如何撰寫自然科學(xué)基金申請報告的文檔

1、淺談國家自然科學(xué)基金申報體會邱麗娟中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物科學(xué)研究所背景簡介申請資助 面上工程：13項3項 重大工程： 1項基金評審 一審： 二審：5次 大豆種質(zhì)資源研究國家種質(zhì)庫繁種入庫考察收集引種交換種質(zhì)更新基礎(chǔ)性工作優(yōu)異基因優(yōu)異種質(zhì)應(yīng)用遺傳多樣性分析重要性狀的鑒定評價種質(zhì)創(chuàng)新基因發(fā)掘應(yīng)用 基礎(chǔ) 研究保種973863支撐轉(zhuǎn)基因選 題根底研究 選準(zhǔn)科學(xué)問題，結(jié)合科學(xué)開展前沿應(yīng)用研究 選擇國民經(jīng)濟和社會開展中迫切需要解決關(guān)鍵科技問題 題目要具體明確，防止過寬，過大 資源篩選到種質(zhì)創(chuàng)新和育種 結(jié)合問題用最實用的方法，不是方法越新越好 如差異顯示，蛋白組學(xué)，miRNA等 題目要具有科學(xué)性，不能只具有操作

2、性 如轉(zhuǎn)基因研究，可針對方法進行研究 根底性探索性科學(xué)性選 題一個水稻新卷葉基因 rl11 的圖位克隆及功能研究蕓薹屬異源六倍體新物種的合成及其亞基因組雜種優(yōu)勢利用研究中國半冬性與歐洲冬性甘藍(lán)型油菜雜種優(yōu)勢位點的遺傳分析覆蓋陸地棉全基因組整合遺傳圖譜構(gòu)建與產(chǎn)量、纖維品質(zhì)性狀基因定位一種解決轉(zhuǎn)基因植物生物平安隱患的基因自動刪除系統(tǒng)的改進研究蕓苔屬自交不親和性酵母雙雜交測定法的建立鈣對酸性土壤中苜蓿根瘤菌體系群體感應(yīng)及固氮性能的影響書虱 P450 基因介導(dǎo)代謝抗性的分子機理研究影響球孢白僵菌穿透昆蟲體壁的 BbMPK1 MAPK 下游基因研究低活性多酚氧化酶魔芋品種資源的篩選人工合成枇杷同源與異源

3、三倍體生長性狀雜種優(yōu)勢的 DNA 甲基化研究LGT 基因在柑桔種質(zhì)資源中的多態(tài)性分析與功能標(biāo)記開發(fā)變?nèi)~海棠遺傳分化及其近緣種形成的分子根底研究甘藍(lán)花粉管鈣感應(yīng)蛋白編碼基因的克隆與序列分析申請書的組成局部申請書一、根本信息二、工程主要成員三、經(jīng)費申請表四、報告正文五、簽字和蓋章填寫標(biāo)準(zhǔn)性的重要性特別要注意如下幾種標(biāo)準(zhǔn)性要求： 填寫申請書時，一定要認(rèn)真、準(zhǔn)確選擇或填寫“申請代碼、“資助類別、“亞類說明“附注說明等項內(nèi)容。2. 有合作單位，要填寫合作單位信息，蓋章頁上一定要加蓋合作單位公章注冊公章、法人公章。3. 在職博士生，要附導(dǎo)師簽字同意證明材料，且只能通過在職單位申請。 申請者和工程組成員一定

4、要在申請書上簽字。 承擔(dān)過青年科學(xué)基金工程的申請者包括執(zhí)行期為一年的小額探索工程，請不要再次申請青年科學(xué)基金。申請書中如有上述問題之一，都不能通過初審一工程根本信息選擇學(xué)科代碼重要性:1 評審分組 網(wǎng)評小同行 20項，評的仔細(xì) 二審大同行 以網(wǎng)評為依據(jù)2 工程的競爭性 面上青年小額摘要具體明確研究意義研究根底研究內(nèi)容與目標(biāo)二工程主要成員考核研究力量，團隊三經(jīng)費申請表拉開檔次：2845萬以適當(dāng)為好重點支持的只占極少數(shù)認(rèn)真填寫，依據(jù)要充分四報告正文面上 要求內(nèi)容翔實、清晰，層次清楚，標(biāo)題突出一立項依據(jù)與研究內(nèi)容4000-8000字： 1.工程的立項依據(jù)研究意義、國內(nèi)外現(xiàn)狀分析，附主要參考文獻 根底

