最新臨床檢驗儀器重點資料

1、檢驗儀器復(fù)習(xí)第一章 緒論一、常用醫(yī)學(xué)檢驗儀器的基本特征與性能檢驗儀器的分類國家管理部門對檢驗儀器的分類： 一類管理的儀器：是指通過常規(guī)管理足以保證其安全性、有效性的醫(yī)療器械。如醫(yī)用離心機 二類管理的儀器：是指對其安全性、有效性應(yīng)當加以控制的醫(yī)療器械。如自動生化分析儀等 三類管理的儀器：是指植入人體，用于支持維持生命，或?qū)θ梭w具有潛在危險，對其安全性和有效性 必須嚴格控制的醫(yī)療器械。如生物安全柜等臨床上對檢驗儀器的分類：臨床檢驗常規(guī)儀器 、目視檢驗儀器 （顯微鏡）、分離分析檢驗儀器（離心機、電泳儀） 、細胞及分 子生物學(xué)檢驗儀器（紫外 F見分光光度計）、光譜分析檢驗儀器、質(zhì)譜、波譜分析檢驗儀器。

2、檢驗儀器的基本結(jié)構(gòu)（一）取樣（或加樣 ）裝置 取樣裝置是把待檢測的樣品引入儀器。對于實驗室儀器來說，其取樣裝置就是進樣器。（二）預(yù)處理系統(tǒng) 預(yù)處理系統(tǒng)是將樣品先加以一系列處理，以滿足檢測系統(tǒng)對樣品的各種狀態(tài)的要求。（三）分離裝置 將樣品各個組分加以機械分離或物理區(qū)分的裝置都屬分離裝置。對分離裝置的要求，主要是分辨率。（四）檢測器檢測器是檢測儀器的核心部分。 工作時根據(jù)樣品中待檢測組分的含量發(fā)出相應(yīng)的信號， 這種信號多數(shù) 是以電參數(shù)輸出的。（五）信號處理系統(tǒng)信號處理系統(tǒng)是信號從檢測器發(fā)出到顯示出來過程中的一系列中間環(huán)節(jié)。 對它的要求是確保信號不失 真地傳輸給顯示裝置。（六）補償裝置補償裝置的作用

3、是消除或降低客觀條件或樣品的狀態(tài)對檢測的影響， 特別是樣品的溫度， 環(huán)境的壓力、 溫度的波動對檢測結(jié)果的影響。（七）顯示裝置 顯示裝置的功能就是把檢測結(jié)果顯示出來。有模擬顯示和數(shù)字顯示兩種。（八）輔助裝置 輔助裝置是為了確保儀器測量的精度，保證操作條件而設(shè)置的附加裝置。（九）樣品前處理系統(tǒng) 樣品前處理系統(tǒng)的工作任務(wù)是將標本分類、離心、分裝、編排、運送、存儲等。檢驗儀器的常用性能指標（一）靈敏度：檢驗儀器在穩(wěn)態(tài)下輸出量變化與輸入量變化之比；（二）誤差；（三）噪音；（四）最小檢測量：指檢測儀器能確切反應(yīng)的最小物質(zhì)含量；（五）精確度：是指在一定的條件下進行多次檢測時，所的檢測結(jié)果彼此之間的符合程度。

4、（六）可靠性；（七）重復(fù)性：在同一檢測方法與條件下在一不太長時間內(nèi)檢測同一參數(shù)所得的分散程度。（八）分辨率；（九）測量范圍和示值范圍；（十）線性范圍： 是指輸入與輸出成比例的輸入含量的范圍。 也就是反應(yīng)曲線呈直線的那一段所對應(yīng)的物質(zhì)含量范圍；（十一）響應(yīng)時間；（十二）頻率響應(yīng)范圍重復(fù)性與精密度的關(guān)系 精密度主要考察檢驗儀器的穩(wěn)定性，重復(fù)性主要是考察方法的穩(wěn)定性。檢驗儀器的選購原則質(zhì)量原則、實用原則、價格原則、服務(wù)原則、規(guī)范原則第二章 離心機（掌握常用的離心方法、專用離心機的臨床應(yīng)用）離心現(xiàn)象 物體在離心力場中表現(xiàn)的沉降運動現(xiàn)象。應(yīng)用離心沉降進行物質(zhì)的分析和分離的技術(shù)稱為離心技術(shù) 實現(xiàn)離心技術(shù)的

5、儀器是離心機。離心機的工作原理利用旋轉(zhuǎn)運動的離心力以及物質(zhì)的沉降系數(shù)或懸浮密度的差異進行分離、 濃縮和提純生物樣品的一種 方法。顆粒的沉降速度取決于離心機的轉(zhuǎn)速、顆粒的質(zhì)量、大小和密度。常用的離心方法根據(jù)離心原理， 對不同樣品的分離選擇不同的離心方法。 臨床實驗室常用的離心方法大致可分為 平衡 離心法、等密度離心法、經(jīng)典式沉降平衡離心法 等三類。A、平衡離心法是根據(jù)粒子大小、形狀不同進行分離的方法，包括差速離心法和速率區(qū)帶離心法。差速離心法：又稱為分步離心法。根據(jù)被分離物的沉降速度不同，采用不同的離心速度和時間 進行分步離心。該法主要用于分離大小和密度差異較大的顆粒。又稱為區(qū)帶離心法。該法又分

