選修三高考題知識(shí)點(diǎn)分類匯編基因工程的原理及技術(shù)

1、基因工程的原理及技術(shù)12012山東35、（8分）【生物現(xiàn)代生物科技專題】毛角蛋白II型中間絲（KIFII）基因與絨山羊的羊絨質(zhì)量密切相關(guān)。獲得轉(zhuǎn)KIFII基因的高絨質(zhì)絨山羊的簡單流程如圖。（1）過程中最常用的運(yùn)載工具是_，所需要的酶是限制酶和_。（2）在過程中，用_處理將皮膚組織塊分散成單個(gè)成纖維細(xì)胞。在培養(yǎng)過程中，將成纖維細(xì)胞置于5%CO2的氣體環(huán)境中，CO2的作用是_。（3）在過程中，用_處理以獲得更多的卵（母）細(xì)胞。成熟卵（母）細(xì)胞在核移植前需要進(jìn)行_處理。（4）從重組細(xì)胞到早期胚胎過程中所用的胚胎工程技術(shù)是_。在胚胎移植前，通過_技術(shù)可獲得較多胚胎?！敬鸢浮浚?）質(zhì)粒； DNA連接酶

2、（2）胰蛋白酶（或膠原蛋白酶）； 維持培養(yǎng)基（液）的PH穩(wěn)定 （3）促性腺激素（或促濾泡素，孕馬血清）； 去核 （4）（早期）胚胎培養(yǎng) 胚胎分割【解析】熟練掌握基因工程和胚胎工程的基本知識(shí)就能解答本題.（1）運(yùn)載工具（體）包括質(zhì)粒、噬菌體衍生物及動(dòng)植物病毒,其中質(zhì)粒是主要運(yùn)載體;所需工具酶是限制酶和DNA連接酶。（2）分散皮膚組織塊成單個(gè)細(xì)胞使用胰蛋白酶（或膠原蛋白酶）。在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程中， CO2的作用是維持培養(yǎng)液pH的相對(duì)穩(wěn)定。（3）要得到更多的卵（母）細(xì)胞需用促性腺激素進(jìn)行超數(shù)排卵處理；成熟卵（母）細(xì)胞在核移植前需要進(jìn)行去核處理，以保證克隆后代的遺傳性狀主要了來自供體核。（4）把重組細(xì)

3、胞培養(yǎng)到早期胚胎叫早期胚胎培養(yǎng)技術(shù)；在胚胎移植前，通過胚胎分割技術(shù)可獲得較多胚胎?！驹囶}評(píng)價(jià)】本題考查了基因工程的操作工具、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過程和條件、超數(shù)排卵的方法、核移植技術(shù)、胚胎工程中早期胚胎培養(yǎng)和胚胎移植等知識(shí)，基礎(chǔ)性強(qiáng)，難度不大。22012天津7.（13分）生物分子間特異性結(jié)合的性質(zhì)廣泛用于生命科學(xué)研究。以下實(shí)例為體外處理“蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合體”獲得DNA片段信息的過程圖。據(jù)圖回答：（1）過程酶作用的部位是 鍵，此過程只發(fā)生在非結(jié)合區(qū)DNA，過程酶作用的部位是 鍵。（2）、兩過程利用了酶的 特性。（3）若將得到的DNA片段用于構(gòu)建重組質(zhì)粒，需要過程的測(cè)序結(jié)果與 酶的識(shí)別序列進(jìn)行對(duì)比，以

4、確定選用何種酶。（4）如果復(fù)合體中的蛋白質(zhì)為RNA酶聚合，則其識(shí)別、結(jié)合DNA序列區(qū)為基因的 。（5）以下研究利用了生物分子間的特異性結(jié)合的有 （多選）A.分離得到核糖體，用蛋白酶酶解后提取rRNA B.用無水乙醇處理菠菜葉片，提取葉綠體基粒膜上的光合色素C通過分子雜交手段，用熒光物質(zhì)標(biāo)記的目的基因進(jìn)行染色體定位D將抑制成熟基因?qū)敕眩鋗RNA與催化成熟酶基因的mRNA互補(bǔ)結(jié)合，終止后者翻譯，延遲果實(shí)成熟?！敬鸢浮浚?）磷酸二酯，肽（2）專一性（3）限制性核酸內(nèi)切酶 （4）啟動(dòng)子（或轉(zhuǎn)錄起始區(qū)）（5）A、C、D【解析】（1）DNA酶作用的部位是DNA的磷酸二酯鍵，蛋白酶作用的部位是肽鍵。（

5、2）過程利用了各種酶催化一種或一類化學(xué)反應(yīng)的特性，即專一性。（3）DNA要構(gòu)建重組質(zhì)粒，需要用限制性核酸內(nèi)切酶切割，再與質(zhì)粒重組。（4）RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合在基因的啟動(dòng)子上，驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄。（5）蛋白酶能特異性的酶解蛋白質(zhì)，分子雜交手段也是利用各物質(zhì)分子結(jié)合的特異性，抑制成熟基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA與催化成熟酶基因的mRNA堿基互補(bǔ)結(jié)合，也具有特異性，光和色素易溶于有機(jī)溶劑，與酒精并不是特異性的溶解，所以選ACD?！驹囶}點(diǎn)評(píng)】本題考查了基因工程的想過知識(shí)，主要考查學(xué)生對(duì)知識(shí)的理解和應(yīng)用能力，難度較小。32012天津8.（20分）黃曲霉毒素B1 （AFB1）存在于被黃曲霉菌污染的飼料中，它可以通過食

6、物鏈進(jìn)入動(dòng)物體內(nèi)并蓄積，引起瘤變。某些微生物能表達(dá)AFB1解毒酶將該酶添加在飼料中可以降解AFB1，清除其毒性?；卮鹣铝袉栴}：( 1 ) AFB1屬于 類致癌因子。( 2 ) AFB1能結(jié)合在DNA 的G 上，使該位點(diǎn)受損傷變?yōu)镚 ，在DNA復(fù)制中，G 會(huì)與A配對(duì)。現(xiàn)有受損傷部位的序列為，經(jīng)兩次復(fù)制后，該序列突變?yōu)?。（3）下圖為采用基因工程技術(shù)生產(chǎn)AFB1解毒酶的流程圖據(jù)圖回答問題： 在甲、乙條件下培養(yǎng)含AFB1解毒酶基因的菌株，經(jīng)測(cè)定，甲菌液細(xì)胞密度小、細(xì)胞含解毒酶：乙菌液細(xì)胞密度大、細(xì)胞不含解毒酶過程l 應(yīng)選擇 菌液的細(xì)胞提取總RNA ，理由是 過程中，與引物結(jié)合的模版是 檢測(cè)酵母菌工程

7、菌是否合成了AFB1解毒酶，應(yīng)采用 方法。( 4 ）選取不含AFB1的飼料和某種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為材料，探究該AFB1解毒酶在飼料中的解毒效果。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及測(cè)定結(jié)果見下表：據(jù)表回答問題： 本實(shí)驗(yàn)的兩個(gè)自變量，分別為 。 本實(shí)驗(yàn)中，反映AFB1解毒酶的解毒效果的對(duì)照組是 。 經(jīng)測(cè)定，某污染飼料中AFB1含量為100g/kg ，則每千克飼料應(yīng)添加 克AFB1解毒酶解毒效果最好同時(shí)節(jié)的了成本。（5）采用蛋白質(zhì)工程進(jìn)一步改造該酶的基本途徑是：從提高每的活性出發(fā)，設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，推測(cè)應(yīng)有的氨基酸序列，找到相對(duì)應(yīng)的 序列。【答案】( 1 )化學(xué)( 2 ) （3）甲 甲菌液細(xì)胞的AFB1解毒酶基因已轉(zhuǎn)錄生成了m