5、研究需結(jié)合科學(xué)研究開展趨勢來論述科學(xué)意義 應(yīng)用研究需結(jié)合國民經(jīng)濟和社會開展中迫切需要解決的關(guān)鍵科技問題來論述其應(yīng)用前景 需要注意的問題每段最好有標(biāo)題，段落要清晰，主題要突出，以事實文獻為依據(jù)后面的研究內(nèi)容，前面必須有該領(lǐng)域的進展，前后照應(yīng)表達出本研究的重要性和地位，讓外行也能明白附主要參考文獻： 標(biāo)準(zhǔn)，前后一致 文獻期刊要具有影響 新、全 礦物質(zhì)對作物生長的題目申請者的研究前期工作進展及進一步的研究方向 我們的前期研究也發(fā)現(xiàn)，兩個NAC 同源基因可能參與了大豆種子發(fā)育的進程Meng et al, in press。本工程組應(yīng)用生物信息學(xué)結(jié)合分子克隆技術(shù)從大豆中別離了6 個NAC 同源基因(Gm

6、NAC1 -GmNAC6)。組織表達分析說明，GmNAC1 主要表達于根和花芽， GmNAC2 主要表達于葉片、莖和發(fā)育中的種子，GmNAC3 在花芽中強烈表達，在種子中表達較弱。GmNAC4 和GmNAC6 那么表現(xiàn)為組成型表達。GmNAC5 主要表達于發(fā)育中的大豆種子，在花芽和莢皮中也有微弱的表達。進一步分析發(fā)現(xiàn)：GmNAC2和GmNAC5 都在大豆種子代謝旺盛時期即30-35DAF 的表達量最高，說明這兩個基因的表達可能與種子發(fā)育狀態(tài) 密切有關(guān)，但它們是如何參與調(diào)節(jié)大豆種子發(fā)育進程的？有哪些基因參與調(diào)節(jié)？目前還不清楚，需要進一步深入研究。這局部與后面的工作根底不要重復(fù)2.研究內(nèi)容、研究目

7、標(biāo),以及擬解決關(guān)鍵問題此局部為重點闡述內(nèi)容 在現(xiàn)已克隆的GmNAC2 和GmNAC5 基因的根底上，進一步開展：1GmNAC2 和GmNAC5 基因的轉(zhuǎn)錄因子特征研究 開展亞細(xì)胞定位研究明確GmNAC2 和GmNAC5 基因表達產(chǎn)物是否認(rèn)位于細(xì)胞核，再通過酵母系統(tǒng)分析，明確GmNAC2 和GmNAC5 蛋白是否具有轉(zhuǎn)錄激活功能。2.研究內(nèi)容、研究目標(biāo),以及擬解決關(guān)鍵問題此局部為重點闡述內(nèi)容 在現(xiàn)已克隆的GmNAC2 和GmNAC5 基因的根底上，進一步開展：2 GmNAC2 和GmNAC5 基因的時空表達特征研究 以不同發(fā)育階段(開花后5 天,15 天,25 天,35 天,45 天) 的種子為

8、材料，應(yīng)用GmNAC2和GmNAC5 基因開展實時定量PCR(Real-time PCR)研究和進行原位雜交分析,明確這兩個基因的時空表達特征。2.研究內(nèi)容、研究目標(biāo),以及擬解決關(guān)鍵問題此局部為重點闡述內(nèi)容 在現(xiàn)已克隆的GmNAC2 和GmNAC5 基因的根底上，進一步開展：3) GmNAC2 和GmNAC5 基因在種子發(fā)育中的生物學(xué)功能研究 從兩個方面進行研究。一是通過基因過量表達技術(shù),獲得具有GmNAC2 過量表達、GmNAC5 過量表達以及雙基因過量表達的轉(zhuǎn)基因植株, 對轉(zhuǎn)基因植株種子發(fā)育過程開展形態(tài)學(xué)和細(xì)胞學(xué)鑒定；二是通過RNAi 技術(shù), 獲得具有GmNAC2 表達抑制、GmNAC5

