飲料中甲基咪唑和甲基咪唑的測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法DBS61-0007-2015

1、DBS61陜西省食品安全地方標(biāo)準(zhǔn)DB S61/00072015飲料中4-甲基咪嚏和2-甲基咪嚏的測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法2015 -03 -28 實(shí)施Determination of 4-(5-)-methylimidazole and 2-methylimidazole in beverage by Liquid Chromatography-tandem Mass Spectrometric method2015 - 02-28 發(fā)布陜西省衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)發(fā)布DBS61/0007 2015本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T 1.1-2009給出的規(guī)則起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)

2、布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別這些專利的責(zé)任。本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A、附錄B均為資料性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由陜西省衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)發(fā)布并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)陜西出入境檢驗(yàn)檢驗(yàn)局提出并起草。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：張璐、何強(qiáng)、鄒陽(yáng)、李瑩、付騁宇、孔祥虹、李建華、吳雙民。本標(biāo)準(zhǔn)屬首次發(fā)布。DBS61/0007 2015飲料中4-甲基咪嚏和2-甲基咪嚏的測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了飲料中4-甲基咪陛和2-甲基咪陛的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS )的檢測(cè)方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于碳酸飲料、特殊用途飲料、茶飲料、咖啡飲料等中4-甲基咪陛和2-甲基咪陛的測(cè)定。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡

3、是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T 6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法3原理試樣中的4-甲基咪陛和2-甲基咪陛經(jīng)水溶解或稀釋，振蕩后，陽(yáng)離子固相萃取柱( MCX)凈化，液 相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定，內(nèi)標(biāo)法定量。4試劑與材料除非另有說(shuō)明，在分析中僅使用確認(rèn)為分析純的試劑和GB/T6682中規(guī)定的一級(jí)水。標(biāo)準(zhǔn)品：4-甲基咪陛(CAS: 822-36-6 , C4H6刈)和 2-甲基咪陛(CAS : 693-98-1 , C4H6N2)含 量均98.0 %。內(nèi)標(biāo)物：笊代4-甲基咪陛標(biāo)準(zhǔn)品：含量A 99.0 %

4、。甲醇：色譜純。乙睛：色譜純。甲酸：色譜純。甲酸俊。氨水。MCX固相萃取柱：60 mg/3mL ,或相當(dāng)者。甲酸水溶液(2 %):準(zhǔn)確量取2 mL甲酸和98 mL水，混合后備用。氨水甲醇溶液(5 %):準(zhǔn)確量取5 mL氨水和95 mL甲醇，混合后備用。甲酸俊溶液(5 mmol/L ):準(zhǔn)確稱取0.0945 g甲酸俊溶解于300 mL水中，混合后備用。DBS61/0007 2015乙睛-5 mmol/L甲酸錢溶液（9:1, V/V）:準(zhǔn)確量取90 mL乙睛和10 mL 5 mmol/L甲酸?。?.11） 混合備用。標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1 mg/mL）:分別準(zhǔn)確稱取 4-甲基咪陛和2-甲基咪座各10 mg

5、,用甲醇溶解定容至10 mL,搖勻，0 C4 C避光保存，有效期 1年。內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液（1 mg/mL ）：準(zhǔn)確稱取笊代 4-甲基咪陛10 mg,用甲醇溶解定容至 10 mL,搖勻，0 C4 C避光保存，有效期 1年?；旌蠘?biāo)準(zhǔn)中間溶液（1 Mg/mL）：分別準(zhǔn)確量取1 mg/mL 4-甲基咪陛和2-甲基咪陛標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液各 0.025 mL,于25 mL容量瓶中，用乙睛-5 mmol/L甲酸俊溶液（4.12）溶解，定容于25 mL , 0 C4 C 避光保存，有效期 6個(gè)月。笊彳t 4-甲基咪陛標(biāo)準(zhǔn)中間溶液 （1 Mg/mL）:準(zhǔn)確量取1 mg/mL笊彳t 4-甲基咪陛內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備溶液 0.025 mL,