6、為速率區(qū)帶離心法和等密度區(qū)帶離心法。該方法主要用于沉降速 度差別不大的微粒， 將樣品放在一定惰性梯度介質(zhì)中進行離心沉淀或沉降平衡， 在一定離心力下把顆 粒分配到梯度液中某些特定位置上，形成不同區(qū)帶的分離方法。B、等密度離心法（又稱等比重離心法）是以粒子密度差進行分離的方法。等密度離心法和上述速率 區(qū)帶離心法合稱為密度梯度離心法。C、經(jīng)典式沉降平衡離心法主要用于對生物大分子分子量的測定、純度估計、構(gòu)象變化等。專用離心機的臨床應(yīng)用A、低速離心機：臨床實驗室主要用于全血中的血漿、血清的分離及尿液、胸腹水、腦脊液等有形成 分的分離。B、高速離心機：基礎(chǔ)實驗室對各種生物細胞、無機物溶液、懸浮液及膠體溶液

7、的分離、濃縮和提純等。C、超速離心機：主要用于科研，對樣本中亞細胞器的分離，病毒、核酸、蛋白質(zhì)及多糖的分離。第三章顯微鏡（顯微鏡的結(jié)構(gòu)及性能特點）光學(xué)顯微鏡顯微鏡是由兩組會聚透鏡組成的光學(xué)折射成像系統(tǒng)。把焦距較短、靠近觀察物、成實像的透鏡組 稱為物鏡（ object lens ），而焦距較長，靠近眼睛、成虛像的透鏡組稱為目鏡（ ocular lens ）。 基本結(jié)構(gòu)機械部分：鏡座、鏡柱、鏡臂、鏡筒、調(diào)焦裝置、載物臺（物鏡轉(zhuǎn)換器）光學(xué)部分：目鏡、物鏡、反光鏡、聚光鏡放大倍數(shù)：目鏡的放大倍數(shù)瀚鏡的放大倍數(shù)性能參數(shù)（一）數(shù)值孔徑又叫鏡口率，是物體與物鏡間媒質(zhì)的折射率n與物鏡孔徑角的一半（B正弦值的乘

8、積，通?？s寫為NA , 即NA=nsin B（二）分辨率顯微鏡的最重要參數(shù)，指透鏡能分辨兩點之間的最小距離。提高顯微鏡分辨率的方法 : 增大物鏡的數(shù)值孔徑、用短波長的光照射。如紫外光顯微鏡，電子顯微鏡。 精品文檔（三）放大率 顯微鏡經(jīng)多次成像后最終所成 （放大的 ）像的大小相對于原物體大小的比值，常記作 M。（四）視野又稱視場 （field） ，是指通過顯微鏡所能看到標本所在空間的范圍。（五）景深與焦長又稱焦點深度， 是指在成一幅清晰像的前提下， 像平面不變，景物沿光軸前后移動的距離稱 “景深”。 景物不動，像平面沿光軸前后移動的距離稱 “焦長”。（六）鏡像亮度和清晰度鏡像亮度即顯微鏡的圖像亮

9、度的簡稱。 高倍率工作條件下的暗場、 偏光、攝影顯微鏡等都需要足夠的 亮度，與照明及物鏡的性能參數(shù)相關(guān)。鏡像清晰度是指圖像的輪廓清晰、襯度適中的程度。（七）工作距離 從物鏡前表面中心到被觀察標本間滿足工作要求的距離范圍，與物鏡的數(shù)值孔徑成反比。 一般情況下，物鏡的數(shù)值孔徑赿大，其工作距離赿小。電子顯微鏡基本結(jié)構(gòu)電子光學(xué)系統(tǒng)（照明系統(tǒng)、成像系統(tǒng)） 、真空系統(tǒng)、供電系統(tǒng)、機械系統(tǒng)、觀察顯示系統(tǒng)分類透射電鏡、掃描電鏡、掃描隧道顯微鏡透射電鏡：分辨率高， 可用來觀察組織和細胞內(nèi)部的超微結(jié)構(gòu)以及微生物和生物大分子的全貎， 觀察 薄樣品。掃描電鏡：特點分辨率高、立體感強、放大倍率范圍廣 掃描隧道顯微鏡：分

10、辨率極高、可在真空、大氣、液體等條件下工作、非破壞性測量、觀看三維表面 結(jié)構(gòu)。第四章 紫外 -可見分光光度計（紫外 -可見分光光度計工作原理、基本類型及其特點、紫外 -可見分光光度計的基本結(jié)構(gòu)及各部件的 基本功能）分光光度計 ：將各種波長的混合光分離出每一單色光， 并測量其強度的儀器。 200nm-400nm 紫外， 400-800nm 可見光。吸收光譜 ：不同的物質(zhì)會吸收不同波長的光。改變?nèi)肷涔獾牟ㄩL，并依次記錄物質(zhì)對不同波長光的 吸收程度，就得到該物質(zhì)的吸收光譜 。紫外 -可見分光光度計的基本結(jié)構(gòu) ：光源、單色器（復(fù)合光變成單色光） 、吸收池（能透過紫外線時 石英玻璃或藍寶石制作） 、檢測