9、表達抑制以及雙基因表達抑制的轉(zhuǎn)基因植株，對轉(zhuǎn)基因植株種子發(fā)育過程開展形態(tài)學(xué)和細(xì)胞學(xué)鑒定。明確這兩個基因的生物學(xué)功能；2.研究內(nèi)容、研究目標(biāo),以及擬解決關(guān)鍵問題此局部為重點闡述內(nèi)容 在現(xiàn)已克隆的GmNAC2 和GmNAC5 基因的根底上，進一步開展：4) GmNAC2 和GmNAC5 基因與其他基因的關(guān)系研究 一是在基因表達水平上，應(yīng)用基因芯片技術(shù)比較轉(zhuǎn)基因植株和非轉(zhuǎn)化植株種子發(fā)育過程特定時期(開花后5 天,15 天,25 天,35 天,45 天)的基因表達差異,鑒定差異表達的基因； 二是在蛋白質(zhì)水平上，應(yīng)用蛋白質(zhì)組技術(shù)比較轉(zhuǎn)基因植株和非轉(zhuǎn)化植株種子發(fā)育過程特定時期(開花后5 天,15 天,25

10、 天,35 天,45 天)的蛋白表達差異,鑒定差異表達的蛋白。進一步分析差異表達基因與差異表達蛋白的關(guān)系。2.研究內(nèi)容、研究目標(biāo),以及擬解決關(guān)鍵問題此局部為重點闡述內(nèi)容 研究目標(biāo)： 1明確GmNAC2 和GmNAC5 在大豆種子發(fā)育中的生物學(xué)功能； 2初步說明GmNAC2 和GmNAC5 在大豆種子發(fā)育過程中的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，并探討GmNAC2和GmNAC5 的潛在育種利用價值。擬解決的關(guān)鍵問題： 1目前對于NAC 基因家族的研究報道多集中在模式植物的胚胎發(fā)育以及耐逆方面作用。對于大豆而言，由于其種子含有高蛋白和高油份其種子組成與擬南芥明顯不同，NAC 基因在大豆種子發(fā)育過程中具體作用還不清楚，因此

11、，本工程擬解決的關(guān)鍵問題之一是說明NAC 基因在大豆種子發(fā)育過程中的生物學(xué)功能。 2我們的前期研究說明，GmNAC2 和GmNAC5 在種子中表達量較高，而在其他組織中表達量相對較少，且在種子不同發(fā)育時期的表達量也不同。但對這兩個基因之間及它們與其他基因間的關(guān)系還一無所知。因此，本工程擬解決的關(guān)鍵問題之二是在轉(zhuǎn)基因研究的根底上，結(jié)合基因芯片和蛋白質(zhì)組技術(shù)，探明GmNAC2 和GmNAC5 以及它們與其他基因間的關(guān)系。目前現(xiàn)狀原因/解決問題一研究內(nèi)容： 本工程主要開展TW lpa1-2 和 ZC lpa2-1 兩個低植酸突變基因的定位和育種價值的研究。包括 1、 微衛(wèi)星標(biāo)記初步定位突變基因。 2

12、、 突變基因目標(biāo)區(qū)段多態(tài)性標(biāo)記的挖掘，并用于該區(qū)段別離單株的HAPLOTYPE 分析，從而完成突變基因的精細(xì)定位。 3、 通過突變種質(zhì)和常規(guī)品種雜交后代群體中，低植酸和野生型株系的產(chǎn)量、種子田間出苗率和品質(zhì)性狀低聚糖、脂肪酸含量和組分的比較分析，研究兩個獨立的低植酸突變是否對上述性狀具有負(fù)面影響；確定兩個突變基因在大豆?fàn)I養(yǎng)品質(zhì)改進中的價值。 4、 利用分子標(biāo)記輔助選擇，獲得攜帶兩個突變基因的純合株系，通過分析其植酸含量、農(nóng)藝和品質(zhì)性狀表現(xiàn)，確定兩個突變基因組合使用時的效果。二研究目標(biāo) 本課題以誘變產(chǎn)生的低植酸種質(zhì)為材料，采用生物技術(shù)、生物信息學(xué)、現(xiàn)代儀器分析技術(shù)和傳統(tǒng)的育種手段相結(jié)合的方法，對