8、RNA，而在乙菌液細(xì)胞中該基因未轉(zhuǎn)錄AFB1解毒酶基因的 cDNA. 抗原-抗體雜交 (4） AFB1的有無和AFB1解毒酶的含量。 B組（或B組+A組） 5 (5）脫氧核苷酸序列?！窘馕觥奎S曲霉毒素B1 （AFB1）存在于被黃曲霉菌污染的飼料中，它可以通過食物鏈進(jìn)入動(dòng)物體內(nèi)并蓄積，引起瘤變。某些微生物能表達(dá)AFB1解毒酶將該酶添加在飼料中可以降解AFB1，清除其毒性。( 1 ) 黃曲霉毒素B1（AFB1）是化學(xué)物質(zhì)，AFB1屬于化學(xué)類致癌因子。( 2 ) AFB1能結(jié)合在DNA 的G 上使該位點(diǎn)受損傷變?yōu)镚 ，在DNA復(fù)制中，G 會(huì)與A配對(duì)?，F(xiàn)有受損傷部位的序列為，經(jīng)兩次復(fù)制后，該序列突變?yōu)?/p>

9、。（3） 在甲、乙條件下培養(yǎng)含AFB1解毒酶基因的菌株經(jīng)測(cè)定甲菌液細(xì)胞密度小、細(xì)胞含解毒酶：乙菌液細(xì)胞密度大、細(xì)胞不含解毒酶過程l 應(yīng)選擇甲菌液的細(xì)胞提取總RNA ，理由是因?yàn)榧拙杭?xì)胞含解毒酶，意味著完成了基因的表達(dá)，所以應(yīng)選擇甲菌液的細(xì)胞提取總RNA 過程中，根據(jù)圖示，可以看出與引物結(jié)合的模版是cDNA. 檢測(cè)酵母菌工程菌是否合成了AFB1解毒酶，檢測(cè)對(duì)象為蛋白質(zhì)，應(yīng)采用抗原-抗體雜交方法。（4） 本實(shí)驗(yàn)的兩個(gè)自變量，分別為AFB1的有無和AFB1解毒酶的含量。 本實(shí)驗(yàn)中反映AFB1解毒酶的解毒效果的對(duì)照組是B組。 經(jīng)測(cè)定，某污染飼料中AFB1含量為100g/kg ，則每千克飼料應(yīng)添加5克

10、AFB1解毒酶AFB1的殘留量最少，解毒效果最好繼續(xù)添加AFB1解毒酶解解毒效果不變，因此節(jié)約了成本。（5）采用蛋白質(zhì)工程進(jìn)一步改造該酶的基本途徑是：從提高酶的活性出發(fā)，設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，推測(cè)應(yīng)有的氨基酸序列，找到相對(duì)應(yīng)的脫氧核苷酸序列。【試題點(diǎn)評(píng)】本題以“黃曲霉毒素B1”為材料背景，考查了致癌因子，DNA復(fù)制，基因工程，蛋白質(zhì)工程和實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，是一道很好的綜合題，考查學(xué)生的知識(shí)的理解和運(yùn)用能力，以及對(duì)實(shí)驗(yàn)分析能力和分析探究能力。難度適中。42012浙江6.天然的玫瑰沒有藍(lán)色花，這是由于缺少控制藍(lán)色色素合成的基因B，而開藍(lán)色花的矮牽牛中存在序列已知的基因B?，F(xiàn)用基因工程技術(shù)培育藍(lán)玫瑰，下列操

11、作正確的是（ ）A.提取矮牽牛藍(lán)色花的mRNA，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄獲得互補(bǔ)的DNA，再擴(kuò)增基因BB.利用限制性核酸內(nèi)切酶從開藍(lán)色花矮牽牛的基因文庫中獲取基因BC.利用DNA聚合酶將基因B與質(zhì)粒連接后導(dǎo)入玫瑰細(xì)胞D.將基因B直接導(dǎo)入大腸桿菌，然后感染并轉(zhuǎn)入玫瑰細(xì)胞【解析】提取矮牽牛藍(lán)色花的mRNA，逆轉(zhuǎn)錄得到DNA，然后擴(kuò)增，可獲得大量的基因B，A正確；從基因文庫中獲取目的基因，只要根據(jù)目的基因的相關(guān)信息和基因文庫中的信息進(jìn)行篩選對(duì)比即可，不需要用限制酶進(jìn)行切割，B錯(cuò)誤；目的基因與質(zhì)粒的連接需要用DNA連接酶，而不是DNA聚合酶，C錯(cuò)誤；目的基因需要和運(yùn)載體連接后形成重組質(zhì)粒再導(dǎo)入，而且應(yīng)該用農(nóng)桿菌進(jìn)行感

12、染，而不是大腸桿菌，D錯(cuò)誤?！敬鸢浮緼【試題點(diǎn)評(píng)】本題主要考查基因工程，在這部分，工具酶的選擇和操作過程是?？純?nèi)容，難度適中。52012新課標(biāo)40、根據(jù)基因工程的有關(guān)知識(shí)，回答下列問題：（1）限制性內(nèi)切酶切割分子后產(chǎn)生的片段，其末端類型有和。（2）質(zhì)粒運(yùn)載體用EcoR切割后產(chǎn)生的片段如下：為使運(yùn)載體與目的基因相連，含有目的基因的DNA除可用EcoR切割外，還可用另一種限制性內(nèi)切酶切割，該酶必須具有的特點(diǎn)是。（3）按其來源不同，基因工程中所使用的DNA連接酶有兩類，即DNA連接酶和DNA連接酶。（4）反轉(zhuǎn)錄作用的模板是，產(chǎn)物是。若要在體外獲得大量反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，常采用技術(shù)。（5）基因工程中除質(zhì)粒外，

13、和也可作為運(yùn)載體。（6）若用重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌，一般情況下，不能直接用未處理的大腸桿菌作為受體細(xì)胞，原因是?！敬鸢浮浚?）黏性末端 平末端切割產(chǎn)生的DNA片段末端與EcoR切割產(chǎn)生的相同Ecoli T4mRNA（或RNA） cDNA （或DNA） PCR噬菌體 動(dòng)植物病毒（6）未處理的大腸桿菌吸收質(zhì)粒（外源DNA）的能力極弱【解析】（1）當(dāng)限制酶在它識(shí)別序列的中心軸線兩側(cè)將DNA的兩條鏈分別切開時(shí)，產(chǎn)生的是黏性末端，而當(dāng)限制酶在它識(shí)別序列的中心軸線處切開時(shí)，產(chǎn)生的則是平末端。為使運(yùn)載體與目的基因相連，不同的限制酶應(yīng)切割出相同的黏性末端，它們必須要能識(shí)別相同的核苷酸序列，并且使每條鏈中相同的兩

14、個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開。DNA連接酶，根據(jù)酶的來源不同，可以將這些酶分為兩類：一類是從大腸桿菌中分離得到的，稱為Ecoli DNA連接酶；另一類是從T4噬菌體中分離出來的，稱為T4DNA連接酶。反轉(zhuǎn)錄是以RNA為模版來合成DNA的過程?？梢栽隗w外短時(shí)間內(nèi)大量擴(kuò)增DNA的技術(shù)叫PCR（多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）基因工程中除質(zhì)粒外，還有噬菌體的衍生物、動(dòng)植物病毒等。大腸桿菌細(xì)胞外有細(xì)胞壁和細(xì)胞膜，能阻止其他物質(zhì)的進(jìn)入，只能通過Ca2+處理細(xì)胞，使細(xì)胞處于能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)，這種細(xì)胞稱為感受態(tài)細(xì)胞?！驹囶}評(píng)價(jià)】通過基因工程的操作過程及基因工程的工具及工具酶的作用，考查學(xué)生識(shí)記能力與理解

15、分析能力。難度較小。62012上海55如圖18所示，若用兩種識(shí)別切割序列完全不同的限制酶E和F從基因組DNA上切下目的基因，并將之取代質(zhì)粒pZHZ1(3.7kb，1kb=1000對(duì)堿基)上相應(yīng)的EF區(qū)域 (0.2kb)，那么所形成的重組質(zhì)粒pZHZ2_。A既能被E也能被F切開 B能被E但不能被F切開C既不能被E也不能被F切開 D能被F但不能被E切開【答案】55.A【解析】.用限制酶從基因組DNA上切下目的基因，并取代質(zhì)粒pZHZ1(3.7kb，1kb=1000對(duì)堿基)上相應(yīng)的EF區(qū)域 (0.2kb)，用DNA連接酶連接后形成重組質(zhì)粒，則在重組質(zhì)粒中仍然含有限制酶E和限制酶F的切割位點(diǎn)，形成的重

