毫升的蝕斑形成單位來表示(biosh)。 50%組織細(xì)胞感染量 雞胚動物或細(xì)胞后，引起 50% 發(fā)生死亡或病變的最小量。共三十六頁（三

6、）新分離(fnl)病毒的鑒定核酸類型的測定理化性狀的檢測形態(tài)學(xué)觀察(gunch)血清學(xué)鑒定基因測序和生物對比共三十六頁三、病毒感染的血清學(xué)診斷(zhndun) 用已知病毒抗原檢測病人(bngrn)血清中相應(yīng)抗體以診斷病毒性疾病。中和試驗補(bǔ)體結(jié)合試驗血凝抑制試驗?zāi)z免疫擴(kuò)散試驗共三十六頁 四、 病毒感染的快速(kui s)診斷 （一）形態(tài)學(xué)檢查電鏡和免疫電鏡直接(zhji)觀察病毒普通光鏡觀察包涵體共三十六頁共三十六頁共三十六頁共三十六頁共三十六頁共三十六頁（二）檢測病毒蛋白抗原 用已知特異性抗體直接檢測病毒蛋白抗原（簡便、敏感、特異）常用(chn yn)方法： 免疫熒光技術(shù)（IF） 固相放射免

7、疫測定（SPRIT） 酶免疫技術(shù)（EIA）等。（三）檢測(jin c)病毒特異性IgM抗體檢測病毒特異性IgM抗體可診斷急性感染。共三十六頁（四） 檢測病毒(bngd)核酸 1 核酸雜交 斑點雜交（dot hybridization） 原位雜交（in site hybridization） DNA印跡雜交（Southern blot） RNA印跡雜交 （Northern blot）2 核酸擴(kuò)增聚合酶鏈反應(yīng) （polymerase chain reaction，PCR）連接酶鏈反應(yīng)（ligase chain reaction，LCR）反轉(zhuǎn)錄PCR（Reverse transcrptase PCR

8、，RT-PCR） 3 基因芯片(j yn xn pin)技術(shù)（gene chip） 共三十六頁第三節(jié) 真菌學(xué)診斷(zhndun)標(biāo)本(biobn)直接鏡檢深部標(biāo)本染色標(biāo)本 G染色G+圓形大小不均有芽生孢子 分離培養(yǎng) 沙氏培養(yǎng)基 菌落觀察角質(zhì)標(biāo)本不染色10%KOH觀察菌絲、孢子類型 大小 顏色 皺摺 鑒定動物實驗（致病性真菌）接種觀察發(fā)病情況死亡后取標(biāo)本進(jìn)一步鑒定皮膚超敏反應(yīng) 快速診斷血清學(xué)實驗核酸檢測真菌毒素檢測共三十六頁共三十六頁新生隱球菌(qijn)腦脊液涂片共三十六頁假菌絲共三十六頁第四節(jié) 特異性預(yù)防(yfng)與治療一、人工主動免疫(artificial active immunity

9、) 將疫苗(vaccine)或類毒素接種于人體，使機(jī)體主動產(chǎn)生獲得性免疫力的一種防治微生物感染(gnrn)的措施，主要用于預(yù)防。共三十六頁疫苗死疫苗活疫苗新型活疫苗基因工程疫苗重組(zhn z)載體疫苗合成疫苗亞單位疫苗DNA疫苗轉(zhuǎn)基因植物疫苗治療性疫苗類毒素 外毒素 0.3%0.4%甲醛(ji qun) 類毒素用于人工主動免疫的生物制劑共三十六頁共三十六頁二、人工(rngng)被動免疫(artificial passitive immunity) 注射含有特異性抗體的免疫血清、純化免疫球蛋白或細(xì)胞因子等免疫制劑，使機(jī)體立即獲得特異性免疫。 人工被動免疫作用作用發(fā)揮迅速，但這些免疫物質(zhì)(wzh

10、)不是病人自己產(chǎn)生，故維持時間短。主要用于治療或緊急預(yù)防。共三十六頁抗毒素抗菌血清(xuqng)胎盤丙種球蛋白、血清丙種球蛋白其他免疫制劑用于人工(rngng)被動免疫的生物制劑共三十六頁兩種人工免疫(rn n min y)的比較區(qū)別要點人工主動免疫人工被動免疫免疫物質(zhì)抗原抗體或細(xì)胞因子等接種次數(shù)1-3次1次免疫出現(xiàn)時間慢（注射后2-4W）快（注射后立刻出現(xiàn)）免疫維持時間長（數(shù)月數(shù)年）短（2-3W）用途多用于預(yù)防多用于治療或應(yīng)急預(yù)防共三十六頁三、細(xì)菌感染(gnrn)的治療抗菌藥物(yow)人工合成化學(xué)藥物微生物合成的抗生素共三十六頁（一）抗菌藥物種類按生物來源分按化學(xué)結(jié)構(gòu)和性質(zhì)分（二）主要作用

11、機(jī)制影響細(xì)胞壁合成影響細(xì)胞膜功能(gngnng)影響細(xì)菌蛋白合成影響細(xì)菌核酸代謝共三十六頁四、病毒感染的治療(zhlio)抗病毒化學(xué)制劑核苷類藥物抑制病毒基因復(fù)制 抑制病毒基因轉(zhuǎn)錄(zhun l)非核苷類反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑蛋白酶抑制劑其他藥物（金剛烷胺）干擾素及干擾素誘生劑治療干擾素干擾素誘生劑基因治療共三十六頁五、真菌(zhnjn)的治療衛(wèi)生、干燥、消毒（福爾馬林）避免直接或間接(jin ji)與患者接觸各種癬癥（局部感染治療） 外用抗真藥（易復(fù)發(fā)）深部真菌病（系統(tǒng)感染） 除去誘因，提高免疫力，口服抗真菌藥物（副作用大）共三十六頁內(nèi)容摘要第八章 病原學(xué)診斷與防治。第八章 病原學(xué)診斷與防治。特異性防治：人工主動免疫、人工被動免疫。根據(jù)不同疾病和不同病期，采取不同標(biāo)本。用已知的細(xì)菌或抗原檢測患者體液中有無相應(yīng)特異性抗體和其效價的動態(tài)變化，可作為感染性疾病的輔助診斷。第二節(jié) 病毒學(xué)診斷。根據(jù)不同病毒感染，采集不同部位標(biāo)本。動物接種