6、于25 mL容量瓶中，用甲醇溶液，定容于 25 mL , 0 C4 C避光保存，有效期 6個(gè)月?；旌蠘?biāo)準(zhǔn)使用溶液：根據(jù)需要，臨時(shí)吸取一定量的混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液（4.14）和內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)中間溶液（4.15）,用乙睛-5 mmol/L甲酸俊溶液（4.12）稀釋配制適當(dāng)濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)使用溶液，每毫升混合 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中含有笊代 4-甲基咪陛為0.01%。5儀器與設(shè)備液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：配電噴霧離子源。分析天平： 感量0.01 mg。天平：感量0.01 g。振蕩器渦旋混勻器離心機(jī)固相萃取裝置氮吹儀聚四氟乙烯離心管：15 mL。濾膜：0.22 Mm。備與保存取有代表性試樣500 g,混合均勻，裝入潔凈容器中

7、，密閉并標(biāo)明標(biāo)記，冷藏保存。驟7.1提取DBS61/0007 2015準(zhǔn)確稱取試樣3 g （精確至0.01 g）,于15 mL離心管中，加入笊代4-甲基咪陛標(biāo)準(zhǔn)中間溶液（4.15） 100 ML,用水溶解或稀釋，定容至 10 mL ,振蕩10 min。4500 r/min下離心5 min ,待凈化。凈化MCX固相萃取柱依次用甲醇 3 mL和水5 mL活化，取待凈化液過(guò)柱，控制流速1滴/34 s,依次用2 % 甲酸水溶液（4.9）5 mL和甲醇5 mL淋洗，再用5 %氨水甲醇溶液（4.10）9 mL洗脫，收集洗脫液，于40 C 氮?dú)獯蹈?。用乙?5 mmol/L甲酸俊溶液（4.12） 1 mL溶

8、解殘?jiān)?，渦旋混勻，濾膜（5.10）過(guò)濾，供液相 色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備準(zhǔn)確量取1 Mg/mL混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液和1 Mg/mL笊彳t 4-甲基咪陛標(biāo)準(zhǔn)中間溶液適量，用乙睛 -5mmol/L甲酸俊溶液（4.12）稀釋，配制成9.0, 15.0, 50.0, 100.0, 500 .0 Ng/L系列濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)使用 溶液，其中笊代4-甲基咪陛濃度為10 Mg/L,供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定。以目標(biāo)化合物與內(nèi)標(biāo)物峰面積 比值為縱坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求回歸方程和相關(guān)系數(shù)。測(cè)定液相色譜條件色譜柱：HILIC （2.1 M00 mm, 1.7 Pm）,或相當(dāng)者；柱溫：4

9、0 C；流速：0.3 mL/min ;進(jìn)樣量：2.0七流動(dòng)相：乙睛+5 mmol/L甲酸俊溶液（9+1, V/V）,等度洗脫；質(zhì)譜條件離子源：電噴霧離子源 ；掃描方式：正離子掃描；檢測(cè)方式：多反應(yīng)檢測(cè)；電離電壓：2.9 kV ;離子源溫度：115 C；脫溶劑氣溫度：350 C；脫溶劑氣：600 L/h ;錐孔氣：50 L/h ;定性、定量離子對(duì)及對(duì)應(yīng)的錐孔電壓和碰撞電壓見(jiàn)表1表1a 4-甲基咪唾和2-甲基咪唾定性、定量離子對(duì)和錐孔電壓及碰撞電壓化合物定性離子對(duì)定量離子錐孔電壓碰撞電壓4-甲基咪座（4-Mel）82.9/42.182.9/55.9301582.9/55.9142-甲基咪座（2-M

10、el）82.9/42.182.9/42.1371482.9/55.914笊代4-甲基咪座（4-Mel- d6）88.0/60.188.0/60.13015DBS61/0007 2015a對(duì)于不同質(zhì)譜儀器，儀器參數(shù)可能存在差異，測(cè)定前應(yīng)將質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化到最佳。非商業(yè)性聲明：表1所列參數(shù)是在 Waters ACQUITY UPLC-Quattro Premier 質(zhì)譜儀完成的，此處列出的實(shí)驗(yàn)用儀器 僅是為了提供參考，并不涉及商業(yè)目的，鼓勵(lì)標(biāo)準(zhǔn)使用者嘗試不同型號(hào)的儀器。7.4.3測(cè)定法按照7.4.1和7.4.2液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜條件測(cè)定試樣和混合標(biāo)準(zhǔn)使用溶液（4.16）,按內(nèi)標(biāo)法以峰面積比計(jì)算?；旌蠘?biāo)