11、器（光電管、光電倍增管） 、顯示系統(tǒng)；雙光度紫外分光光度計的基本 結(jié)構(gòu)：結(jié)構(gòu)是在以上基礎(chǔ)上加入光束分裂器或斬波器。光的吸收定律（朗伯 -比爾定律 ）：當用一束單色光照射吸收溶液時，其吸光度與液層厚度 b 及溶 液濃度 c 的乘積成正比。朗伯-比爾定律:T = =10卄A - m.F 11入射光聲度rT：誦射光確度k:啜光帝赧朗伯-比爾定律適用的條件是：入射光為單色光、溶液濃度不能過大紫外-可見分光光度計的分類單波長分光光度計：單光束單波長分光光度計、雙光束單波長分光光度計、雙波長分光光度計第五章臨床血液常規(guī)檢驗儀器（掌握血細胞分析儀的概念、庫爾特原理、儀器的基本結(jié)構(gòu)）1血細胞分析儀對一定體積全

12、血內(nèi)血細胞異質(zhì)性進行自動分析的臨床檢驗常規(guī)儀器。又稱血細胞自動計數(shù)儀（ABCC）、血液學(xué)自動分析儀（AHA）。庫爾特（電阻抗）血細胞檢測原理：血細胞與等滲的電解質(zhì)溶液相比為相對的不良導(dǎo)體、電阻值大于稀釋液的電阻值、當細胞通過檢測器微孔的孔徑感受區(qū)時，在內(nèi)外電極之間恒流源電路上，電阻值瞬間增大，產(chǎn)生一個電壓脈沖信號、產(chǎn)生的脈沖信號數(shù)，等于通過的細胞數(shù)，脈沖信號幅度大小與細胞體積大小成正比。血細胞分析儀基本結(jié)構(gòu)機械系統(tǒng)、電學(xué)系統(tǒng)、血細胞檢測系統(tǒng)、血紅蛋白測定系統(tǒng)、計算機控制系統(tǒng)。白細胞和紅細胞檢測分為白細胞和紅細胞、 血小板兩個通道。 紅細胞和血小板的檢測： 紅細胞體積和血小板體積間有一個 明顯界

13、限，血小板計數(shù)準確容易。白細胞的檢測：三分群，大白細胞群（中性粒細胞） 、中白細胞群 （單核細胞、嗜酸、嗜堿性粒細胞等）小細胞群（淋巴細胞） 。網(wǎng)織紅細胞檢測原理網(wǎng)織紅細胞中嗜堿性物質(zhì) RNA ，在活體狀態(tài)下與特殊的熒光染料結(jié)合。熒光強度與 RNA 含量成正比。用流式細胞術(shù)檢測網(wǎng)織紅細胞大小和 RNA 含量及血紅蛋白的含量。血紅蛋白檢測原理除干式、無創(chuàng)型外，各型 BCA 對血紅蛋白測定都采用光電比色原理。血細胞懸液中加入溶血劑后， 紅細胞溶解釋放出血紅蛋白， 后者與溶血劑中有關(guān)成分結(jié)合形成血紅蛋 白衍生物，進入血紅蛋白測試系統(tǒng)。特定波長（530550nm）下進行光電比色。（血液凝固分析儀檢測原

14、理和基本結(jié)構(gòu)）血液凝固分析儀 ：對血栓與出血有關(guān)成分自動檢測的臨床常規(guī)檢驗儀器。血凝儀檢測原理 ：凝固法（最常用）、底物顯色法、免疫學(xué)法、干化學(xué)法。光學(xué)法原理：是用光探 測凝固過程中血漿濁度的（吸光度）變化來判斷終點；光電磁珠法原理：是用光探測鋼珠振幅衰減程 度來判斷終點； 雙磁路磁珠法原理： 是用電磁探測鋼珠振幅衰減程度來判斷終點， 振幅衰減到 50%血凝儀基本結(jié)構(gòu) 半自動血凝儀：主要由樣本預(yù)溫槽和試劑預(yù)溫槽、加樣器、檢測系統(tǒng)（光學(xué)、磁場）及微機組成。 全自動血凝儀：包括樣本傳送及處理裝置、試劑冷藏位、樣本及試劑分配系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)、計算機、 輸出設(shè)備及附件等第七章 臨床尿液檢驗儀器（試劑帶的

15、反應(yīng)原理、尿液分析儀的檢測原理、流式細胞術(shù)尿有形成分分析儀的工作原理 ）試劑帶的反應(yīng)原理多聯(lián)試劑帶是將多種項目的試劑塊集成在一個試劑帶， 使用多聯(lián)試劑帶， 浸入一次尿液可同時測定多 個項目。尼龍膜：防止大分子物質(zhì)對反應(yīng)的污染；絨制層：包括碘酸鹽層和試劑層：碘酸鹽層：可以破壞維生素 C 等干擾物質(zhì)， 試劑層：含有試劑成分，主要與尿液中測定物質(zhì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生顏色變化； 吸水層：可使尿液均勻快速的浸入，并能抑制尿液流到相鄰的反應(yīng)區(qū)；精品文檔塑料底層：作支持體。尿液分析儀的檢測原理此類儀器一般用微電腦控制， 將浸有尿液的試劑帶放在儀器比色槽內(nèi)， 試帶上已產(chǎn)生的化學(xué)反應(yīng)的各 種試劑墊被光源照射， 其