16、組質(zhì)粒pZHZ2既能被E也能被F切開，故本題選A。72012上海56已知在質(zhì)粒pZHZl中，限制酶G切割位點(diǎn)距限制酶E切割位點(diǎn)08kb，限制酶H切割位點(diǎn)距限制酶F切割位點(diǎn)O5kb。若分別用限制酶G和H酶切兩份重組質(zhì)粒pZHZ2樣 品，據(jù)表4所列酶切結(jié)果判斷目的基因的大小為 kb；并將目的基因內(nèi)部的限制酶G和H切割位點(diǎn)標(biāo)注在圖19中。56.1.2 見右圖【解析】56. 根據(jù)題中信息，原來質(zhì)粒長度為3.7kb切去EF之間的還有3.5kb，插入目的基因后構(gòu)成重組質(zhì)粒，重組質(zhì)粒長度為1.6+3.1=1.2+3.5=4.7kb，可推導(dǎo)出目的基因長度為1.2kb。重組質(zhì)粒中G的切割位點(diǎn)距E的切割位點(diǎn)0.8

17、kb，單獨(dú)用限制酶G切割后產(chǎn)生1.6kb和3.1kb的兩種片段，說明在重組質(zhì)粒中除了圖中標(biāo)示出來的G酶識(shí)別位點(diǎn)外，還有一個(gè)G酶識(shí)別位點(diǎn)；H的酶切位點(diǎn)距F0.5kb，用H單獨(dú)酶切產(chǎn)生1.2kb和3.5kb兩種片段，說明在重組質(zhì)粒中含有另外一個(gè)H的酶切位點(diǎn)，根據(jù)題中信息提示“將目的基因內(nèi)部的限制酶G和H的識(shí)別位點(diǎn)標(biāo)注在圖19中”，可確定在EF之間分別含有G和H的一個(gè)識(shí)別位點(diǎn)。可斷定G的識(shí)別位點(diǎn)，在舉例E點(diǎn)右側(cè)0.8kb處，H的識(shí)別位點(diǎn)在距F左側(cè)0.7kb處。2012上海57若想在山羊的乳汁中收獲上述目的基因的表達(dá)產(chǎn)物，則需將重組質(zhì)粒pZHZ2導(dǎo)入至山羊的_細(xì)胞中。若pZHZ2進(jìn)入細(xì)胞后插入在一條染

18、色體DNA上，那么獲得轉(zhuǎn)基因純合子山羊的方式是_。57.受精卵 轉(zhuǎn)基因山羊間相互交配【解析】57.將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞中，通常以受精卵作為受體細(xì)胞，當(dāng)受精卵發(fā)育成山羊后，在雌性山羊的乳汁中可以提取到目的基因的表達(dá)產(chǎn)物。重組質(zhì)粒插入在一條染色體DNA上，可通過雌雄轉(zhuǎn)基因山羊雜交的方法來獲取轉(zhuǎn)基因純合子山羊。82012廣東28（16分）子葉黃色（Y，野生型）和綠色（y，突變型）是孟德爾研究的豌豆相對(duì)性狀之一。野生型豌豆成熟后，子葉由綠色變?yōu)辄S色。在黑暗條件下，野生型和突變型豌豆的葉片總?cè)~綠素含量的變化見圖10。其中，反映突變型豌豆葉片總?cè)~綠素含量變化的曲線是_。（2）Y基因和y基因的翻譯產(chǎn)物分別

19、是SGRY蛋白和SGRy蛋白，其部分氨基酸序列見圖11。據(jù)圖11推測(cè)，Y基因突變?yōu)閥基因的原因是發(fā)生了堿基對(duì)的_和_。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，SGRY蛋白和SGRy蛋白都能進(jìn)入葉綠體?？赏茰y(cè)，位點(diǎn)_的突變導(dǎo)致了該蛋白的功能異常，從而使該蛋白調(diào)控葉綠素降解的能力減弱，最終使突變型豌豆子葉和葉片維持“常綠”。（3）水稻Y基因發(fā)生突變，也出現(xiàn)了類似的“常綠”突變植株y2，其葉片衰老后仍為綠色。為驗(yàn)證水稻Y基因的功能，設(shè)計(jì)了以下實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)完善。（一）培育轉(zhuǎn)基因植株：植株甲：用含有空載體的農(nóng)桿菌感染_的細(xì)胞，培育并獲得純合植株。植株乙：_，培育并獲得含有目的基因的純合植株。（二）預(yù)測(cè)轉(zhuǎn)基因植株的表現(xiàn)型：植株甲：_

20、維持“常綠”；植株乙：_。（三）推測(cè)結(jié)論：_?！敬鸢浮?（1）A （2）替換 增加 （3）（一）突變植株y2 用含有Y基因的農(nóng)桿菌感染純合突變植株y2 （二）能 不能維持“常綠” （三）Y基因能使子葉由綠色變?yōu)辄S色【解析】（1）根據(jù)題干所給信息“野生型豌豆成熟后，子葉由綠色變?yōu)辄S色”，可推測(cè)出野生型豌豆成熟后，子葉發(fā)育成的葉片中葉綠素含量降低。分析圖10，B從第六天開始總?cè)~綠素含量明顯下降，因此B代表野生型豌豆，A為突變型豌豆。（2）根據(jù)圖11可以看出，突變型的SGRy蛋白和野生型的SGRY有3處變異，處氨基酸由T變成S，處氨基酸由N變成K，可以確定是基因相應(yīng)的堿基對(duì)發(fā)生了替換，處多了一個(gè)氨基

21、酸，所以可以確定是發(fā)生了堿基對(duì)的增添；從圖11中可以看出SGRY蛋白的第12和38個(gè)氨基酸所在的區(qū)域的功能是引導(dǎo)該蛋白進(jìn)入葉綠體，根據(jù)題意，SGRy和SGRY都能進(jìn)入葉綠體，說明、處的變異沒有改變其功能；所以突變型的SGRy蛋白功能的改變就是由處變異引起的。 （3）本實(shí)驗(yàn)通過具體情境考查對(duì)照實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)能力。欲通過轉(zhuǎn)基因?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證Y基因“能使子葉由綠色變?yōu)辄S色”的功能，首先應(yīng)培育純合的常綠突變植株y2，然后用含有Y基因的農(nóng)桿菌感染純合的常綠突變植株y2，培育出含有目的基因的純合植株觀察其葉片顏色變化。為了排除農(nóng)桿菌感染對(duì)植株的影響，應(yīng)用含有空載體的農(nóng)桿菌感染常綠突變植株y2作為對(duì)照?！驹囶}點(diǎn)評(píng)】本題

22、考查生物體的變異、遺傳定律的綜合應(yīng)用、遺傳學(xué)的探究實(shí)驗(yàn)等內(nèi)容和學(xué)生提取信息的能力，難度中等。92012江蘇32.（9分）圖1表示含有目的基因D的DNA片段長度（bp即堿基對(duì)）和部分堿基序列，圖2表示一種質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)和部分堿基序列?，F(xiàn)有Msp I、BamH I、Mbo I、Sma I4種限制性核酸內(nèi)切酶，它們識(shí)別的堿基序列和酶切位點(diǎn)分別為CCGG、GGATCC、GATC、CCCGGG。請(qǐng)回答下列問題 (1)圖1的一條脫氧核苷酸鏈中相鄰兩個(gè)堿基之間依次由 連接。(2)若用限制酶SmaI完全切割圖1中DNA片段，產(chǎn)生的末端是 末端，其產(chǎn)物長度為 。(3)若圖1中虛線方框內(nèi)的堿基對(duì)被T-A堿基對(duì)替換，那

23、么基因D就突變?yōu)榛騞。從雜合子中分離出圖1及其對(duì)應(yīng)的DNA片段，用限制酶Sma I完全切割，產(chǎn)物中共有 種不同長度的DNA片段。(4)若將圖2中質(zhì)粒和目的基因D通過同種限制酶處理后進(jìn)行連接，形成重組質(zhì)粒，那么應(yīng)選用的限制酶是 。在導(dǎo)入重組質(zhì)粒后，為了篩選出含重組質(zhì)粒的大腸桿菌，一般需要用添加 的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。經(jīng)檢測(cè)，部分含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌菌株中目的基因D不能正確表達(dá)，其最可能的原因是 ?！敬鸢浮浚?）脫氧核糖、磷酸、脫氧核糖（2）平 537bp、790bp、661bp （3）4（4）BamH = 1 * ROMAN I 抗生素B 同種限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因D與質(zhì)粒反向鏈