13、其進行了系列研究，預(yù)期目標(biāo)如下： 1、 精細(xì)定位兩個突變基因，獲得與其連鎖的分子標(biāo)記，遺傳距離1.0 cM，為標(biāo)記輔助選擇、圖位克隆或通過比較基因組分析確定候選基因打下根底。 2、 明確兩個低植酸突變單獨使用和組合使用的育種價值。三擬解決的關(guān)鍵問題 通過本工程的實施，獲得可以用于提高大豆?fàn)I養(yǎng)品質(zhì)、對農(nóng)藝和其它品質(zhì)性狀又沒有負(fù)面效應(yīng)的低植酸突變基因，找到與其緊密連鎖的分子標(biāo)記。3. 擬采取的研究方案及可行性分析。包括有關(guān)方法、技術(shù)路線、實驗手段、關(guān)鍵技術(shù)等說明例一研究方案： 1 蛋白質(zhì)亞細(xì)胞定位：GmNAC2 與GFP 基因融合后的Gateway 載體pMDC44 系列(Curtis& Gros

14、sniklaus,2003,Plant Physi, 133:462-469), 用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法進行洋蔥表皮細(xì)胞的瞬時表達，結(jié)合激光共聚焦顯微鏡分析，研究GmNAC2 編碼產(chǎn)物的亞細(xì)胞定位。 2蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄活性分析 3基因表達分析原位雜交 4轉(zhuǎn)基因大豆的獲得與分析 5基因芯片分析 6GmNAC2 和GmNAC5 下游基因的鑒定 7蛋白質(zhì)組分析可行性分析：目前有關(guān)NAC 基因在大豆種子發(fā)育過程中功能尚不清楚，但申請者已克隆了兩個可能與種子發(fā)育相關(guān)的NAC 基因，為進一步研究準(zhǔn)備了根底材料和信息。轉(zhuǎn)基因大豆的培育是本工程實施的重要環(huán)節(jié)，本實驗室經(jīng)過10 多年的摸索，已經(jīng)建立了較穩(wěn)定大豆遺傳轉(zhuǎn)化體

15、系，經(jīng)Southern 雜交驗證，可以獲得1%左右的轉(zhuǎn)化效率Yi & Yu, 2006。此外, 我們也在大豆上建立了基因過量表達和RNAi技術(shù)轉(zhuǎn)基因體系易新萍，南農(nóng)博士論文, 2006；通過基因芯片技術(shù)大規(guī)模研究差異表達基因，由于商品化大豆基因芯片產(chǎn)品Affymetrix的問世和推廣而更加容易, 應(yīng)用基因芯片，本實驗室也開展了大豆不同器官間的差異表達基因的研究(黃方等, 未發(fā)表資料)；本實驗室已經(jīng)通過蛋白質(zhì)組技術(shù)研究了大豆種子發(fā)育過程中差異表達蛋白質(zhì)的變化規(guī)律鄭蕊，2005，還研究了種子萌發(fā)過程中蛋白質(zhì)組成的變化徐曉燕等，2006。 上述分析說明，本工程具有較好的根底和技術(shù)貯備，研究內(nèi)容和方案

16、是切實可行的。研究方案及可行性分析一突變基因的精細(xì)定位 1基于微衛(wèi)星標(biāo)記的初步定位。對ZC lpa2-1 基因，我們利用突變種質(zhì)與親緣較遠(yuǎn)的非低植酸常規(guī)品種的雜交后代群體，將其定位在B2 連鎖群與Satt416 相距4.6cM 的位置上。進一步將通過擴大別離群體單株數(shù)目，利用新的在Satt416 區(qū)段有更多多態(tài)性標(biāo)記的定位群體，提高定位精度，獲得更加緊密的微衛(wèi)星標(biāo)記。對TW lpa1-2 基因，將采用與ZC lpa2-1 基因定位相似的方法完成初步定位。 2新的分子標(biāo)記的開發(fā)與基因精細(xì)定位。開發(fā)新的SNP和CAPS 標(biāo)記,利用別離群體分析單株的基因型，從而找到連鎖更加緊密的分子標(biāo)記。 3定位群

17、體與種子表現(xiàn)型鑒定。本研究將利用以下雜交組合的別離群體進行基因定位。TWlpa1-2浙春3 號已有組合、 TW lpa1-2中豆27已有組合、TW lpa1-2浙鮮豆2 號方案使用。種子的低植酸性狀，采用高無機磷HIP篩選技術(shù)進行間接確定袁鳳杰等，2005。二低植酸突變對農(nóng)藝、品質(zhì)性狀的影響。 利用用于定位的TW lpa1-2 和ZC lpa2-1 遺傳群體，每個組合培育HIP 純合型和野生純合型F5 家系各60 個，隨機取15 個家系混為一組，這樣每個組合各有三組HIP 純合型和野生純合型材料，每個突變基因各有六組HIP 純合型和野生純合型材料。將這六組材料按隨機區(qū)組設(shè)計分別在杭州春、秋兩季

18、，海南冬春季節(jié)種植。按標(biāo)準(zhǔn)方法考察如下，特性，通過統(tǒng)計分析，確定兩個突變基因?qū)@些性狀在不同環(huán)境條件下的影響。 考察的農(nóng)藝性狀包括小區(qū)產(chǎn)量和產(chǎn)量組成因素，如單株莢數(shù)、單株粒數(shù)、單株重和百粒重等。種子收獲后按標(biāo)準(zhǔn)方法對蛋白含量、油份含量和脂肪酸組成、異黃酮和低聚糖含量進行分析。三突變基因的聚合和分析 從提高種子中營養(yǎng)元素的有效性和保護環(huán)境環(huán)境的角度，植酸含量下降越多效果越明顯；然而植酸在植物的生長發(fā)育中有著重要的生理功能，因此，研究植酸下降的幅度與植株是否能夠正常生長的關(guān)系，十分重要。本試驗將利用分子標(biāo)記其中TW lpa1-2 采用根據(jù)2-bp 缺失設(shè)計的特異性標(biāo)記，Yuan 等2007，在TW

19、 lpa1-2 和ZC lpa2-1 兩個突變種質(zhì)的雜交后代F3 或F4中選擇兩個突變基因均為純合的株系。通過對此類材料植酸含量的分析，探明兩個突變組合在一起對植酸合成的影響程度。在此根底上，通過分析雙突變純合株系材料的農(nóng)藝和品質(zhì)性性狀，確定兩個突變基因組合使用的育種價值方法同2：低植酸突變對農(nóng)藝、品質(zhì)性狀的影響可行性分析：本試驗涉及的研究工程，除精細(xì)定位外，我們已開展了前期研究，完成了材料、方法和技術(shù)平臺的構(gòu)建，因此，完成實驗方案應(yīng)該不存在技術(shù)上的困難。基因精細(xì)定位局部，如前所述，大豆分子遺傳學(xué)和基因組學(xué)研究日新月異，在未來的幾年中會有更多的信息可以幫助建立起更有效的方法、技術(shù)，采用更加有效

20、的策略完成預(yù)定任務(wù)。我們根據(jù)現(xiàn)有的基因組信息，提出新標(biāo)記開發(fā)和精細(xì)定位的策略，在執(zhí)行過程中應(yīng)該也不會遇到無法克服的困難，但有可能工作量會比較大，無法到達非常精細(xì)的地步。但我們制定的目標(biāo)是獲得遺傳距離小于1cM的標(biāo)記，這是完全可能的，其他研究者也已經(jīng)有類似的報道。申請者研究小組已有幾十年大豆育種和相關(guān)根底研究的歷史，擁有一支經(jīng)驗豐富，實力較強的研究隊伍，浙江大學(xué)作為合作單位，增強了根底理論研究的力量；建設(shè)于我院的國家大豆改進分中心實驗室已經(jīng)建成并投入使用，其品質(zhì)分析和分子生物學(xué)研究所需儀器較齊全；同時大棚、曬場和試驗基地等根底設(shè)施良好，這些都為本工程的開展和實施提供了保障。4. 本工程的特色與創(chuàng)