16、反射光被球面積分儀接收， 球面積分儀的光電管被反射的雙波長光 （包括通 過濾光片的測定光和一束參考光） 照射。測定每種試劑帶塊反射光的光量值與空白塊的反射光量值進 行比較，通過計算機求出反射率，換算成濃度值，便可由分析儀打印出半定量的數(shù)值。流式細胞術(shù)尿有形成分分析儀的工作原理（ 1） 稀釋、染色的標本通過鞘液池當一個尿液標本被稀釋液稀釋和染液染色后， 它靠液壓作用通過鞘液流動池， 當反應(yīng)樣品從噴嘴出口 進入鞘液流動室時， 它被一種無粒子顆粒的鞘液包圍， 使每個細胞以單個縱列的形式通過流動池的中 心（豎直）軸線。（ 2） 氬激光照射在這里每個尿液細胞將被氬激光光束照射。每個細胞有不同程度的： 熒

17、光強度：是從染色尿液細胞發(fā)出的熒光強度， 主要反映細胞的定量特性， 如細胞膜、核膜、線粒體、 核酸）、散射光強度： （這種儀器測定的是前向角散射光 Fsc,forward scattere light , 它成比例的反映細胞的大 ?。╇娮杩沟拇笮。海娮杩闺娦盘栔饕c細胞的體積成正比） 。（3）測定熒光、散射光和電阻抗儀器正是將這種熒光、 散射光和電阻抗的信號轉(zhuǎn)變成電信號， 分析這些電信號， 才能使得每個尿液標本產(chǎn)生出直方圖和散射圖，然后分析這些圖形，即可區(qū)別出每個細胞并得出每個細胞的形態(tài)。第八章 自動生化分析儀器自動生化分析儀器 ：是將生物化學(xué)分析過程中的取樣、加試劑、去干擾、混合、保溫反應(yīng)

18、、自動檢 測、結(jié)果計算、數(shù)據(jù)處理和打印報告，以及實驗后的清洗等步驟自動化的儀器。特點 ：靈敏、準確、高效、節(jié)約、快速化；分類：根據(jù)結(jié)構(gòu)分為：連續(xù)流動式（又稱管道式分析儀，易交叉污染，操作繁瑣） 、分離式（又稱 順序式。污染小、靈活準確，最常用）、離心式（又稱同步式， 自動化程度低， 基本不用）、干化學(xué)式；基本結(jié)構(gòu) 樣品處理系統(tǒng)（樣品裝載與輸送裝置、閉蓋穿刺、開蓋閉蓋裝置、試劑倉、樣品和試劑取樣單元、攪 拌系統(tǒng)）、檢測系統(tǒng)（光源、分光裝置、比色杯、恒溫裝置、清洗裝置、信號轉(zhuǎn)換與傳輸裝置） 、計算 機系統(tǒng)（微機、顯示器、等） 。性能指標：檢測準確度（正確度、精密度） 、自動化程度、分析效率、應(yīng)用范

19、圍。第九章 臨床電化學(xué)分析儀器（電解質(zhì)分析儀和血氣分析儀的分類、結(jié)構(gòu)和工作原理） 精品文檔電解質(zhì)分析儀 ：采用離子選擇性電極 （ ISE ）測量體液中離子濃度的儀器。 測量樣品中的指標： 鉀、 鈉、氯、鈣、鋰、 pH 值等。優(yōu)點：具有設(shè)備簡單、操作方便、選擇性高、成本低、快速準確。電極：指示電極和參比電極 （Ag/Agcl 電極 ）。血清 pH 值的測定，其測量電極采用玻璃電極， pH 的敏 感程度取決于電極的玻璃膜。電解質(zhì)分析儀結(jié)構(gòu) ：板面系統(tǒng)、電極系統(tǒng)、液路系統(tǒng) （直接影響準確度和穩(wěn)定性 ）、電路系統(tǒng)、軟件 系統(tǒng)。3血氣分析儀：利用電極對血樣中的酸堿度（pH）、二氧化碳分壓（PC02 ）和

20、氧分壓（P02 ）進行 測定的儀器。結(jié)構(gòu)：電極系統(tǒng)、管路系統(tǒng)、電路系統(tǒng)。必須將溫度控制在 37 度左右。電極：只有 P02 是伏安型傳感器，其余為離子極。電解質(zhì)分析儀的常見故障： 儀器不工作；定標不能確定；檢測不到樣品液；液路堵塞；樣品不能吸 入，管路有氣泡。血氣分析儀常見故障： 樣品吸入不良；管道漏液、管路堵塞；定標不準確。第十章 臨床微生物檢驗儀器分為自動血培養(yǎng)系統(tǒng)與自動微生物鑒定及藥敏分析系統(tǒng)1. 自動血培養(yǎng)系統(tǒng)原理：通過自動監(jiān)測培養(yǎng)基（液）中的混濁度、 pH 值、代謝終產(chǎn)物 C02 的濃度、熒光標記底物或代謝產(chǎn)物 精品文檔等的變化，定性地檢測微生物的存在。 功能：檢測標本中是否有微生物