24、接【解析】（1）DNA單鏈中相鄰兩個(gè)堿基之間通過“脫氧核糖磷酸脫氧核糖”連接。（2）Sma = 1 * ROMAN I識(shí)別的序列為GGGCCC，切割后會(huì)產(chǎn)生平末端；圖1所示的DNA分子中含有兩個(gè)Sma = 1 * ROMAN I的識(shí)別位點(diǎn)，第一個(gè)識(shí)別位點(diǎn)在左端534bp序列向右三個(gè)堿基對(duì)的位置；第二個(gè)識(shí)別位點(diǎn)在右端658bp序列向左三個(gè)堿基對(duì)的位置，從這兩個(gè)位點(diǎn)切割后產(chǎn)生的DNA片段長度分別為534+3，796-3-3，658+3，即得到的DNA片段長度分別為537bp、790bp和661bp。（3）在雜合子體內(nèi)含有基因D和基因d，基因D的序列中含有兩個(gè)識(shí)別位點(diǎn)，經(jīng)過Sma = 1 * ROM

25、AN I完全切割會(huì)產(chǎn)生537bp、790bp和661bp三種不同長度的片段，基因d的序列中含有一個(gè)識(shí)別位點(diǎn)，經(jīng)過切割后會(huì)產(chǎn)生1327bp和 661bp兩種長度的片段，綜上，雜合子中分離到該基因的DNA片段經(jīng)過切割后會(huì)產(chǎn)生4種不同長度的片段。（4）能夠獲取目的基因并切開質(zhì)粒的限制酶有識(shí)別序列為GGATCC的BamH = 1 * ROMAN I和識(shí)別序列為GATC的Mbo = 1 * ROMAN I，若使用Mbo = 1 * ROMAN I會(huì)同時(shí)破壞質(zhì)粒中的抗生素A抗性基因和抗生素B抗性基因，所以要用BamH = 1 * ROMAN I來切割目的基因和質(zhì)粒，切割后保留了完整的抗生素B抗性基因，便于

26、篩選出含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌。因?yàn)槟康幕蚝瓦\(yùn)載體是用同種限制酶切割的，目的基因兩端的末端和質(zhì)粒切割后的兩個(gè)末端都能進(jìn)行互補(bǔ)，可能出現(xiàn)目的基因反向連接在運(yùn)載體上的情況，導(dǎo)致基因D不能正確表達(dá)。【試題點(diǎn)評(píng)】本題主要考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，主要基因工程的基本操作過程限制酶的作用、目的基因的檢測(cè)和篩選等。尤其本題中所涉及的限制酶的內(nèi)容，難度大，要求能準(zhǔn)確分析其產(chǎn)物的長度。學(xué)生必須具備很好的識(shí)圖、分析推理能力才能成功作答。102012福建32【生物現(xiàn)代生物科技專題】必答題（10分）肺細(xì)胞中的let-7基因表達(dá)減弱，癌基因RAS表達(dá)增強(qiáng)，會(huì)引發(fā)肺癌。研究人員利用基因工程技術(shù)將let-7基因?qū)敕伟┘?xì)胞實(shí)

27、現(xiàn)表達(dá)，發(fā)現(xiàn)肺癌細(xì)胞的增殖受到抑制。該基因工程技術(shù)基本流程如圖。請(qǐng)回答：（）進(jìn)行過程時(shí)，需用 酶切開載體以插入let-7基因。載體應(yīng)用RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，以驅(qū)動(dòng)let-7基因轉(zhuǎn)錄，該部位稱為 。（）進(jìn)行過程時(shí)，需用 酶處理貼附在培養(yǎng)皿壁上的細(xì)胞，以利于傳代培養(yǎng)。（）研究發(fā)現(xiàn)，let-7基因能影響癌基因RAS的表達(dá)，其影響機(jī)理如圖。據(jù)圖分析，可從細(xì)胞提取 進(jìn)行分子雜交，以直接檢測(cè)let-7基因是否轉(zhuǎn)錄。肺癌細(xì)胞增殖受到抑制，可能是由于細(xì)胞中 （RASmRNA/RAS蛋白）含量減少引起的。【答案】（10分）（1）限制性核酸內(nèi)切酶（或限制） 啟動(dòng)子（2）胰蛋白（3）RNA RAS蛋白【解析

28、】（1）過程 = 1 * GB3 表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建，在該過程中需要用限制酶對(duì)載體進(jìn)行切割以便于目的基因的插入（限制性核酸內(nèi)切酶，簡稱限制酶，寫其他的不得分）；啟動(dòng)子是一段特殊的DNA序列，是RNA聚合酶結(jié)合和識(shí)別的位點(diǎn)，RNA聚合酶結(jié)合到該位點(diǎn)，可驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)錄過程。（2）過程 = 2 * GB3 表示動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)，培養(yǎng)過程中出現(xiàn)接觸抑制后可以用胰蛋白酶處理，使之分散成單個(gè)的細(xì)胞，之后分裝到其他培養(yǎng)瓶里面進(jìn)行傳代培養(yǎng)。（3）判斷目的基因是否在受體細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄，可用分子雜交技術(shù)來進(jìn)行，從細(xì)胞中提取mRNA和用放射性同位素或者熒光標(biāo)記的目的基因單鏈DNA片段進(jìn)行雜交。根據(jù)題中信息“肺組織細(xì)胞中的le

29、t-7基因表達(dá)減弱，癌基因RAS表達(dá)就增強(qiáng)，引發(fā)肺癌”導(dǎo)入let7基因后，肺癌細(xì)胞受到抑制，說明RAS基因表達(dá)減弱，導(dǎo)致細(xì)胞中的RAS蛋白質(zhì)含量減少進(jìn)而導(dǎo)致癌細(xì)胞受抑制。【試題點(diǎn)評(píng)】本題主要考查選修3中有關(guān)基因工程和細(xì)胞工程中的知識(shí)，涉及的知識(shí)點(diǎn)主要有表達(dá)載體的構(gòu)建.目的基因的檢測(cè).動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)等。試題難度不大。112012安徽31（24分）甲型血友病是由X染色體上的隱性基因?qū)е碌倪z傳?。℉對(duì)h為顯性）。圖1中兩個(gè)家系都有血友病發(fā)病史，III2和III3婚后生下一個(gè)性染色體組成是XXY的非血友病兒子（IV2），家系中的其他成員性染色體組成均正常。 圖1（1）根據(jù)圖1， （填“能”或“不能”）確

30、定IV2兩條X染色體的來源；III4與正常女子結(jié)婚，推斷其女兒患血友病的概率是 。（2）兩個(gè)家系的甲型血友病均由凝血因子VIII（簡稱F8，即抗血友病球蛋白）基因堿基對(duì)缺失所致。為探明IV2的病因，對(duì)家系的第III、IV代成員F8基因的特異片段進(jìn)行了PCR擴(kuò)增，其產(chǎn)物電泳結(jié)果如圖2所示，結(jié)合圖I，推斷III3的基因型是 。請(qǐng)用圖解和必要的文字說明IV2非血友病XXY的形成原因。現(xiàn)III3再次懷孕，產(chǎn)前診斷顯示胎兒（IV3）細(xì)胞的染色體為46，XY；F8基因的PCR檢測(cè)結(jié)果如圖2所示。由此建議III3 。圖2（4）補(bǔ)給F8可治療甲型血友病。采用凝膠色譜法從血液中分離純化F8時(shí)，在凝膠裝填色譜柱后

31、，需要用緩沖液處理較長時(shí)間，其目的是 ；若F8比某些雜蛋白先收集到，說明F8的相對(duì)分子質(zhì)量較這些雜蛋白 。（5）利用轉(zhuǎn)基因豬乳腺生物反應(yīng)器可生產(chǎn)F8。要使乳腺細(xì)胞合成F8，構(gòu)建表達(dá)載體時(shí)，必須將F8基因cDNA與豬乳腺蛋白基因的 等調(diào)控組件重組在一起。F8基因cDNA可通過克隆篩選獲得，該cDNA比染色體上的F8基因短，原因是該cDNA沒有 。（6）為獲得更多的轉(zhuǎn)基因母豬，可以采用體細(xì)胞克隆技術(shù)，將純合轉(zhuǎn)基因母豬的體細(xì)胞核注入 ，構(gòu)成重組胚胎進(jìn)行繁殖。【答案】（1）不能 0（2）XHXh，遺傳圖解如下：說明： 2產(chǎn)生異常的XhY精子和3產(chǎn)生正常的卵細(xì)胞XH結(jié)合而成XHXhY在III3形成卵細(xì)胞

