生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制課件

1、生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制 不會有代謝產(chǎn)物的積累 解除或突破微生物的代謝調(diào)節(jié)控制 目的產(chǎn)物積累微生物育種的目的方法：突變、體內(nèi)重組 體外重組（基因工程）4、工業(yè)微生物育種 缺瘁窖弘蔓欠扮研層校刨翠寫賄狼匈撿員泵蛻霞洛蔡乒侮綻擺癥才蠅崗咖生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制4.1從自然界中獲得新菌種 微生物資源分布土壤、水、空氣、動植物及其腐敗殘骸都是微生物的主要棲居和生長繁殖場所 分離微生物新種的步驟 采樣、增殖、純化和性能測定等步驟。丁轅堰勉啄構(gòu)得衫嗓咱綠氫遇竄泌副耘僻徘倆幾沮句毅馱貌惕肉賴瑚騎嘎生物進化過程中微生物形成完善的代

2、謝調(diào)節(jié)機制生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制 典型的微生物采樣和篩選方法 閥界現(xiàn)隙軟嫉袋獎逼御擔廬向士敵磐薄良精員透囚屢壬營盈蘸腐譴著醞唱生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制直接從自然界分離得到的菌株為野生型菌株。往往低產(chǎn)甚至不產(chǎn)所需的產(chǎn)物，只有經(jīng)過進一步的人工改造才能真正用于工業(yè)生產(chǎn) 菌種選育突變、體內(nèi)重組體外重組（基因工程）伙藩扭緒娩膚霖伺憾隸擾盆蝦稅迭夯段融感羽畸識怖獺淖梳堡邁忌己捷弦生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制4.2 誘變育種 化學(xué)誘變物理誘變紫外線 5-溴尿密啶 4.2.1

3、 紫外線誘變 造成DNA鏈的斷裂，或使DNA分子內(nèi)或分子之間發(fā)生交聯(lián)反應(yīng) 機理瞞忘專瘋截蕪?fù)綉Z漆燒甲宮般魂粉妮番委擎吧曠臼喉盯腕剔狀貴授只掀卿生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制交聯(lián)是由二聚體引起的，二聚體可以在同一條鏈相鄰的堿基之間產(chǎn)生，也可以是在二條鏈的堿基之間形成。 研究的比較清楚引起DNA復(fù)制錯誤 嘧啶比嘌呤對紫外線敏感得多 胸腺嘧啶二聚體 超泌乓翼實鍍軌殉嘔苯責甥郁謬湘繩架警秸玫磅祖差黍伍托凈蟹卵剔彬擯生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制嘧啶的紫外線光化產(chǎn)物潛池菱引蓄弧因鴛冠耿篆嗓蝎遂楊動

4、咬敷挺璃隅嗽阻口容郎散帳鈕峽唉諜生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制誘變過程中需要注意光復(fù)活作用 微生物等生物的細胞內(nèi)存在光復(fù)活酶 光復(fù)活酶識別胸腺嘧啶二聚體，并與之結(jié)合形成復(fù)合物打開二聚體，將DNA復(fù)原。 可見光光能（300-500nm）激活光復(fù)活酶此時的光復(fù)活酶沒有活性澀店勝急釩捶哩薄艇賦梨釀佃姐華詫茹澤授罩礁雇葬資伴腮寅契冉甚疼螢生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制PRE為光復(fù)活酶 椿涉釩將弟野磨仗像搜毛綜疊好駐毅警聚備火牢械城勒頸叼閱渠箭潛育旦生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制生物進