21、存在，計算機自動掃描進行連續(xù)監(jiān)測，當微生物生長代謝導(dǎo)致某些生長指數(shù)超標時，儀器自動報警提示有細菌生長。三種模式：以培養(yǎng)基導(dǎo)電性和電壓為基礎(chǔ)、以測量氣壓為基礎(chǔ)、光電原理為基礎(chǔ)。2. 自動血培養(yǎng)系統(tǒng)結(jié)構(gòu) ：培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)儀（恒溫、振蕩、檢測） 、數(shù)據(jù)管理系統(tǒng)。自動血培養(yǎng)系統(tǒng)常見故障： 溫度異常、瓶孔被污染、儀器對測試中的培養(yǎng)瓶出現(xiàn)異常反應(yīng)。自動微生物鑒定及藥敏分析系統(tǒng)原理： 采用微生物數(shù)碼鑒定原理，抗菌藥物敏感性測試實驗其實質(zhì) 是微型化的肉湯稀釋試驗 。功能：培養(yǎng)基上分離的可疑致病菌配制成純菌液， 放入自動微生物鑒定及藥敏分析系統(tǒng)中， 通過計算 機自動掃描、讀數(shù)、分析、最后報告鑒定及藥敏結(jié)果。自動微

22、生物鑒定及藥敏分析系統(tǒng)結(jié)構(gòu) ：測試卡、菌液接種器、菌液接種器、數(shù)據(jù)管理系統(tǒng)。第十一章 臨床免疫檢驗儀器（臨床免疫檢驗常用儀器的特點）1. ELISA ：酶聯(lián)反應(yīng)吸附測定也叫固相酶免疫法，是酶免疫分析儀常用技術(shù)。2. 酶標儀與光電比色計不同 ：不是比色皿而是塑料微孔板、以垂直光束進入待測液。發(fā)光免疫分析儀 ：發(fā)光反應(yīng)與免疫反應(yīng)結(jié)合， 采用微量倍增技術(shù)， 敏感度好、 特異性高、試劑安全、精品文檔便宜。第十二章 臨床即時檢驗儀器即時檢測的優(yōu)勢：大型自動化儀器的補充 ；節(jié)省分析前、后標本處理步驟 ；縮短標本檢測周期 ； 快速報告檢驗結(jié)果 ；節(jié)約綜合成本第十三章 核酸擴增儀（核酸擴增儀的工作原理和主要性

23、能指標、梯度 PCR 儀和原位 PCR 儀的功能和特點、實時熒光定 量 PCR 擴增儀的種類及特點）PCR :聚合酶鏈反應(yīng)，實質(zhì)是體外核苷酸擴增技術(shù)。PCR核酸擴增儀原理：PCR技術(shù)，其由變性（93度）-退火（55度）-引物延伸（引物、DNA 聚合酶）三個基本步驟構(gòu)成，過程至 2540個循環(huán)。工作關(guān)鍵是：溫度控制。梯度 PCR 儀由普通 PCR 儀衍生出的具溫度梯度功能的核酸擴增儀。多種變性溫度和延伸溫度可在一臺擴增儀上同時完成。既節(jié)省實驗時間、提高實驗效率，又節(jié)約實驗成本。梯度 PCR 儀每個孔的溫度可以在指定范圍內(nèi)按照梯度設(shè)置，根據(jù)擴增結(jié)果，一步就可以摸索出最適 退火條件。4. 原位 PC

24、R 儀是原位雜交與 PCR 技術(shù)的結(jié)合。在細胞內(nèi)進行 PCR 擴增，而不破壞組織細胞的形態(tài)。 解決了以往手工方法操作復(fù)雜，擴增效果及實驗結(jié)果重復(fù)性不理想的問題。與普通 PCR 儀的區(qū)別：其樣品基座上有若干平行的鋁槽，每條鋁槽內(nèi)可垂直放置一張載玻片，每張 載玻片面均與鋁槽緊密接觸，溫度傳導(dǎo)極佳，控溫很精確。實時熒光定量 PCR 技術(shù)：是在 PCR 反應(yīng)體系中加入特異性的熒光染料或探針， 熒光信號的變化真 實地反映了體系中模板的增加，通過檢測熒光信號達到定量的目的。實時熒光定量 PCR 核酸擴增儀由兩部分組成 ： PCR 系統(tǒng)和熒光檢測系統(tǒng)。實時熒光定量 PCR 核酸擴增儀性能指標 ：溫度控制（準

25、確性、 均一性、升降速度）、熒光檢測（重 復(fù)性、檢測范圍）。第十四章 全自動 DNA 測序儀和蛋白質(zhì)自動測序儀雙脫氧鏈末端終止法測序原理（應(yīng)用最廣） ：與 dNTP 相比， ddNTP 在脫氧核糖的位置上缺少一個 羥基，反應(yīng)過程中雖然可以在 DNA 聚合酶作用下，通過其磷酸基團與正在延伸的 DNA 鏈的末端脫 氧核糖-OH發(fā)生反應(yīng)，形成磷酸二酯鍵而摻入到 DNA鏈中，但它們本身沒有-OH，不能同后續(xù)的dNTP 形成磷酸二酯鍵，從而使正在延伸的 DNA 鏈在此終止。熒光標記引物法和熒光標記終止底物法的異同點 （重點）：都確定了 4種熒光染料與4種ddNTP所 終止的DNA片段之間的專一對應(yīng)關(guān)系、