32、過程中的減數(shù)第二次分裂后期，帶有基因H的姐妹染色單體移向細(xì)胞的同一極，形成XHXH卵細(xì)胞，XHXH卵細(xì)胞與正常精子結(jié)合形成XHXHY受精卵。（3）終止妊娠。（4）洗滌平衡凝膠，并使凝膠裝填緊密 大（5）啟動(dòng)子 內(nèi)含子（6）去核的卵母細(xì)胞【解析】（1）因?yàn)?的染色體組成可能是XHXH，也可能是XHXhY，所以不能確定，4的基因型為XHY，所以后代女性中沒有患病個(gè)體。（2）由圖可知第一條帶是顯性，第二條帶是隱性，所以3基因型為XHXh，圖解如下：在III3形成卵細(xì)胞過程中的減數(shù)第二次分裂后期，帶有基因H的姐妹染色單體移向細(xì)胞的同一極，形成XHXH卵細(xì)胞，XHXH卵細(xì)胞與正常精子結(jié)合形成XHXHY受

33、精卵。（3）由題可知，IV3是血友病患者，所以建議III3終止妊娠。（4）采用凝膠色譜法從血液中分離純化F8時(shí)，在凝膠裝填色譜柱后，需要用緩沖液處理較長時(shí)間，其目的是洗滌平衡凝膠，并使凝膠裝填緊密；若F8比某些雜蛋白先收集到，說明F8的相對(duì)分子質(zhì)量較這些雜蛋白較大。（5）要使乳腺細(xì)胞合成F8，構(gòu)建表達(dá)載體時(shí)，必須將F8基因cDNA與豬乳腺蛋白基因的啟動(dòng)子和終止子等調(diào)控組件重組在一起。F8基因cDNA可通過克隆篩選獲得，該cDNA比染色體上的F8基因短，原因是該cDNA沒有內(nèi)含子。（6）為獲得更多的轉(zhuǎn)基因母豬，可以采用體細(xì)胞克隆技術(shù)，將純合轉(zhuǎn)基因母豬的體細(xì)胞核注入去核卵細(xì)胞，構(gòu)成重組胚胎進(jìn)行繁殖

34、?！驹囶}點(diǎn)評(píng)】本題考查了遺傳規(guī)律，減數(shù)分裂，血紅蛋白的提取，基因工程，胚胎工程；遺傳規(guī)律是近幾年的考查熱點(diǎn)，但每年考查的都有區(qū)別，在解遺傳題時(shí)，要記住一些常用解題方法，減數(shù)分裂的圖示是高中生物的基本技能，會(huì)畫，能理解，能夠?qū)z傳規(guī)律有個(gè)很高的認(rèn)識(shí)，遺傳實(shí)質(zhì)都體現(xiàn)在其中。至于選修部分，基因工程、胚胎工程是近幾年的考查熱點(diǎn)，而血紅蛋白的提取，是今年生物考試說明中有，意味著我們要認(rèn)真閱讀考試說明。總體來說，該題是本試卷中的難題，原因是，遺傳本身對(duì)于學(xué)生來說就難，加之選修部分題目較偏僻，從該題可以看出，安徽高考對(duì)于選修的考查，與必修部分建立了聯(lián)系，進(jìn)行了學(xué)科內(nèi)的綜合，希望學(xué)生在備考的過程中多加注意。1

35、22012北京5（6分）高中生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中，在接種時(shí)不進(jìn)行嚴(yán)格無菌操作對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響最大的一項(xiàng)是A將少許干酵母加入到新鮮的葡萄汁中B將毛霉菌液接種在切成小塊的鮮豆腐上C將轉(zhuǎn)基因植物葉片接種到無菌培養(yǎng)基上D將土壤浸出液涂布在無菌的選擇培養(yǎng)基上【答案】C【解析】植物組織培養(yǎng)中的外植體必須在嚴(yán)格的無菌環(huán)境中進(jìn)行培養(yǎng)，而且操作的各環(huán)節(jié)都要注意嚴(yán)格滅菌，必須無菌操作，C對(duì)；葡萄酒的制作原理是利用酵母菌無氧發(fā)酵時(shí)產(chǎn)生酒精，在無氧條件下，大部分微生物都不能生存，隨著發(fā)酵的進(jìn)行，酒精度增大，也有殺菌的作用；而制作腐乳時(shí)，主要是將毛霉等微生物接種在豆腐上，此過程的加鹽、加鹵湯等操作均有一定的殺菌作用；選擇培養(yǎng)基只

36、能允許目的菌生長，會(huì)抑制其他雜菌生長，因此不是嚴(yán)格無菌操作時(shí)A、B、D選項(xiàng)的情況下比C選項(xiàng)的受影響要小。【試題點(diǎn)評(píng)】本題考查對(duì)傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的應(yīng)用、微生物的培養(yǎng)和植物培養(yǎng)技術(shù)中無菌操作的掌握。重點(diǎn)要求考生熟悉相應(yīng)操作過程中的注意事項(xiàng)，這種類型的題目考查的內(nèi)容相對(duì)固定，重點(diǎn)放在細(xì)節(jié)，難度中等。132012海南31.【生物選修3：現(xiàn)代生物科技專題】（15分）.已知甲種農(nóng)作物因受到乙種昆蟲危害而減產(chǎn)，乙種昆蟲食用某種原核生物分泌的丙種蛋白質(zhì)后死亡。因此，可將丙種蛋白質(zhì)基因轉(zhuǎn)入到甲種農(nóng)作物體內(nèi)，使甲種農(nóng)作物獲得抗乙種昆蟲危害的能力?；卮鹣铝袉栴}：（1）為了獲得丙中蛋白質(zhì)的基因，在已知丙種蛋白質(zhì)氨基酸序列

37、的基礎(chǔ)上，推測(cè)出丙中蛋白質(zhì)的 序列，據(jù)此可利用 方法合成目的基因。獲得丙中蛋白質(zhì)的基因還可用 、 方法。（2）在利用上述丙中蛋白質(zhì)基因和質(zhì)粒載體構(gòu)建重組質(zhì)粒的過程中，常需使用 酶和 。（3）將含有重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌與甲種農(nóng)作物的愈傷組織共培養(yǎng)，篩選出含有丙種蛋白質(zhì)的愈傷組織，由該愈傷組織培養(yǎng)成的再生植株可抵抗 的危害。（4）若用含有重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌直接感染甲種農(nóng)作物植株葉片傷口，則該植株的種子 （填“含有”或“不含”）丙種蛋白質(zhì)基因?！敬鸢浮?15分)（1）基因化學(xué)基因文庫PCR（每空2分，共8分，其他合理答案也給分）（2）限制 DNA連接（每空1分，共2分）（3）乙種昆蟲 （2分）（4）不含（

38、3分）?！窘馕觥浚?）在已知蛋白質(zhì)的氨基酸序列的情況下，可根據(jù)氨基酸和堿基的對(duì)應(yīng)關(guān)系，推出合成該蛋白質(zhì)的基因序列，然后用DNA合成儀通過化學(xué)方法來合成目的基因。此外也可以從基因文庫中獲取目的基因，也可通過PCR方法獲取目的基因。（2）構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，需要用限制酶將運(yùn)載體切開，并用DNA連接酶將目的基因連接到運(yùn)載體上，從而構(gòu)建基因表達(dá)載體。（3）愈傷組織中含有丙蛋白，說明丙蛋白的基因得到了表達(dá)，在培養(yǎng)成的植株體內(nèi)也含有丙蛋白，乙昆蟲食用丙蛋白后會(huì)死亡，則該植株可抵抗乙昆蟲的危害。（4）直接用含有重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌直接感染甲種農(nóng)作物植株葉片傷口，僅僅在該葉片內(nèi)部分細(xì)胞中能合成丙蛋白，該植株的種子和其

