葡聚糖的應(yīng)用

1、葡聚糖的應(yīng)用AIDS插管等侵襲性治療腫瘤和免疫抑制治療骨髓和實(shí)體器官移植廣譜抗生素治療侵襲性真菌感染率上升2嚴(yán)重真菌感染迅速上升勢頭 危重病人的存活期延長延長了真菌感染的 高 危 期使此類患者業(yè)已增加的人數(shù)進(jìn)一步擴(kuò)大醫(yī)學(xué)和相關(guān)科學(xué)的進(jìn)步是日益嚴(yán)重的威脅！3真菌感染的危險因素：中心靜脈插管尿道插管廣譜抗生素氣管插管腹部外科腸胃外營養(yǎng)營養(yǎng)不良住院時間感染之前定殖4侵襲性真菌感染條件致病性真菌念珠菌病曲霉病隱球菌病其他5診斷方法影像學(xué)組織病理學(xué)/細(xì)胞學(xué)培養(yǎng)血清學(xué)分子生物學(xué)方法： Platelia Aspergillus ELISA Fungitell assay PCRunavailable傳統(tǒng)的方

2、法6真菌病實(shí)驗室診斷主要內(nèi)容準(zhǔn)確、快速檢出真菌病原體真菌鏡檢真菌培養(yǎng)組織病理生理生化血清學(xué)方法分子生物學(xué)7鏡檢和培養(yǎng)方法敏感性低 血培養(yǎng)：在腫瘤和血液病病人中，50%尸檢證實(shí)深部念珠菌感染的病例血培養(yǎng)陰性。培養(yