影響免疫組化染色因素以及對策

1、關(guān)于影響免疫組化染色的因素及對策第一張，PPT共三十二頁，創(chuàng)作于2022年6月良好的免疫組化染色切片是正確判斷染色結(jié)果的基礎(chǔ)和前提。由于免疫組化染色過程中存在很多步驟或環(huán)節(jié)，每一個步驟或環(huán)節(jié)都可能影響到染色的最終結(jié)果，因此，要做好一張高質(zhì)量的免疫組化切片并不是一件非常容易的事。需要病理技術(shù)員和病理醫(yī)生密切配合、相互協(xié)調(diào)、共同努力才能保證做出合格的免疫組化切片。 第二張，PPT共三十二頁，創(chuàng)作于2022年6月一、影響免疫組化染色質(zhì)量的因素1、標(biāo)本的固定 手術(shù)標(biāo)本的及時固定是保證免疫組化染色質(zhì)量的關(guān)鍵。未能及時固定的組織，會造成細胞的變性和自溶，導(dǎo)致結(jié)構(gòu)的破壞和抗原物質(zhì)的彌散，在免疫組化染色上表現(xiàn)

2、為抗原定位的變化和背景染色的增高。 過度的固定會造成抗原決定簇的封閉和抗原的丟失。第三張，PPT共三十二頁，創(chuàng)作于2022年6月同一病例的ER表達情況ERER固定不及時固定二周后取材固定8小時后取材第四張，PPT共三十二頁，創(chuàng)作于2022年6月未及時固定的乳腺癌組織ER表達胞漿著色第五張，PPT共三十二頁，創(chuàng)作于2022年6月影響免疫組化染色質(zhì)量的因素2、切片質(zhì)量的影響 切片太厚、皺褶，刀痕，敷貼不牢固，以及脫蠟不徹底，均會影響免疫組化的染色質(zhì)量，易出現(xiàn)非特異性染色和染色不均勻。第六張，PPT共三十二頁，創(chuàng)作于2022年6月影響免疫組化染色質(zhì)量的因素3、抗原修復(fù)環(huán)節(jié)的影響 抗原修復(fù)環(huán)節(jié)在免疫組

3、化染色中是極為重要的環(huán)節(jié)。不同的修復(fù)時間、不同的修復(fù)方法、不同的抗原修復(fù)液，最終的結(jié)果會有差異。第七張，PPT共三十二頁，創(chuàng)作于2022年6月 同一蠟塊不同修復(fù)方式的結(jié)果ERHer-2(2+)Her-2(1+)微波修復(fù)水浴修復(fù)第八張，PPT共三十二頁，創(chuàng)作于2022年6月 同一蠟塊不同修復(fù)時間的結(jié)果第九張，PPT共三十二頁，創(chuàng)作于2022年6月 同一蠟塊使用不同修復(fù)液的結(jié)果Ki-67EDTA檸檬酸第十張，PPT共三十二頁，創(chuàng)作于2022年6月4、操作過程中細節(jié)問題的影響 滴加抗體未完全覆蓋組織，PBS殘留過多，操作過程中切片干燥等原因，會出現(xiàn)邊緣效應(yīng)和染色不均勻及北京染色等。第十一張，PPT共

4、三十二頁，創(chuàng)作于2022年6月抗體覆蓋組織不完全造成的邊緣效應(yīng)第十二張，PPT共三十二頁，創(chuàng)作于2022年6月抗體覆蓋不均勻的灶狀著色第十三張，PPT共三十二頁，創(chuàng)作于2022年6月影響免疫組化染色質(zhì)量的因素5、第一抗體、檢測系統(tǒng)的影響 使用不同克隆、不同種屬來源的抗體，不同的檢測系統(tǒng)，免疫組化的染色會產(chǎn)生差異。 使用三步法試劑盒（如SP法）生物素系統(tǒng)進行免疫組化染色時，如果操作不當(dāng)會產(chǎn)生較強的背景染色。第十四張，PPT共三十二頁，創(chuàng)作于2022年6月影響免疫組化染色質(zhì)量的因素6、顯色劑、復(fù)染劑的影響 不同的DAB顯色試劑盒、不同的顯色時間，會對免疫組化染色強度及級別判斷產(chǎn)生影響。 蘇木素復(fù)染