39、他的營養(yǎng)器官均不含有重組質(zhì)粒，也就不含有丙中蛋白質(zhì)的基因?！驹囶}點(diǎn)評(píng)】本題以農(nóng)作物蟲害防治為背景考查基因工程的操作流程、基因工程所用的工具、獲取目的基因的方法、基因表達(dá)載體的構(gòu)建、目的基因的篩選等內(nèi)容，難度不大。142011重慶31. （16分）擬南芥是遺傳學(xué)研究的模式植物，某突變體可用于驗(yàn)證相關(guān)的基因的功能。野生型擬南芥的種皮為深褐色（TT），某突變體的種皮為黃色（tt）,下圖是利用該突變體驗(yàn)證油菜種皮顏色基因(Tn)功能的流程示意圖。（1）與擬南芥t基因的mRNA相比，若油菜Tn基因的mRNA中UGA變?yōu)?，其末端序列成為“”，則Tn比多編碼個(gè)氨基酸（起始密碼子位置相同，、為終止密碼子）。（

40、）圖中應(yīng)為。若不能在含抗生素的培養(yǎng)基上生長，則原因是 .若的種皮顏色為 ，則說明油菜 基因與擬南芥T基因的功能相同。（3）假設(shè)該油菜Tn 基因連接到擬南芥染色體并替換其中一個(gè)t基因，則中進(jìn)行減數(shù)分裂的細(xì)胞在聯(lián)會(huì)時(shí)的基因型為 ；同時(shí)，的葉片卷曲（葉片正常對(duì)葉片卷曲為顯性，且與種皮性狀獨(dú)立遺傳），用它與種皮深褐色、葉片正常的雙雜合體擬南芥雜交，其后代中所占比例最小的個(gè)體表現(xiàn)型為 ；取的莖尖培養(yǎng)成16顆植株，其性狀通常 （填“不變”或“改變”）。（4）所得的轉(zhuǎn)基因擬南芥與野生型擬南芥 （填是或者不是）同一個(gè)物種?！敬鸢浮?16分)（1）2（2）重組質(zhì)粒（重組DNA分子）；重組質(zhì)粒未導(dǎo)入；深褐色 （3

41、）TnTntt；黃色正常；黃色卷曲；不變（4）是【解析】本題以一個(gè)陌生的基因工程材料考查相關(guān)知識(shí)，包括基因的功能、遺傳規(guī)律、基因工程操作步驟以及生物進(jìn)化的物種鑒定。對(duì)題干信息的獲取、理解以及對(duì)陌生材料的快速適應(yīng)將是考生的最大障礙。（1）Ta基因的mRNA末端序列為“-AGCGCGACCAGACUCUAA”，它是t基因的mRNA的UGA變成了AGA，所以t基因的mRNA的末端序列應(yīng)為“-AGCGCGACCUGA”。所以Ta基因比t基因編碼的蛋白質(zhì)中就多AGA和CUC對(duì)應(yīng)的2個(gè)氨基酸。（2）目的基因與運(yùn)載體（質(zhì)粒）結(jié)合形成重組質(zhì)粒；質(zhì)粒上有抗生素kan抗性基因，導(dǎo)入了質(zhì)?；蛑亟M質(zhì)粒的農(nóng)桿菌都能在含

42、抗生素kan的培養(yǎng)基上生長；擬南芥T基因控制其種皮深褐色。（3）轉(zhuǎn)基因擬南芥體細(xì)胞基因型為Tat,減數(shù)分裂細(xì)胞聯(lián)會(huì)是已完成DNA復(fù)制，所以此時(shí)細(xì)胞中相應(yīng)基因組成為TaTatt；假設(shè)控制擬南芥葉片形狀的基因?yàn)锽、b，則TatbbTtBb3/8深褐色正常、3/8深褐色卷曲、1/8黃色正常、1/8黃色卷曲；植物組織培養(yǎng)屬于無性繁殖技術(shù)，其特點(diǎn)是保持親本的一切性狀。（4）轉(zhuǎn)基因擬南芥與野生型擬南芥之間沒有生殖隔離，屬于同一物種。152011江蘇14（2分）關(guān)于現(xiàn)代生物技術(shù)應(yīng)用的敘述，錯(cuò)誤的是 （ ）A蛋白質(zhì)工程可合成自然界中不存在的蛋白質(zhì)B體細(xì)胞雜交技術(shù)可用于克隆動(dòng)物和制備單克隆抗體C植物組織培養(yǎng)技術(shù)

43、可用于植物莖尖脫毒D動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)可用于轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的培育【答案】C162011江蘇33（8分）請(qǐng)回答基因工程方面的有關(guān)問題：(1)利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因，其原理與細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制類似（如下圖所示）。 圖中引物為單鏈DNA片段，它是子鏈合成延伸的基礎(chǔ)。從理論上推測(cè)，第四輪循環(huán)產(chǎn)物中含有引物A的DNA片段所占的比例為 。在第 輪循環(huán)產(chǎn)物中開始出現(xiàn)兩條脫氧核苷酸鏈等長的DNA片段。(2)設(shè)計(jì)引物是PCR技術(shù)關(guān)鍵步驟之一。某同學(xué)設(shè)計(jì)的兩組引物（只標(biāo)注了部分堿基序列）都不合理（如下圖），請(qǐng)分別說明理由。1組： ； 第2組： 。 (3) PCR反應(yīng)體系中含有熱穩(wěn)定DNA聚合酶，下面的表達(dá)式不能正確反

44、映DNA聚合酶的 功能，這是因?yàn)?。(4)用限制酶EcoRV、Mbol單獨(dú)或聯(lián)合切割同一種質(zhì)粒，得到的DNA片段長度如下圖(1 kb即1000個(gè)堿基對(duì))，請(qǐng)?jiān)诖痤}卡的指定位置畫出質(zhì)粒上EcoRV、Mbol的切割位點(diǎn)?！敬鸢浮?3（8分）(1)15/16 三(2)引物I和引物局部發(fā)生堿基互補(bǔ)配對(duì)而失效引物I自身折疊后會(huì)出現(xiàn)局部堿基互補(bǔ)配對(duì)而失效(3) DNA聚合酶只能將單個(gè)脫氧核苷酸連續(xù)結(jié)合到雙鏈DNA片段的引物鏈上(4)見右圖172011福建32. 生物-現(xiàn)代生物科技專題必答題（10分）一對(duì)表現(xiàn)型正常的夫婦，生了一個(gè)鐮刀型細(xì)胞貧血癥（常染色體隱性遺傳?。┗純?。在他們欲生育第二胎時(shí)，發(fā)現(xiàn)妻子的雙

45、側(cè)輸卵管完全堵塞，不能完成體內(nèi)受精。醫(yī)生為該夫婦實(shí)施了體外受精和產(chǎn)前基因診斷，過程如右圖。請(qǐng)回答：（1）過程是指在體外進(jìn)行的 處理，從而使精子與卵子結(jié)合形成受精卵；過程稱為 。（2）在對(duì)胎兒進(jìn)行鐮刀型細(xì)胞貧血癥的產(chǎn)前基因診斷時(shí)，要先從羊水中的胎兒細(xì)胞提取物質(zhì) 進(jìn)行PCR擴(kuò)增。然后用 Mst對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行切割，產(chǎn)生多個(gè)片段的酶切產(chǎn)物。據(jù)此判斷，Mst是一種 酶。（3）不同長度的酶切產(chǎn)物在電泳時(shí)移動(dòng)的速率不同，形成不同的電泳條帶。該家庭成員的鐮刀型細(xì)胞貧血癥基因分析的電泳帶譜如，據(jù)此判斷胎兒為 （正常/患者/攜帶者）。【答案】(10分)（1）精子獲能；胚胎移植（2）DNA；限制酶 （3）正常182