11、準(zhǔn)使用溶液及試樣溶液中4-甲基咪陛和2-甲基咪陛和笊代4-甲基咪陛的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測(cè)的線性范圍之內(nèi)。試樣溶液中的離子對(duì)相對(duì)豐度與混合標(biāo)準(zhǔn)使用溶液的離子相對(duì)豐度比符合表2的要求。在上述色譜條件下4-甲基咪陛和2-甲基咪陛參考保留時(shí)間分別為1.96 min和2.63 min。標(biāo)準(zhǔn)溶液的離子流圖參見(jiàn)附錄A中圖A.1。表2試樣溶液中離子相對(duì)豐度的允許偏差范圍相對(duì)豐度（）50 2050 1020 10允許偏差（）立0+25墳i507.5空白試驗(yàn)除不加試樣外，均按上述測(cè)定條件和步驟進(jìn)行。8結(jié)果計(jì)算和表達(dá)計(jì)算A82.9/55.9 / A88.0/60.1或人2.9/42.1 /傲.0/60.1峰面積比值

12、，標(biāo)準(zhǔn)曲線校正。其中：A829/559 4-甲基咪口坐定量離子對(duì)峰面積； .A32.9/42.1 2-甲基咪陛定量離子對(duì)峰面積；A38.0/60.1 笊代4-甲基咪口坐峰離子對(duì)面積;由標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：A / As naMcs/Cs +b求得a和b,則c cis / A hC =一仁一 b)aAs試樣中4-甲基咪口坐或2-甲基咪口坐殘留量（%/kg）:按下式計(jì)算:x _C VXm式中：As混合標(biāo)準(zhǔn)使用溶液中4-甲基咪陛或2-甲基咪陛的峰面積；As 混合標(biāo)準(zhǔn)使用溶液中內(nèi)標(biāo)笊代 4-甲基咪陛的峰面積；Cs 混合標(biāo)準(zhǔn)使用溶液中內(nèi)標(biāo)笊代 4-甲基咪陛的濃度，單位為微克每升，Ng/L;DBS61/0007

13、2015眺一混合標(biāo)準(zhǔn)使用溶液中4-甲基咪陛或2-甲基咪陛，單位為微克每升，Mg/L;c 一試樣中4-甲基咪陛或2-甲基咪陛的濃度，單位為微克每升，%/L;A 一試樣中4-甲基咪口坐或2-甲基咪口坐的峰面積；., 一一、., , 一 As 一試樣中內(nèi)標(biāo)笊代4-甲基咪口坐的峰面積；X 一試樣中待分析物的殘留量，單位為微克每千克（/kg）；V 溶解殘余物的體積，單位為毫升， mL;m 一試樣質(zhì)量，單位為克，go注：計(jì)算結(jié)果需扣除空白值，測(cè)定結(jié)果用平行測(cè)定的算術(shù)平均值表示，保留三位有效數(shù)字。9定量限、回收率和精密度定量限本方法對(duì)4-甲基咪陛、2-甲基咪陛的定量限均為 10.0 Mg /kg?；厥章侍妓?/p>

14、飲料、特殊用途飲料、茶飲料、咖啡飲料中4-甲基咪陛、2-甲基咪陛的回收率試驗(yàn)數(shù)據(jù)見(jiàn)附錄B.1 ,在10.075.0 %/kg添加濃度水平上的回收率范圍為88.8 %119.9 %。9.3精密度本方法的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差w 10 %。DBS61/0007 2015附錄A（資料性附錄）圖A.1 4-甲基咪陛（4-Mel）、2-甲基咪陛（2-Mel）和笊代4-甲基咪陛（4-Mel- de）的選擇離子色譜圖（10 Mg/kg）DBS61/0007 2015附錄B(資料性附錄)4-甲基咪陛和2-甲基咪陛殘留檢測(cè)的添加回收率數(shù)據(jù)表B.1碳酸飲料、特殊用途飲料、茶飲料、咖啡飲料中4-甲基咪陛和2-甲基咪陛添加濃度及回收率(n=5)樣品化合物添加水平(Hg/kg)回收率 (%)碳酸飲料4-甲基咪陛1089.095.02598.4119.950105.2-111.77595.0112.42-甲基咪唾1092.596.12588.4104.45099.4104.475109.7-118.7特殊用途飲料4-甲基咪唾10