26、熒光標記引物法使熒光有色基團標記在長短不同的DNA片段的端，可理解為熒光染料標記過程和延伸反應(yīng)終止分別發(fā)生在同一DNA片段的兩端，且標記發(fā)生在引物與模板的退火過程中，而終止是發(fā)生在片段延伸過程中， 兩者在時間上有一定間隔、熒光標記 終止底物法使標記和終止過程合二為一， 兩者在同一時間完成、在具體操作中，前者要求A、C、G、 T四個反應(yīng)分別進行，而后者的四種反應(yīng)可以在同一管中完成新生鏈的熒光標記原理早期采用同位素法標記新生鏈，因其具有放射性危害、背景高等缺點而很快被熒光染料標記法所取代。 熒光染料的熒光和散射背景較弱，提高了信噪比；它們的激發(fā)光譜較接近而發(fā)射光譜均位于可見光范 圍，且不同染料的發(fā)

27、射光譜相互分開，易于監(jiān)測，故在 DNA自動測序中得到廣泛應(yīng)用。熒光染料標記法原理熒光染料標記法r單色熒光標記法I多色熒光標記法熒光標記引物法 熒光標記終I上底物法 熒光標記弓I物法 熒光標記終上底物法自動進樣器區(qū)的功能自動進樣器受程序控制進行三維移動， 因負極電極和毛細管均固定不動， 故許多操作如毛細管進入 樣品盤標本孔中進樣、 電極和毛細管在電極緩沖液瓶、 洗滌液和廢液管中移動等均依靠自動進樣器的 移動完成；電極為電泳的負性電極，測序過程中，正、負極之間的電勢差可達15000伏，如此高的電勢差可促進 DNA 分子在毛細管中很快泳動，達到快速分離不同長度 DNA 片段的目的；樣品盤有 48 孔

28、和 96 孔兩種，可一次性連續(xù)測試 48 或96 個樣本；電極固定螺母起固定電極及毛細管的作用。毛細管電泳型 DNA 測序儀和平板電泳型 DNA 測序儀電泳時顯示無電流的原因 毛細管電泳型：電泳緩沖液蒸發(fā)使液面降低，而未能接觸到毛細管電極彎曲而無法浸入緩沖液中毛細管未浸入緩沖液中毛細管內(nèi)有氣泡等平板電泳型電泳緩沖液配制不正確電極導(dǎo)線未接好或損壞正極或負極鉑金絲斷裂正極或負極的膠面未浸入緩沖液中第十五章 流式細胞儀（流式細胞儀的原理、結(jié)構(gòu)、性能指標）流式細胞儀： 以激光為光源，集流體力學(xué)技術(shù)、電子物理技術(shù)、光電測量技術(shù)、計算機技術(shù)以及細 胞熒光化學(xué)技術(shù)、單克隆抗體技術(shù)為一體的新型高科技儀器。流式

29、細胞術(shù)： 應(yīng)用流式細胞儀對處于快速直線流動狀態(tài)中的細胞或生物顆粒進行快速的、多參數(shù)的 定量分析和分選的技術(shù)稱為流式細胞術(shù)。流式細胞儀結(jié)構(gòu)： 流動室與液流驅(qū)動系統(tǒng)、 激光光源與光束成型系統(tǒng)、 光學(xué)系統(tǒng) （濾光片和小孔）、 信號檢測與分析系統(tǒng)、細胞分選器。流式細胞儀操作技術(shù)的質(zhì)量控制： 光路與流路校正、 PMT 光電倍增校準校準、絕對計數(shù)的校準。流式細胞儀的基本原理樣品進入流動室 將懸浮分散的單細胞懸液，經(jīng)特異熒光染料染色后，放人樣品管。在氣體壓力的作用下，懸浮在樣品 管中的單細胞懸液形成樣品流垂直進入流式細胞儀的流動室，沿流動室的軸心向下流動。鞘液的作用流動室軸心至外壁的鞘液也向下流動， 形成包

30、繞細胞懸液的鞘液流， 鞘液和樣品流在噴嘴附近組成一精品文檔個圓柱流束，自噴嘴的圓形孔噴出，與水平方向的激光束垂直相交，相交點稱為測量區(qū)。 信號的產(chǎn)生與接收染色的細胞在測量區(qū)受激光照射后發(fā)出熒光， 同時產(chǎn)生光散射。 這些信號分別被光電倍增管和光電二 極管接收，經(jīng)過計算機儲存、計算、分析這些數(shù)字化信息，就可得到細胞大小和核酸含量等指標。流動室作用： 流動室由石英玻璃制成，并在石英玻璃中央開一個孔，供細胞單個流過，檢測區(qū)在該孔的中心，流動 室內(nèi)充滿了鞘液 ,鞘液的作用是將樣品流環(huán)抱。樣品流在鞘流的環(huán)抱下形成聚焦， 保證每個細胞通過激光照射區(qū)的時間相等， 從而得到準確的細胞熒 光信息。檢測的信號： 散