46、011北京31.（16分）T-DNA可隨機(jī)插入植物基因組內(nèi)，導(dǎo)致被插入基因發(fā)生突變。用此方法誘導(dǎo)擬南芥產(chǎn)生突變體的過程如下：種植野生型擬南芥，待植株形成花蕾時(shí)，將地上部分浸入農(nóng)桿菌（其中的T-DNA上帶有抗除草劑基因）懸浮液中以實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)化。在適宜條件下培養(yǎng)，收獲種子（稱為T1代）。（1）為促進(jìn)植株側(cè)枝發(fā)育以形成更多的花蕾，需要去除 ，因?yàn)楹笳弋a(chǎn)生的 會(huì)抑制側(cè)芽的生長。（2） 為篩選出已轉(zhuǎn)化的個(gè)體，需將T1代播種在含 的培養(yǎng)基上生長，成熟后自交，收獲種子（稱為T2代）。（3） 為篩選出具有抗鹽性狀的突變體，需將T2代播種在含 的培養(yǎng)基上，獲得所需個(gè)體。（4）經(jīng)過多代種植獲得能穩(wěn)定遺傳的抗鹽突變體。

47、為確定抗鹽性狀是否由單基因突變引起，需將該突變體與 植株進(jìn)行雜交，再自交 代后統(tǒng)計(jì)性狀分離比。（5）若上述T-DNA的插入造成了基因功能喪失，從該突變體的表現(xiàn)型可以推測(cè)野生型基因的存在導(dǎo)致植物的抗鹽性 。 （6）根據(jù)T-DNA的已知序列，利用PCR技術(shù)可以擴(kuò)增出被插入的基因片段。其過程是：提取 植株的DNA，用限制酶處理后，再用 將獲得的DNA片段連接成環(huán)（如右圖）以此為模板，從圖中A、B、C、D四種單鏈DNA片斷中選取 作為引物進(jìn)行擴(kuò)增，得到的片段將用于獲取該基因的全序列信息。【答案】(16分) （1）頂芽；生長素（2）（一定濃度的）除草劑（3）（一定濃度的）鹽（4）野生型（5）降低（6）突

48、變體； DNA連接酶； B、C192011廣東27.（16分）登革熱病毒感染蚊子后，可在蚊子唾液腺中大量繁殖。蚊子在叮咬人時(shí)將病毒傳染給人，可引起病人發(fā)熱、出血甚至休克?？茖W(xué)家擬用以下方法控制病毒的傳播。將S基因轉(zhuǎn)入蚊子體內(nèi)，使蚊子的唾液腺細(xì)胞大量表達(dá)S蛋白，該蛋白可以抑制登革熱病毒的復(fù)制。為了獲得轉(zhuǎn)基因蚊子，需要將攜帶S基因的載體導(dǎo)入蚊子的_細(xì)胞。如果轉(zhuǎn)基因成功，在轉(zhuǎn)基因蚊子體內(nèi)可檢測(cè)出_、_和_?？茖W(xué)家獲得一種顯性突變蚊子（AABB），A、B基因位于非同源染色體上，只有A基因或B基因的胚胎致死。若純合的雄蚊（AABB）與野生型雌蚊（aabb）交配，F(xiàn)1群體中A基因頻率是_，F(xiàn)2群體中A基因

49、頻率是_。將S基因分別插入到A、B基因的緊鄰位置（如圖11），將該純合的轉(zhuǎn)基因雄蚊釋放到野生型群體中，群體中蚊子體內(nèi)病毒的平均數(shù)目會(huì)逐代_，原因是_?！敬鸢浮浚?6分）（1）受精卵； S基因、由S基因轉(zhuǎn)錄的mRNA； S蛋白 （2）50%； 60% （3）減少；S基因表達(dá)的S蛋白會(huì)抑制登革熱病毒復(fù)制202011四川5.（6分）北極比目魚中有抗凍基因，其編號(hào)的抗凍蛋白具有11個(gè)氨基酸的重復(fù)序列，該序列重復(fù)次數(shù)越多，抗凍能力越強(qiáng)，下圖是獲取轉(zhuǎn)基因抗凍番茄植株的過程示意圖，有關(guān)敘述正確的是A過程獲取的目的基因，可用于基因工程和比目魚基因組測(cè)序B多個(gè)抗凍基因編碼區(qū)依次相連成能表達(dá)的新基因，不能得到抗凍

50、性增強(qiáng)的抗凍蛋白，C過程構(gòu)成的重組質(zhì)粒缺乏標(biāo)記基因，需要轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌才能進(jìn)行篩選D應(yīng)用DNA探針技術(shù)，可以檢測(cè)轉(zhuǎn)基因抗凍番茄植株中目的基因的存在及其完全表達(dá)【答案】（6分）B【解析】過程1獲得的目的基因已不含非編碼區(qū)和內(nèi)含子，因此不能用于比目魚基因組測(cè)序，因此A錯(cuò)。導(dǎo)入農(nóng)桿菌是為了擴(kuò)增和更易導(dǎo)入蕃茄細(xì)胞，C錯(cuò)。DNA探針技術(shù)不能檢測(cè)基因是否完全表達(dá)，目的基因的完全表達(dá)應(yīng)該檢測(cè)表達(dá)產(chǎn)物蛋白質(zhì)，D錯(cuò)。212011安徽31.（9分）家蠶細(xì)胞具有高效表達(dá)外源基因能力。將人干擾素基因?qū)爰倚Q細(xì)胞并大規(guī)模培養(yǎng)，可以提取干擾素用于制藥。（1）進(jìn)行轉(zhuǎn)基因操作前，需用_酶短時(shí)處理幼蠶組織，以便獲得單個(gè)細(xì)胞。（2）

51、為使干擾素基因在家蠶細(xì)胞中高效表達(dá)，需要把來自cDNA文庫的干擾素基因片段正確插入表達(dá)載體的_和_之間。（3）采用PCR技術(shù)可驗(yàn)證干擾素基因是否已經(jīng)導(dǎo)入家蠶細(xì)胞。該P(yáng)CR反應(yīng)體系的主要成分應(yīng)該包含：擴(kuò)增緩沖液（含Mg2+）、水，4種脫氧核糖苷酸、模板DNA、_和_。（4）利用生物反應(yīng)器培養(yǎng)家蠶細(xì)胞時(shí)，貼壁生長的細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生接觸抑制。通常將多孔的中空薄壁小玻璃珠放入反應(yīng)器中，這樣可以_增加培養(yǎng)的細(xì)胞數(shù)量，也有利于空氣交換?！敬鸢浮浚?分）（1）胰蛋白酶（或膠原蛋白酶）（2）啟動(dòng)子終止子（3）TaqDNA聚合酶；對(duì)干擾素基因特異性的DNA引物對(duì)（4）增大細(xì)胞貼壁生長的附著面積【解析】考查的知識(shí)點(diǎn)為動(dòng)

52、物細(xì)胞培養(yǎng)和基因工程.(1)為了使組織分散開為單個(gè)細(xì)胞通常用胰蛋白酶或膠原蛋白酶。(2)啟動(dòng)子位于目的基因的首端，終止子位于目的基因的尾端。(3)PCR反應(yīng)體系的主要成分應(yīng)擴(kuò)增緩沖液（含Mg2+）、水，4種脫氧核糖苷酸、模板DNA、TaqDNA聚合酶、兩種引物。(4)細(xì)胞離體培養(yǎng)時(shí)通常表現(xiàn)出：貼壁生長和接觸抑制，多孔的中空薄壁小玻璃珠能增大貼壁生長的附著面積，增加培養(yǎng)的細(xì)胞數(shù)量.222011山東35.（8分）【生物現(xiàn)代生物科技專題】人類疾病的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型常用于致病機(jī)理的探討及治療藥物的篩選。利用正常大鼠制備遺傳性高血壓轉(zhuǎn)基因模型大鼠的流程如圖所示。（1）卵母細(xì)胞除從活體輸卵管中采集外，還可從

53、已處死的雌鼠_中獲取。（2）圖中的高血壓相關(guān)基因作為_，質(zhì)粒作為_,二者需用_切割后連接成重組載體，該過程與質(zhì)粒上含有_有關(guān)。（3）子代大鼠如果_和_，即可分別在分子水平和個(gè)體水平上說明高血壓相關(guān)基因已成功表達(dá)，然后可用其建立高血壓轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型。（4）在上述轉(zhuǎn)基因大鼠的培育過程中，所用到的主要胚胎工程技術(shù)是_、早期胚胎培養(yǎng)和胚胎移植?！敬鸢浮浚?分）（1）卵巢（2）目的基因 運(yùn)載體 同一種限制酶 限制酶識(shí)別位點(diǎn)（3）檢測(cè)到相應(yīng)蛋白質(zhì) 出現(xiàn)高血壓（4）體外受精232011浙江6.（6分）將 ada（腺苷酸脫氨酶基因）通過質(zhì)粒pET28b導(dǎo)入大腸桿菌并成功表達(dá)腺苷酸脫氨酶。下列敘述錯(cuò)誤的是（ ）