5、過深、過淺，對比都不清晰。第十五張，PPT共三十二頁，創(chuàng)作于2022年6月 DAB顯色恰當(dāng)GST-第十六張，PPT共三十二頁，創(chuàng)作于2022年6月DAB顯色恰當(dāng)CK5/6第十七張，PPT共三十二頁，創(chuàng)作于2022年6月Ki-67第十八張，PPT共三十二頁，創(chuàng)作于2022年6月胸腔積液離心包埋細胞塊的免疫組化染色TTF-1CK7第十九張，PPT共三十二頁，創(chuàng)作于2022年6月Calponin第二十張，PPT共三十二頁，創(chuàng)作于2022年6月TOPO第二十一張，PPT共三十二頁，創(chuàng)作于2022年6月CK5/6第二十二張，PPT共三十二頁，創(chuàng)作于2022年6月P63第二十三張，PPT共三十二頁，創(chuàng)作于

6、2022年6月DAB顯色適當(dāng)，蘇木素復(fù)染過淺第二十四張，PPT共三十二頁，創(chuàng)作于2022年6月二、免疫組化染色的質(zhì)量控制組織固定1、標(biāo)本在離體后應(yīng)立即浸泡于相當(dāng)于標(biāo)本體積810倍的標(biāo)準(zhǔn)固定液中，大標(biāo)本要剖開固定。離體后標(biāo)本固定前存放不得超過30分鐘。2、在實際工作中，就可操作性而言，10%的緩沖福爾馬林是兼顧保存組織形態(tài)和抗原性通行的、被廣泛接受的選擇。3、適度、適時的固定。一般而言，大標(biāo)本只要做到及時切開固定，在室溫下12小時即可達到固定要求；為了適應(yīng)免疫組化染色標(biāo)準(zhǔn)化的需要，標(biāo)本固定后應(yīng)及時取材，通常固定時間不得超過24小時。4、達到固定時間要求而不能及時進入脫水程序的標(biāo)本，建議將標(biāo)本置入

7、70%的乙醇中進行暫時保存直至進入組織脫水程序。第二十五張，PPT共三十二頁，創(chuàng)作于2022年6月免疫組化染色的質(zhì)量控制脫水及制片1、建立嚴(yán)格的組織脫水試劑規(guī)范化更換制度，保證組織處理質(zhì)量。2、切片厚度一般34m，厚薄均勻、平整，無刀痕、折疊，采用高質(zhì)量防脫載玻片。3、切片在60烤箱內(nèi)烤23小時，或者70 烤箱內(nèi)1小時。4、脫蠟要和常規(guī)切片分開，使用單獨的二甲苯，如果溫度過低或二甲苯使用次數(shù)較多，可適當(dāng)延長脫蠟時間。第二十六張，PPT共三十二頁，創(chuàng)作于2022年6月免疫組化染色的質(zhì)量控制抗原修復(fù)抗原修復(fù)的方式有多種，熱修復(fù)一般推薦高壓鍋熱修復(fù)法，但是微波修復(fù)也有其方便的一面。影響抗原修復(fù)的基本

8、因素是加熱的溫度和加熱的時間，以及所使用的修復(fù)液的PH值。需要操作者在實際工作中摸索總結(jié)，同時要根據(jù)每種抗體的具體要求，找到較適合的修復(fù)方式?？乖迯?fù)的恰當(dāng)與否，直接關(guān)系到免疫組織化學(xué)染色的成敗，進一步影響最后結(jié)果的正確判讀。第二十七張，PPT共三十二頁，創(chuàng)作于2022年6月免疫組化染色的質(zhì)量控制抗體及檢測系統(tǒng)的選擇選擇優(yōu)良的抗體和檢測試劑盒，新買抗體要進行敏感性測試，找到最佳的抗原修復(fù)條件，每次試驗要設(shè)置相應(yīng)的陽性和陰性對照。試劑的使用一定在其有效期內(nèi)，同時經(jīng)常觀察抗體使用過程中的結(jié)果變化，如不理想要及時更換。第二十八張，PPT共三十二頁，創(chuàng)作于2022年6月免疫組化染色的質(zhì)量控制顯色和復(fù)染不要忽視顯色過程，和常規(guī)染色類似，顯色不恰當(dāng)也會造成染色的前功盡棄。不同的組織、不同的抗體顯色時間有差異，必要時使用顯微鏡觀察切片的顯色效果。蘇木素復(fù)染過深過淺都會造成對比不清晰，不利于觀察評價。第二十九張，PPT共三十二頁，創(chuàng)作于2022年6月免疫組化染色的質(zhì)量控制影響免疫組化染色的因素很多。在操作中應(yīng)注重細節(jié)，避免隨意性，嚴(yán)格按照技術(shù)流程規(guī)范化操作，一個小的細節(jié)的疏忽或隨意性操作，都可能