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文檔簡介

1、實驗一 3, 5 - 二硝基水楊酸(DNS)法 測定總糖和還原糖 掌握還原糖和總糖測定的基本原理 掌握比色法測定還原糖的操作方法和分光光度計的使用。實驗?zāi)康倪€原糖包括哪些糖?測試還原糖的方法有哪些?總糖包括哪些化合物?如何測定?3,5二硝基水楊酸(DNS)法的基本原理是什么?優(yōu)點?3,5二硝基水楊酸(DNS)法測定時為什么要設(shè)計空白管?思考題實驗原理還原糖與非還原糖還原性糖(Reducing sugar) 與斐林、土倫、本氏試劑呈正反應(yīng)的糖非還原性糖(Nonreducing sugar)無變旋、還原、成脎性質(zhì)在NaOH和丙三醇存在下,3,5-二硝基水楊酸(DNS)與還原糖共熱后被還原生成氨基化

2、合物。在過量的NaOH堿性溶液中此化合物呈桔紅色,在540nm波長處有最大吸收,在一定的濃度范圍內(nèi),還原糖的量與光吸收值呈線性關(guān)系,利用比色法可測定樣品中的含糖量。 本方法操作簡便,快速,雜質(zhì)干擾較少。試管和試管架 堿滴定管(50ml)鐵架臺 滴定管夾吸量管(1ml和2ml) 容量瓶(100ml)水浴鍋 玻璃漏斗和燒杯。三腳架 量筒白瓷板 玻璃棒 實驗器材762 分光光度計 756 分光光度計電子天平 恒溫水浴 3,5-二硝基水楊酸(DNS)試劑:稱取6.5g DNS溶于少量熱蒸餾水中,溶解后移入1000ml容量瓶中,加入2mol/L氫氧化鈉溶液325ml,再加入45g丙三醇,搖勻,冷卻后定容

3、至1000ml。葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液:準(zhǔn)確稱取干燥恒重的葡萄糖100mg,加少量蒸餾水溶解后,再定容至100ml,即含葡萄糖為1.0mg/ml。6 M HCl:取250ml濃HCl(3538%) 蒸餾水稀釋到500ml。碘-碘化鉀溶液:稱取5g碘,10g碘化鉀溶于100ml蒸餾水中。6N NaOH:稱120g NaOH溶于500ml蒸餾水中。0.1% 酚酞指示劑。實驗材料 :玉米粉實驗試劑 (一)葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線制作管號葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液(ml)蒸餾水(ml)最終濃度(mg/ml)OD540nm00.01.00.010.20.80.220.40.60.430.60.40.640.80.20.851.00.0

4、1.01. 取6個試管,按下表加入1.0mg/ml葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液和蒸餾水 實驗操作:2. 向各試管中分別加入DNS試劑1 ml,充分混合,放入沸水浴中加熱煮沸2 min進行顯色,取出試管放入盛有冷水的燒杯中迅速冷卻。3.向各管中分別加入8 ml蒸餾水,充分混合。4.以空白管(0號管)做對照,于540nm 波長下調(diào)0,然后測定各管的OD值。5.以光吸收值作為縱坐標(biāo),葡萄糖含量為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果該直線不通過零點,必須重做。 (二)還原糖的制備1. 稱取2g玉米粉,把它放入一個100ml的三角瓶中,然后加入2030ml蒸餾水,攪拌均勻。2. 把三角瓶放于一個50水浴中保溫 30 min,不時

5、攪拌。3. 拿出三角瓶,將三角瓶內(nèi)含物轉(zhuǎn)入50ml的容量瓶中:過濾,定溶,充分混合,濾出液即為還原糖提取液。(三) 樣品總糖的水解和提取 1. 取1g玉米粉,放在100ml三角瓶中,加15ml水溶解,再加10ml 6mol/L 鹽酸,混勻。2. 將三角瓶置于沸水浴中加熱煮沸30 min。3.取出12滴置于白瓷板上,加1滴I-KI溶液檢查水解是否完全。如已水解完全,則不呈現(xiàn)藍色。 4.拿出三角瓶,冷卻,過濾,濾出液即為總糖提取液。5.加入3-5滴酚酞指示劑,混勻,用6mol/L的NaOH中和至溶液呈微紅色。將中和后的溶液轉(zhuǎn)入100 ml的容量瓶中定容。(四)樣品中含糖量的測定1. 取5支試管,編號,按下表向每支試管中加入試劑。2. 用管1做對照,測定每管在540nm下的OD值。將結(jié)果記錄在表中。試 劑管 號12345還原糖抽提液(ml)0.00.50.50.00.0總糖抽提液(ml)0.00.00.00.50.5DNS(ml)0.50.50.50.50.5加熱在沸水浴中加熱2分鐘,然后冷卻之。蒸餾水(ml)4.54.04.04.04.0OD540 3. 根據(jù)還原糖和總糖的OD值,使用葡萄糖的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線,計算還原糖和總糖

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