54、A.每個(gè)大腸桿菌細(xì)胞至少含一個(gè)重細(xì)胞質(zhì)粒B.每個(gè)重組質(zhì)粒至少含一個(gè)限制性核酸內(nèi)切酶識(shí)別位點(diǎn) C.每個(gè)限制性核酸內(nèi)切酶識(shí)別位點(diǎn)至少插入一個(gè)adaD.每個(gè)插入的ada至少表達(dá)一個(gè)腺苷酸脫氨酶分子【答案】（6分）C242010山東35.（8分）【生物-現(xiàn)代生物科技專題】胚胎工程是一項(xiàng)綜合性的動(dòng)物繁育技術(shù)，可在畜牧業(yè)和制藥業(yè)等領(lǐng)域發(fā)揮重要作用。下圖是通過胚胎工程培育試管牛的過程。（1）從良種母牛采集的卵母細(xì)胞，都需要進(jìn)行體外培養(yǎng)，其目的是_；從良種公牛采集的精子需_后才能進(jìn)行受精作用。（2）在體外培養(yǎng)受精卵時(shí)，除了給予一定量的O2以維持細(xì)胞呼吸外，還需要提供_氣體以維持_。（3）圖中過程A稱為_，它在

55、胚胎工程中的意義在于_。（4）研制能夠產(chǎn)生人類白細(xì)胞介素的牛乳腺生物反應(yīng)器，需將目的的基因?qū)肱Ｊ芫?，最常用的?dǎo)入方法是_；獲得轉(zhuǎn)基因母牛后，如果_即說明目的基因已經(jīng)表達(dá)?！敬鸢浮浚?分）（1）使卵母細(xì)胞成熟（或使卵母細(xì)胞獲得受精能力）； 獲能（2）CO2 ； 培養(yǎng)液（基）的pH（3）胚胎移植 提高優(yōu)良母畜的繁殖率。（4）顯微注射法 牛奶中含有人類白細(xì)胞介素（或：牛乳腺細(xì)胞已合成人類白細(xì)胞介素）252010海南26（18分）選修模塊3：現(xiàn)代生物科技專題請(qǐng)回答胚胎工程和基因工程方面的問題：（1）應(yīng)用胚胎工程技術(shù)可以培育出“試管?！?。試管牛的培育需經(jīng)過體外受精、 、以及在母體中發(fā)育和產(chǎn)出等過程。

56、（2）在“試管?！钡呐嘤^程中，要使精子和卵母細(xì)胞在體外成功結(jié)合，需要對(duì)精子進(jìn)行處理，使其 。另外，培養(yǎng)的卵母細(xì)胞需要發(fā)育至減數(shù)第二次分裂的中期，該時(shí)期在顯微鏡下可觀察到次級(jí)卵母細(xì)胞和 。（3）通常奶牛每次排出一枚卵母細(xì)胞，采用激素處理可使其一次排出多枚卵母細(xì)胞，常使用的激素是 。（4）利用基因工程可以獲得轉(zhuǎn)基因牛，從而改良奶牛的某些性狀?；蚬こ痰乃膫€(gè)基本操作步驟是 、基因表達(dá)載體的構(gòu)建、 和 。若要獲得的轉(zhuǎn)基因牛分泌的乳汁中含有人干擾素，則所構(gòu)建的基因表達(dá)載體必須包括：某種牛乳腺分泌蛋白基因及其啟動(dòng)子、和復(fù)制原點(diǎn)等。將該基因表達(dá)載體導(dǎo)入受體細(xì)胞所采用的方法是（顯微注射法、農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法），為

57、獲得能大量產(chǎn)生人干擾素的轉(zhuǎn)基因牛，該基因表達(dá)載體應(yīng)導(dǎo)入的受體細(xì)胞是（受精卵、乳腺細(xì)胞）?！敬鸢浮浚?8分）（1）早期胚胎培養(yǎng)（1分）；胚胎移植（2分）（2）獲能；第一極體（每空1分，共2分）（3）促性腺激素（其他合理答案也給分）（2分）（4）獲取目的基因（2分）；將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞（2分）；目的基因的檢測(cè)與鑒定（2分）；人干擾素基因（或目的基因）（1分）；終止子（1分）；標(biāo)記基因（1分）；顯微注射法（1分）；受精卵（1分）262010天津7.（14分）下圖是培育表達(dá)人乳鐵蛋白的乳腺生物反應(yīng)器的技術(shù)路線。圖中tetR表示四環(huán)素抗性基因，ampR表示氨芐青霉素抗性金銀，BamHI、HindII

58、I、SmaI直線所示為三種限制酶的酶切位點(diǎn)。據(jù)圖回答：（1）圖中將人乳鐵蛋白基因插入載體，需用 限制酶同時(shí)酶切載體和人乳鐵蛋白基因。篩選含有重組載體的大腸桿菌首先需要在含 的培養(yǎng)基上進(jìn)行。（2）能使人乳鐵蛋白基因在乳腺細(xì)胞中特異性表達(dá)的調(diào)控序列是 （填字母代號(hào)）。 A.啟動(dòng)子 B. tetR C.復(fù)制原點(diǎn) D. ampR（3）過程可采用的操作方法是 （填字母代號(hào)）。A.農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 B. 大腸桿菌轉(zhuǎn)化法 C.顯微注射法 D. 細(xì)胞融合（4）過程可采用的生物技術(shù)是 。（5）對(duì)早期胚胎進(jìn)行切割，經(jīng)過程可獲得多個(gè)新個(gè)體。這利用了細(xì)胞的 性。（6）為檢測(cè)人乳鐵蛋白是否成功表達(dá)，可采用 （填字母代號(hào)）技

59、術(shù)。A.核酸分子雜交 B. 基因序列分析 C.抗原抗體雜交 D. PCR【答案】.（14分）（1）Hind和BamH；氨芐青霉素（2）A（3）C（4）胚胎移植技術(shù)（5）全能（6）C【解析】I（1）據(jù)圖，僅將人乳鐵蛋白基因切割出來，需要在人乳鐵蛋白基因的左側(cè)用BanHI切割，右側(cè)用HindIII切割。當(dāng)人乳鐵蛋白基因和質(zhì)粒連接成重組質(zhì)粒后，TETR基因被人乳鐵蛋白基因隔開，不是完整的，而anpR基因是完整的，所以篩選含有重組載體的大腸肝菌首先需要字含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上進(jìn)行。（2）基因表達(dá)的調(diào)控序列在啟動(dòng)子上。（3）將重組質(zhì)粒導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞，常采用顯微鏡的方法。（4）過程的左側(cè)是早期胚胎，右側(cè)是代

60、孕牛，過程采用的生物技術(shù)是胚胎移植。（5）將細(xì)胞培養(yǎng)為個(gè)體，利用了細(xì)胞的全能性。（6）檢測(cè)目的基因在手提細(xì)胞中是否表達(dá)，常采用抗原-抗體雜交技術(shù)。272010福建32.生物-現(xiàn)代生物科技專題（10分）紅細(xì)胞生成素（EPO）是體內(nèi)促進(jìn)紅細(xì)胞生成的一種糖蛋白，可用于治療腎衰性貧血等疾病。由于天然EPO來源極為有限，目前臨床上使用的紅細(xì)胞生成素主要來自于基因工程技術(shù)生產(chǎn)的重組人紅細(xì)胞生成素（rhEPO），其簡要生產(chǎn)流程如右圖。請(qǐng)回答：（1）圖中所指的是 技術(shù)。（2）圖中所指的物質(zhì)是 ，所指的物質(zhì)是 。（3）培養(yǎng)重組CHO細(xì)胞時(shí)，為便于清除代謝產(chǎn)物，防止細(xì)胞產(chǎn)物積累對(duì)細(xì)胞自身造成危害，應(yīng)定期更換 。（