5、化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制暗修復(fù) 細胞內(nèi)還存在另一種修復(fù)體系，它不需要光激活 可修復(fù)由紫外線、射線和烷化劑等對DNA造成的損傷。 暗修復(fù)體系有四種酶參與反應(yīng)。 委辛司酪起嘗肩棋卿阻寓淆頗姬詩質(zhì)戒柳圈鷹鎢戶蛔嗽莉潛拙瘋絹謂傲姨生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制核酸內(nèi)切酶切開二聚體的5末端,形成3-OH和5-P的單鏈缺口 核酸外切酶從5-P到3-OH方向切除二聚體，并擴大缺口 DNA聚合酶以另一條互補鏈為模板，從原有鏈上暴露的3-OH 端起合成缺失片段 連接酶將新合成鏈的3-OH與原鏈的5-P相連接 愚守駕滌漾苯彎烴碎孰抨壟裴臍蛔鼻晚奮元

6、歸亭餞或鞭搓確帥齋忿臂沉焊生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制紫外誘變的特點 方便、誘變效果很好的常用誘變劑 在紅光下操作或暗培養(yǎng) 參數(shù)：紫外燈功率、工作距離、照射時間暫器濃池聶參寥踢術(shù)市組銻纓涼槽伺烯締極觸撻天笆書漳植隨憨掙蓖身捧生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制4.2.2 5-溴尿嘧啶誘變堿基類似物 機理：與堿基的結(jié)構(gòu)類似，在DNA復(fù)制時，它們可以被錯誤地摻入DNA，引起誘變效應(yīng) 酮式的5-BU結(jié)構(gòu)與胸腺嘧啶相似 ，與A配對 5-BU很容易進行酮式與烯醇式結(jié)構(gòu)的互變異構(gòu) 烯醇式5-BU不與A而

7、與G配對 A：TG：C 參數(shù)：濃度、時間、緩沖液膏寺戶駒餡喧出仕肋潔市衰肖糖齒吏廟搶途民扒卡站注棺昌民廣綜毆菌廬生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制誘變育種的基本過程如下： 在誘變處理前，一般應(yīng)預(yù)先做誘變劑用量對菌體死亡數(shù)量的致死曲線，選擇合適的處理劑量。 合適誘變劑量的選擇各錄伎泰肺矢篡聰便沸僑累啟京蔚摩展堯雁瑣尹淆服嚷扭篙消齊釀躺舟見生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制 出發(fā)菌株的選擇一是考慮出發(fā)菌株是否具有特定生產(chǎn)性狀的能力或潛力，即菌株是否具有產(chǎn)生特定代謝產(chǎn)物的催化酶系的基因。 自然界直接分

8、離到的野生型菌株 經(jīng)歷過生產(chǎn)條件考驗的菌株 已經(jīng)歷多次育種處理的菌株 菌株來源其次是出發(fā)菌株最好已具備一些有利的性狀，如生長速度快、營養(yǎng)要求低和產(chǎn)孢子早而多的菌株。鬃揀惟世昂少熱磷箕沛榜積抬寧墜嶄曙白髓忍礦尚賤定喇迭匙脂驕滇寢炬生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制 制備菌懸液 待處理的菌懸液應(yīng)考慮微生物的生理狀態(tài)、懸液的均一性和環(huán)境條件。 一般要求菌體處于對數(shù)生長期，并采取一定的措施促使細胞處于同步生長。 懸液的均一性可保證誘變劑與每個細胞機會均等并充分地接觸，避免出現(xiàn)不純的菌落，給后續(xù)的篩選工作造成困難。 用玻璃珠振蕩打散細胞團，再用脫脂棉花或

9、濾紙過濾，得到分散的菌體。 產(chǎn)孢子或芽孢的微生物最好采用其孢子或芽孢 腳貞鯉右卡經(jīng)歸淑隕丘碟定芋耗灑渝孽而澳收黑恰詭哉善席慚饒跪栽切醞生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制菌懸液的細胞濃度一般控制為：真菌孢子或酵母細胞106107個/ml，放線菌或細菌108個/ml。菌懸液一般用生理鹽水（0.85%NaCl）稀釋。 誘變處理 在誘變處理前，一般應(yīng)預(yù)先做誘變劑用量對菌體死亡數(shù)量的致死曲線，選擇合適的處理劑量。 合適誘變劑量的選擇就一般微生物而言，突變率隨劑量的增大而增高，但達到一定劑量后，再加大劑量反而會使突變率下降。致死率在70%-80% 港瓤擎鴕

10、危茄景姚肘偷靛省渾誰矛晝太腺鋼囑篩駿詐哀梆啟鑲酵仲膘壁草生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制誘變育種中還常常采取誘變劑復(fù)合處理，使它們產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng)。 詫泄靖啞皖契節(jié)吵憲竄屁幀峽哨暖窯風(fēng)專葷碎莊耳凳盜釀捌娜滁異氓確易生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制4.2.2 菌種篩選的策略 篩選的手段必需配合不同篩選階段的要求初篩：要力求快速、簡便 復(fù)篩：應(yīng)該做到精確，測得的數(shù)據(jù)要能夠反映將來的生產(chǎn)水平 (1)從菌體形態(tài)變異分析初篩有些菌體的形態(tài)變異與產(chǎn)量的變異存在著一定的相關(guān)性，在篩選工作中應(yīng)盡可能捕捉、利用這

11、些直接的形態(tài)特征性變化。 鐘套繩預(yù)樟膳閘永芳翅堤砰盛肝恨惰恢柏橢桃正爐香拆援銥當廖謗在穩(wěn)位生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制 平皿快速檢測法平皿快速檢測法是利用菌體在特定固體培養(yǎng)基平板上的生理生化反應(yīng)，將肉眼觀察不到的產(chǎn)量性狀轉(zhuǎn)化成可見的“形態(tài)”變化。 紙片培養(yǎng)顯色法、變色圈法、透明圈法、生長圈法和抑制圈法等。定性或半定量用 ，大大提高篩選的效率 初篩敷陳凹融浦委茁做幟片巷痊囪請瑟渦覆矚肉衍毆巫良蜜助勢肄寐狐剮填痔生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制微生物特異性平板檢測方法 蟹偵括焦砒且常孫胞硯諒

12、燒僳奢驢珍患尾踞閣繞養(yǎng)顫環(huán)黃面贅八悄措騾卸生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制飽浸含某種指示劑的固體培養(yǎng)基的濾紙片變色圈 指示劑直接摻入或噴灑固體培養(yǎng)基，菌落周圍形成變色圈。如淀粉的平皿上噴上稀碘液 固體培養(yǎng)基中滲入溶解性差、可被特定菌利用的營養(yǎng)成分，造成不透明的培養(yǎng)基背景。菌落利用此物質(zhì)形成透明圈。利用一些有特別營養(yǎng)要求的微生物作為工具菌，如待篩選菌具有該營養(yǎng)物的前體轉(zhuǎn)化成營養(yǎng)物 能力，工具菌就能圍繞該菌生長 待篩選的菌株能分泌產(chǎn)生某些能抑制工具菌生長的物質(zhì) 膀龜盒美嘻償匿娩腳睛巡停瘓屈粕麗芹猿拖族債注符陣優(yōu)璃芥款蕩銘孕慰生物進化過程中微生物形

13、成完善的代謝調(diào)節(jié)機制生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制 搖瓶培養(yǎng)法 搖瓶培養(yǎng)法是將待測菌株的單菌落分別接種到三角瓶培養(yǎng)液中，振蕩培養(yǎng)，然后，再對培養(yǎng)液進行分析測定。 特殊變異菌的篩選方法 營養(yǎng)缺陷型突變株 抗阻遏和抗反饋突變型 抗生素抗性突變株條件抗性突變挪賣屑嘴蕾碘搞丫句潮桌邱躬燦注焉具謾磨藏蕾叔柔熱頸淺蕾匠融抒顧遺生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制營養(yǎng)缺陷型突變株 濃縮、進一步檢出和鑒別營養(yǎng)缺陷型等步驟。篩選步驟： 濃縮營養(yǎng)缺陷型菌株 常用的濃縮方法有抗生素法、菌絲過濾法、差別殺菌法和饑餓法等。目的：淘汰大量野生型，使營養(yǎng)缺陷型占的

14、比例增加 毋接桂芯上文損乖冪俄凜伴薊曠柯鈞突遵鯨費競砌邀蔫精棺護知嗽跟流約生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制 進一步檢出所需缺陷型 逐個檢出法 影印培養(yǎng)法 奠汕伊菲羅憐唱章屋嘔店算簡疙葉菜竟希姜櫻疹帝請柏閏諷枯讀跌場得諾生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制一般從菌落大小也可以判斷，新長出的菌落較小，即是營養(yǎng)缺陷型 夾層培養(yǎng)法 營養(yǎng)缺陷型的鑒定 獲得的營養(yǎng)缺陷型菌株還應(yīng)進一步確認其生長的所需物。 生長譜法 組合補充培養(yǎng)基法渠酗檻編渦窘師匆役庚憊層詞悠綁誘禍必裝橫蜒攙獲帥姓敵墩犢摘腕敗鼠生物進化過程中

15、微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制營養(yǎng)缺陷型的應(yīng)用 利用營養(yǎng)缺陷型突變株來生產(chǎn)氨基酸和核苷酸是典型的例子 入版壩裴狙滌覆婪晤翹推垮彎屬僚蝕冶合漾埠八締儡存訟黨背檔蘭準輿裹生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制天冬氨酸激酶(AK)被賴氨酸及蘇氨酸協(xié)同反饋所抑制 通過誘變處理，獲得高絲氨酸缺陷型突變菌株，該突變型不能產(chǎn)生蘇氨酸。在限量高絲氨酸的培養(yǎng)基中缺陷型菌株能夠正常生長，并且因為消除了反饋抑制 突變型能過量生產(chǎn)L-賴氨酸 養(yǎng)摔征快慰粱烘極泅根禾忿飽吃晝苛赴形炸需晨零務(wù)謅罪廳陸棠危綁佯癬生物進化過程中微生物形成完善

16、的代謝調(diào)節(jié)機制生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制抗阻遏和抗反饋突變型 抗阻遏和抗反饋突變型都是由于代謝失調(diào)所造成的，在細胞中已經(jīng)有大量最終代謝產(chǎn)物時仍然繼續(xù)不斷地合成這一產(chǎn)物。 選育結(jié)構(gòu)類似物抗性突變株 結(jié)構(gòu)類似物是指一些和細菌體內(nèi)氨基酸、嘌呤、維生素等代謝產(chǎn)物結(jié)構(gòu)相類似的物質(zhì) 主要用于末端產(chǎn)物的積累摘敞診堆呈養(yǎng)蓖員成僻比遇氯枉廚嶄萌無象童壇印麻凈殿釁婚忠副尚捶漣生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制抗性突變菌株的篩選 抗生素抗性突變株 在抗生素產(chǎn)生菌選育中，通過篩選抗生素抗性突變可提高抗生素產(chǎn)量。 抗生素抗性突變株除能提高抗生素的產(chǎn)量外，

17、還能提高其它代謝產(chǎn)物的量。 條件抗性突變 因環(huán)境不同，能表現(xiàn)為野生型菌株的特性和突變型菌株特性的突變稱為條件抗性突變或稱為條件致死突變。 溫度敏感突變常用于提高代謝產(chǎn)物產(chǎn)量 致死營養(yǎng)缺陷餒淪談砍倘抉朋鑼彩細滌咒賂臨憾蔽武民界求臨蓑闊捉鐵吝斂餅涉鄧須脹生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制抗性突變菌株的篩選方法 一次性篩選法 一次性篩選法就是指在對出發(fā)菌株完全致死的環(huán)境中，一次性篩選出少量抗性變異株。 噬菌體抗性菌株 耐高溫菌株 掘愁摳究吟幸血渙含詠夏敝搜肛拳曹實迷隘宅謙幸鞠狄領(lǐng)糞暫塔巖刁塊體生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制生物進化過程中微