31、射光信號、熒光信號細胞分選器的原理： 當某類細胞的特性與要分選的細胞相同時，流式細胞儀就會在這類細胞形成液 滴時給含有這類細胞的液滴充以特定的電荷， 帶有電荷的液滴向下落入偏轉(zhuǎn)板間的靜電場時， 依所帶 電荷的符號分別向左偏轉(zhuǎn)或向右偏轉(zhuǎn)，落入指定的收集器內(nèi)。第十六章 電泳技術(shù)和常見電泳儀（電泳基本原理、毛細血管電泳的特點、分離模式、電泳儀的維護保養(yǎng)及故障排除）電泳：指帶電荷的溶質(zhì)或粒子在電場中向著與其本身所帶電荷相反的電極移動的現(xiàn)象。利用電泳現(xiàn) 象將多組分物質(zhì)分離、分析的技術(shù)叫做電泳技術(shù)。臨床常用的電泳分析方法 主要有醋酸纖維素薄膜電泳、凝膠電泳、等電聚焦電泳、雙向電泳和毛細 管電泳等。影響電泳

32、的外界因素：電場強度、溶液PH值、溶液的離子強度、粒子的遷移率、其他因素（電滲、 緩沖液的粘度和溫度）。紙電泳： 指用濾紙作為支持載體的電泳方法。醋酸纖維素薄膜電泳： 電泳時經(jīng)過膜的預(yù)處理、加樣、電泳、染色、脫色與透明即可得到滿意的分 離效果。此電泳的特點是分離速度快、電泳時間短、樣品用量少。因此特別適合于病理情況微量異常 蛋白的檢測。雙向凝膠電泳： 第一向采用等電聚焦 第二向采用了十二烷基硫酸鈉一聚丙烯酰胺凝膠電泳。毛細管電泳的分離模式： 它是通過在充滿電解質(zhì)溶液的毛細管中，不同質(zhì)荷比大小的組分，在電場 的作用下， 依遷移速度的不同而進行分離。 根據(jù)組分的遷移時間進行定性， 根據(jù)電泳峰的峰面

33、積或峰 高進行定量分析。毛細管電泳的特點： 高靈敏度 、高速度、高分辨率、樣品少、自動化程度高 、應(yīng)用范圍廣電泳儀的保養(yǎng)及故障排除故障信議弓1起故釋可能跟因解決方法捱障信息引起故磚可能掠因輪決方誌轉(zhuǎn)揺識別錯氏繃謐灰塵嘅附在町上aax機，川胡怖養(yǎng)輕輕挾卻上面的灰塵口 RSJT機后再進擰CJ2的覇定.村品識別韜罠血清井樹不奸或有有灰塵吸陽關(guān)機狀態(tài).揖開僅鬲內(nèi)誘明有機茨璃用無水乙 帝擦拭捌桿針趙啟安it好，再用儀 wrtsrraftaiwt淸丸 洗完if 次 民 進行 阪 加材釧加畀麻應(yīng)定恆.儀幕擢普出氏眾少檢釋杯壺楝觀療翳薦杯位記 如畢段有址丁止常位頁*可手 誦將共移動到與庫來倣講*囪盲進行稱 料

34、軒感應(yīng)定標.曲線斗理患、顯忌半険定毛細養(yǎng)的隹期便用出理不沿潔毛紉管清洗理序進行清請“橋融激活稈游進斤 漱活區(qū)可電泳時出現(xiàn)峰丟史糸Ht入檢測器.曲檢測器不起11用橙去比慢并栢據(jù)需醴調(diào)整.榕杏逞度、井根據(jù)蠱裁調(diào)聲， 隹譽圧力謂節(jié)8L井苗杏章爭.聲證柱進 品磁.儀蠱遠打址理中龔期斷咆電灌用不出富或怏富內(nèi)右福踣毆采用穩(wěn)庫指雄1咨詢工祥師更換保曉第十七章熒光光譜分析儀熒光：某些物質(zhì)吸收光能量后，可發(fā)射波長與激發(fā)光波長相同或不同的光，當激發(fā)光源停止照射試 樣時，再發(fā)射過程立即停止，這種再發(fā)射的光稱為熒光( fluoresce nee )。熒光包括分子熒光和原子熒光分析法：通過測定物質(zhì)分子產(chǎn)生的熒光強度進行

35、物質(zhì)的定性與定量分析的方法。優(yōu)點：靈敏度高(可達1012g數(shù)量級);選擇性強，有利于分析復(fù)雜的多組分混合物；用樣量少、特異性好、操作簡便。缺點：對溫度、pH值等因素變化比較敏感；應(yīng)用范圍較窄。任何發(fā)射熒光的物質(zhì)都具有兩個特征光譜，即激發(fā)光譜和熒光光譜。熒光光譜儀的主要結(jié)構(gòu) :激光光源、單色器(一是激發(fā)單色器，用于選擇激發(fā)光波長；二是發(fā)射單 色器，用于選擇發(fā)射到檢測器上的熒光波長) 、樣品池(放置測試樣品，用石英做成) 、檢測器(接受 光信號并將其轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘? 、記錄顯示系統(tǒng)。熒光光譜儀的性能指標 ：靈敏度、波長范圍、波長精度、分辨率、光譜帶通、信噪比。原子吸收分光光度計原子吸收光譜法原理 ：