21、新之處 受理工程11以往對NAC 基因的研究主要在于模式植物如擬南芥的胚胎早期發(fā)育或在耐逆境中的作用，還沒有系統(tǒng)研究NAC 基因?qū)Υ蠖狗N子發(fā)育的影響。因此，本工程特色之一是說明NAC蛋白在大豆種子發(fā)育過程中生物學(xué)功能。2本工程結(jié)合轉(zhuǎn)基因技術(shù)、基因芯片分析技術(shù)和蛋白質(zhì)組技術(shù)，同時在基因水平和蛋白水平說明NAC 基因在大豆種子發(fā)育過程中的調(diào)控機理，這也是本工程的特色之一。3植物的種子發(fā)育是一個非常復(fù)雜的過程，目前對種子發(fā)育的分子機制還了解較少。本研究通過大豆種子發(fā)育過程中NAC 轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控機理研究，初步明確NAC 基因直接或間接參與的大豆種子發(fā)育調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，這對于進一步完善和豐富對植物種子發(fā)育分

22、子機制的認(rèn)識具有重要意義。受理工程2本工程針對申請者自己培育、初步研究具有潛在應(yīng)用價值的材料展開，針對育種實踐，開展基因定位、基因聚合和育種價值研究，研究起點高，目的性明確，研究結(jié)果具有重要應(yīng)用前景。同時，本工程又緊密結(jié)合大豆分子遺傳學(xué)和基因組學(xué)研究，圍繞大豆植酸生物合成相關(guān)基因開展研究，所得結(jié)果將有望推動大豆相關(guān)分子遺傳學(xué)的開展，加深對植酸生物合成的分子遺傳根底的認(rèn)識，因此具有重要的科學(xué)意義。5. 年度研究方案及預(yù)期研究結(jié)果。包括擬組織的重要學(xué)術(shù)交流活動、國際合作與交流方案等受理工程11 GmNAC2 和GmNAC5 蛋白的轉(zhuǎn)錄活性研究；GmNAC2 的亞細(xì)胞定位研究；基因過量表達載體和RN

23、Ai 載體的構(gòu)建與驗證；開展大豆遺傳轉(zhuǎn)化及分子驗證，獲得GmNAC2 和GmNAC5 單基因過量表達的轉(zhuǎn)基因植株T0 代或單基因表達抑制的轉(zhuǎn)基因植株T0 代。2GmNAC2 和GmNAC5 在大豆種子不同發(fā)育時期的原位雜交分析；獲得GmNAC2 和GmNAC5 單基因過量表達的轉(zhuǎn)基因植株T1 代；獲得單基因表達抑制的轉(zhuǎn)基因植株T1代；通過雜交獲得雙基因過量表達或雙基因表達抑制的轉(zhuǎn)基因植株F1 代；利用光學(xué)顯微鏡、掃描電鏡等對轉(zhuǎn)基因植株種子的發(fā)育過程進行分析。受理工程1預(yù)期研究結(jié)果：1說明GmNAC2 和GmNAC5 在大豆種子發(fā)育過程中的生物學(xué)功能及調(diào)控網(wǎng)路。2發(fā)表研究論文3-5 篇,其中SC

24、I 收錄論文2-3 篇；3申報專利1-2 項；4培養(yǎng)研究生4 名。受理工程2研究方案2021. 01-121、 通過擴大別離群體單株數(shù)目，利用新的在Satt416 區(qū)段有更多多態(tài)性標(biāo)記的定位群體，找到與突變基因ZC lpa2-1 連鎖更加緊密的微衛(wèi)星標(biāo)記，提高定位精度。2、完成突變基因TW lpa1-2 的初步定位目前已經(jīng)開始構(gòu)建群體，找到與突變基因緊密連鎖的微衛(wèi)星標(biāo)記。3、對每個突變基因各自的六組HIP 純合型和野生純合型材料，在不同種植環(huán)境下考察農(nóng)藝和產(chǎn)量性狀，統(tǒng)計分析實驗結(jié)果。對收獲的大豆種子，在田間條件和實驗室條件下，按國家種子檢驗規(guī)程研究種子的發(fā)芽率、發(fā)芽勢和成苗率的差異。4、開始兩

25、個突變基因的聚合工作。5、參加“全國低植酸作物研究聯(lián)合體舉行的有關(guān)學(xué)術(shù)活動。參加第四屆國際豆科作物基因組和遺傳學(xué)大會，墨西哥，2021 年12 月。受理工程2預(yù)期研究結(jié)果： 1、 精細(xì)定位突變基因ZC lpa2-1 和TW lpa 1-2，提出突變候選基因，為基因克隆打下根底。 2、 明確突變基因?qū)ψ蚜：彤a(chǎn)量性狀可能帶來的影響，完成突變基因在育種應(yīng)用價值中的評價。 3、 聚合兩個不同的突變基因，提出分子輔助育種策略。開掘植酸含量不同程度的下降對農(nóng)藝和籽粒性狀帶來的影響。 4、發(fā)表論文4-6 篇，其中SCI 2-3 篇。 5、以本工程為資助，完成博士研究論文一篇。二研究根底與工作條件 1、工作根

26、底與本工程相關(guān)的研究工作積累和已取得的研究工作成績1具體、明確，圖表結(jié)合2處理好已完成和申請內(nèi)容的關(guān)系已構(gòu)建了群體？受理工程1工作根底基因克隆與表達：本實驗室已從大豆中克隆了6 個NAC 基因(GmNAC1-GmNAC6)(Meng et al., 2007，in press)。本研究選擇其中的兩個與種子發(fā)育相關(guān)的NAC 基因GmNAC2 和GmNAC5 進一步分析說明GmNAC 基因的表達可能與種子發(fā)育狀態(tài)有關(guān)。為明確大豆NAC 蛋白是否認(rèn)位于核中，我們構(gòu)建了GmNAC5 與GFP 基因融合的載體用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法進行洋蔥表皮細(xì)胞的瞬時表達分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)GmNAC5 是定位在細(xì)胞核如以下圖3

27、。轉(zhuǎn)基因大豆技術(shù)體系：轉(zhuǎn)基因大豆的培育是本工程實施的重要環(huán)節(jié)，已經(jīng)建立了較穩(wěn)定大豆遺傳轉(zhuǎn)化體系，經(jīng)Southern雜交驗證，可以獲得1%左右的轉(zhuǎn)化效率Yi & Yu, 2006?；蛐酒治黾夹g(shù)：我們利用大豆寡聚核苷酸芯片Affymetrix研究了大豆不同組織的轉(zhuǎn)錄組，已經(jīng)鑒定了221個大豆花特異表達基因，并通過Real-time PCR技術(shù)進行了芯片結(jié)果的驗證黃方等，未發(fā)表資料；蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)：我們已經(jīng)通過蛋白質(zhì)組技術(shù)研究了大豆種子發(fā)育過程中差異表達蛋白質(zhì)的變化規(guī)律鄭蕊, 2005，累積了較好的蛋白組分析技術(shù)。上述研究工作根底為本工程的順利實施提供了材料和技術(shù)保證。受理工程21、采用我國不同

28、的大豆種質(zhì)資源，通過物理誘變的方法，篩選到了2 份植酸突變種質(zhì)；經(jīng)過5-6個世代的選育，其目標(biāo)性狀穩(wěn)定遺傳，農(nóng)藝性狀趨于穩(wěn)定。2、遺傳研究說明：2 份突變均為隱性單基因所控制；等位性鑒定實驗表 明，2 個突變基因非等位。獲得2份低植酸突變體明確低植酸突變由隱性單基因控制提供相關(guān)的數(shù)據(jù)受理工程23、磷素含量植酸鹽、低價肌醇磷酸鹽、總磷和無機磷分析說明，突變種質(zhì)中植酸含量顯著下降，達50以上，無機磷大幅上升；突變種質(zhì)ZC lpa2-1 中低價肌醇磷酸鹽含量顯著上升，這在大豆低植酸突變種質(zhì)中是一個新的表現(xiàn)型。突變種質(zhì)中磷素組分發(fā)生的改變，不受環(huán)境條件的影響以上測定在德國慕尼黑大學(xué)分析測試中心進行。4

29、、對突變種質(zhì)ZC lpa2-1 進行了基因定位，發(fā)現(xiàn)其突變發(fā)生是一個新的基因位點。通過的測序和連鎖分析，發(fā)現(xiàn)TW lpa1-2 突變由肌醇-3-磷酸合成酶基因MIPS1第3 外顯子的1 個2-bp 缺失引起，但在大豆中MIPS 基因的4 個拷貝均沒有定位的研究報道。明確突變體種質(zhì)磷素組分變化特點發(fā)現(xiàn)突變體基因變化5、對突變種質(zhì)進行了農(nóng)藝性狀的初步分析，發(fā)現(xiàn)與親本野生型相比，突變種質(zhì)ZC lpa2-1 性狀沒有發(fā)生明顯的改變。而突變種質(zhì)TW lpa1-2 的成苗率較低，但與親本相比下降幅度較小。6、品質(zhì)性狀分析：與親本野生型相比，突變種質(zhì)TW lpa1-2 中蔗糖含量上升，棉籽糖和水蘇糖含量下降

30、，該性狀也是大豆品質(zhì)改進的目標(biāo)之一。而兩個突變種質(zhì)中的異黃酮含量均發(fā)生了較大的改變。7、建立了植酸以及相關(guān)磷素組成成分的分析測試技術(shù)，并就此研究開展了一些國際交流。8、構(gòu)建了不同突變種質(zhì)的別離群體。不夠具體？9、針對以上的研究內(nèi)容，已完成博士論文一篇題目？。其中局部已整理成研究性論文題目？，將于2007 年在TAG 上發(fā)表。2、工作條件 包括已具備的實驗條件，尚缺少的實驗條件和擬解決的途徑，包括利用國家重點實驗室和部門開放實驗室的方案與落實情況。 認(rèn)真填寫設(shè)施和條件 并非所有的評委都了解 3、申請人簡歷申請者和工程組主要成員學(xué)歷和研究工作簡歷 通過簡歷反映出你的背景及能力近期已發(fā)表與本工程有關(guān)

31、的主要論著目錄和獲得學(xué)術(shù)獎勵情況及在本工程中承擔(dān)的任務(wù)論著目錄要求詳細(xì)列出所有作者、論著題目、期刊名或出版社名、年、卷期、起止頁碼等 與本課題無關(guān)不要列實事求是獎勵情況須詳細(xì)列出全部受獎人員、獎勵名稱等級、授獎年等 4、承擔(dān)科研工程情況 申請者和工程組主要成員正在承擔(dān)的科研工程情況，包括自然科學(xué)基金的工程，要注明工程的名稱和編號、經(jīng)費來源、起止年月、負(fù)責(zé)的內(nèi)容等。明確本工程與其他工程內(nèi)容的不同之處受理編號：307733151)國家自然科學(xué)基金重大工程- (30490250,大豆優(yōu)異基因資源的開掘及其基因組研究)課題2, 大豆高密度分子標(biāo)記和EST 圖譜的構(gòu)建及其在重要品質(zhì)性狀QTL 定位中的應(yīng)

32、用(2004-2021), 共同主持2)國家自然科學(xué)基金(30671486),豆科模式植物蒺藜苜蓿種子產(chǎn)量相關(guān)性狀的比較基因組分析2007-2021，參加以上兩個工程的研究內(nèi)容主要是應(yīng)用圖譜構(gòu)建的方法對大豆和蒺藜苜蓿的農(nóng)藝品質(zhì)性狀進行精細(xì)定位，為未來的基因圖位克隆做準(zhǔn)備。與本申請工程無重復(fù)研究內(nèi)容，但累積的研究技術(shù)方法和科研思路為本工程的實施提供重要支撐。 5、完成自然科學(xué)基金工程情況 對申請者負(fù)責(zé)的前一個已結(jié)題科學(xué)基金工程工程名稱及批準(zhǔn)號完成情況、后續(xù)研究進展及與本申請工程的關(guān)系加以詳細(xì)說明。另附該已結(jié)題工程研究工作總結(jié)摘要限500字和相關(guān)成果的詳細(xì)目錄。已完成工程的情況對此有很大的影響三經(jīng)費申請說明