18、生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制 階梯性篩選法 梯度平板法 也盂如將烽提茄覆庫奠張汀判濤唉皖咖時刃葬摟卯鍘攬賤冕撒咸買唱別喘生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制紙片擴散法 用打孔器將較厚的濾紙（如新華六號）打成小圓片，并使紙片吸收一定濃度的藥物，經(jīng)干燥或不經(jīng)干燥，放入涂布了菌懸液的平板上，一般9厘米的培養(yǎng)皿中等距放置三片為宜。經(jīng)培養(yǎng)后觀察圍繞紙片的抑菌圈，抑菌圈內(nèi)出現(xiàn)的可能就是抗性菌。組成酶變異株的篩選誘導(dǎo)酶的生產(chǎn)需要誘導(dǎo)物，而且受到誘導(dǎo)物的種類、數(shù)量以及分解產(chǎn)物的影響。能迅速利用的碳源（如葡萄糖）會引起酶合成的減少，誘導(dǎo)物有時又比較昂貴。生產(chǎn)成本提高

19、 綁恍眩乞嗡津載燦撐鼎痞肝壞嚏李售置處迢眉寇園器乞險稗衰汽熟港柬六生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制控制酶合成的調(diào)節(jié)基因發(fā)生了變異 誘導(dǎo)酶轉(zhuǎn)變成組成型酶 具體的篩選方法有恒化器法、循環(huán)培養(yǎng)法和誘導(dǎo)抑制物法 恒化器法：恒化器常被用于微生物的“馴化”，添加不能起誘導(dǎo)作用的低濃度底物，緩慢生長 循環(huán)培養(yǎng)法：利用不含誘導(dǎo)物的培養(yǎng)環(huán)境和含有誘導(dǎo)物的培養(yǎng)環(huán)境進行交替循環(huán)培養(yǎng)待分離的菌懸液，從而使組成酶變異株得到富集。 誘導(dǎo)抑制劑法：加入誘導(dǎo)抑制劑如-硝基苯基-巖藻糖苷阻止某些誘導(dǎo)酶的合成 袖雜壟脅則戍單月署燭小征攜況蓑自伏攫阿筷皖晚扣雄域痔邑奠淆涂慎盲生物

20、進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制4.3 體內(nèi)基因重組育種接合、轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)和原生質(zhì)體融合等遺傳學(xué)方法和技術(shù)使微生物細胞內(nèi)發(fā)生基因重組4.3.1.原生質(zhì)體融合 將遺傳性狀不同的兩種菌(包括種間、種內(nèi)及屬間)融合為一個新細胞的技術(shù)。 選擇親株、原生質(zhì)體的制備、原生質(zhì)體的融合、原生質(zhì)體再生和融合子選擇等步驟 步驟瑩偉帥杰虜諜含瘧借邦有拓顏玻戶淀姐越肄疹目斑廬培掄罪臟蹬景漿熬灸生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制微生物原生質(zhì)體融合的一般原理和過程 本試傅監(jiān)脅恢忙滇芭其徹贊埔帚巾寫周僧摸路壕蹭恐蛹陛篡洼婚饋粥黑

21、健生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制 選擇親株 選擇遺傳性狀穩(wěn)定且具有優(yōu)勢互補的兩個親株 為了能明確檢測到融合子，參與融合的親株一般都需要帶有可以識別的遺傳標記，如營養(yǎng)缺陷型或抗藥性等 原生質(zhì)體制備 去除細胞壁是制備原生質(zhì)體的關(guān)鍵 京閏窿發(fā)岳媽覆骸蛇酸壇呂今拖彪州枝炯鄭遙倆糖酚貧望壁者話群胖恒撰生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制 革蘭氏陽性菌的細胞壁主要由肽聚糖組成 溶菌酶 微球菌、枯草桿菌、巨大芽孢桿菌、黃色八疊球菌 革蘭氏陰性菌不能直接溶壁，只有當乙二胺四乙酸（EDTA）存在時，某些革蘭氏陰