36、從空心陰極燈或光源中發(fā)射出一束特定波長的入射光，在原子化器中待測元 素的基態(tài)原子蒸汽對其產(chǎn)生吸收，通過測定吸收特定波長的光量大小，可求出待測元素的含量。原子吸收光譜法優(yōu)點 ：靈敏度高、精確高；選擇性好、干擾少速度快， 易于實現(xiàn)自動；可測元素多、 范圍廣；結(jié)構(gòu)簡單、成本低。原子吸收光譜儀主要部件 ：光源系統(tǒng)、原子化器、分光系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)。第十八章 色譜分析儀器色譜原理、色譜儀的分類及特點氣相色譜儀的基本構(gòu)成及其對主要系統(tǒng)的要求高效液相色譜儀的基本構(gòu)成及其對主要系統(tǒng)的要求色譜常用檢測器的基本原理及其應(yīng)用范圍精品文檔精品文檔（5）色譜應(yīng)用注意事項色譜法（ chromatography ）是一種物理分

37、離技術(shù)， 實質(zhì)上是利用混合物中各個組分在互不相溶的兩 相（固定相和流動相）之間的分配的差異而使混合物得到分離的一種方法，也有人稱之為色層法、層 析法等。色譜儀（chromatograph ）的實質(zhì)是利用色譜分離技術(shù)再加上檢測技術(shù)，對混合物進行先分離后檢測，從而實現(xiàn)對多組分的復(fù)雜混合物進行定性、定量分析。基本原理：色譜是利用待分離的樣品組分在兩相中分配的差異而實現(xiàn)分離的。色譜分離中的兩相 是指系統(tǒng)具有一個有大比表面積的固定相（ sta-tionary phase） （可以是固體或以 某種方式固定了的液體）和一個能攜帶待分離混合物流過固定相的所謂流動相（ mobile phase）（可 以是氣體或

38、液體）。色譜分離的兩要素 是互不相溶的兩相（流動相及固定相）以及樣品（混合物）各組分在兩相中分配的 差異，是決定色譜最終分離結(jié)果好壞的基礎(chǔ)。色譜儀的分類 目前比較成熟的主要有氣相色譜儀與液相色譜儀（高效液相色譜儀）兩大類。儀器的組成極為相似， 主要由流動相供給、 進樣、分離（色譜柱）、檢測、數(shù)據(jù)處理記錄、 溫度控制和其他控制系統(tǒng)等組成。色譜儀的特點根據(jù)色譜分離的基本原理可以看出： 色譜儀的主要特點是可以對混合物進行多組分分析或全分析。 儀 器結(jié)構(gòu)簡單，操作使用方便，具有應(yīng)用范圍廣、樣品用量少、高選擇性、高效能、高速度以及高靈敏 度等優(yōu)點。氣相色譜儀主要由氣路系統(tǒng)、進樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng) （色譜柱

39、）、檢測系統(tǒng)、溫度控制系統(tǒng)、數(shù)據(jù)處理、記錄系統(tǒng)及 電源、電子線路等構(gòu)成。氣相色譜儀利用載氣作為流動相，具有高分辨率、高速度、高靈敏度及選擇性好等優(yōu)點，但要求樣品 也必須為氣態(tài)。高效液相色譜儀 該系統(tǒng)主要由液源、脫氣裝置、高壓輸液泵、流量控制器及梯度洗脫裝置等構(gòu)成。 高效液相色譜儀用溶劑作為流動相， 需要的樣品是液態(tài)的， 溶劑的選擇范圍也遠遠超過了載氣， 操作 基本上可以在室溫的條件下完成，比較適合自然狀態(tài)下大多數(shù)樣品的分析。第十九章 質(zhì)譜儀（質(zhì)譜儀的工作原理、基本結(jié)構(gòu)和性能指標）1.質(zhì)譜（mass spectrum ）:以離子的質(zhì)荷比（m/z）為序排列的圖譜質(zhì)譜法（mass spectrome

40、try , MS）:將分析物氣化形成離子按質(zhì)荷比分開后進行定性、定量和結(jié)構(gòu) 分析的方法，通常簡稱為質(zhì)譜精品文檔質(zhì)譜儀 （mass spectrometer） ：實現(xiàn)質(zhì)譜方法的儀器，又稱質(zhì)譜計工作原理當試樣的蒸汽分子（或原子）在下引入電離室時，受到離子源電子束的轟擊,而產(chǎn)生各種各樣的分子裂片陽離子、離子分子復(fù)合物、陰離子和中性碎片。利用加速極與離子室之間的靜電場，將這些陽離 子進行加速和聚集成離子束并進入質(zhì)量分析室， 陰離子和中性碎片被真空系統(tǒng)抽走。 質(zhì)量分析器， 利 用電磁場對電荷的偏轉(zhuǎn)性質(zhì)， 將離子束按其質(zhì)荷比大小順序分別聚焦和分辨開， 各種離子按其質(zhì)荷比 被分成不同的離子束。不同質(zhì)荷比的每束離子依次地通過出射狹縫（又稱收集狹縫） ，進入離子檢測 器并轉(zhuǎn)變?yōu)橄鄳?yīng)的電流，經(jīng)放大由記錄器顯示質(zhì)譜圖?；窘Y(jié)構(gòu) ：真空系統(tǒng)、進樣系統(tǒng)、離子源、加速區(qū)、質(zhì)量分析器、檢測器、計算機系統(tǒng)性能指標 ：分辨率、靈敏度、質(zhì)量范圍、質(zhì)量穩(wěn)定性和質(zhì)量精度等。第二十章 生物安全柜（基本工作原理，分類， I、II、III 型生物安全柜的特點及應(yīng)用范圍）1. 生物安全柜 ：