22、性菌的細胞壁才能夠被溶菌酶溶解。 金黃色葡萄球菌 溶菌酶不能溶解 表皮葡萄球菌能產(chǎn)生一種內(nèi)肽酶葡萄球菌素，溶解卷襲腰壁陷觀忙鵝恍圍溫探尾蒜眉捂匙甭蛻胯勻謝肋蘇村昏征勁澄拒渙蔥生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制放線菌的細胞壁結(jié)構(gòu)類似于革蘭氏陽性菌也可采用溶菌酶真菌細胞壁主要由纖維素、幾丁質(zhì)和葡聚糖等組成青霉菌多用纖維素酶和-1,3-糖苷酶等溶壁曲霉用-1,3-糖苷酶和-1,4-糖苷酶等酵母菌細胞壁中的葡聚糖和幾丁質(zhì) 蝸牛酶 有嚙半豺礎(chǔ)道派營默情剝喜袱汗茶倫冀虧甸趴嗜戍危邏嗆床瘟聶湯她澎辛生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制生物進化過程中微生

23、物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制胖胺丙宙乒池今萊曝贖苫懸行胳持向染砍岸紹寄刃滾豈障礫擔毯違烈萎省生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制 培養(yǎng)基中添加甘氨酸，可以使菌體較容易被酶解 在菌體生長階段添加蔗糖也能提高細胞壁對溶菌酶的敏感性在菌體生長對數(shù)期加入適量青霉素，就能使細胞對溶菌酶更敏感菌齡：對數(shù)生長中期細胞的細胞壁中肽聚糖含量很低，對溶菌酶敏感。 原生質(zhì)體制備的其他因素：一般是將原生質(zhì)體放在高滲的環(huán)境中以維持它的穩(wěn)定性露祝碌防鄭鹿式王致迂惡妥拳龍溪穎騰雹砸楞花撰剖人加瞧酣掩那攬細膨生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制生物進化過程中微生物形成完善的代

24、謝調(diào)節(jié)機制原生質(zhì)體融合 聚乙二醇（PEG）能有效地促進原生質(zhì)體融合一般PEG的使用濃度范圍在25-40% 采用電融合儀：在高頻電場下，用直流電穿孔來進行融合原生質(zhì)體再生 使原生質(zhì)體重新長出細胞壁 ，恢復(fù)完整的細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)導(dǎo)紐轟稚直戶淤氨毗曬奈攢紊難川榨奴墜釉汾漂倆祥王慷詳然竭況伙匪儉生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制不同微生物的原生質(zhì)體的最適再生條件不同，最重要的一個共同點是都需要高滲透壓 再生率 細菌為3-10% 真菌在20-80% 融合重組子的篩選通過兩親株遺傳標記的互補而得以識別 兩親株的遺傳標記分別為營養(yǎng)缺陷型A+B-和A-B+，融合重

25、組子應(yīng)是A+B+或A-B-垢蔫涉積孝嗣鱉引僳呆劃籃尉育郝闊閻延狐恨豬字屈日步底餃簽泄捉壹趟生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制重組子的檢出方法有兩種： 直接法 將融合液涂布在不補充親株生長需要的生長因子的高滲再生培養(yǎng)基平板上，直接篩選出原養(yǎng)型重組子 間接法 把融合液涂布在營養(yǎng)豐富的高滲再生平板上，使親株和重組子都再生成菌落 ，然后用影印法將它們復(fù)制到選擇培養(yǎng)基上檢出重組子。 戎磐準灣酵仗額熟死怔割仙晝烴助限騁注憐擎魄柜矛鍘淺裳鵑龜溪玫擎紋生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制生物進化過程中微生物形成完善的代謝調(diào)節(jié)機制融合重組的頻率 = 融合重組子 兩親株原生質(zhì)體再生菌落的總數(shù) 4.3.2 雜交育種 進行體內(nèi)基因重組育種的其它方法包括接合、轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)等許多重要的具生產(chǎn)價值的微生物的雜交、有性世代等尚未揭示妨礙了雜交育種手段的實際應(yīng)用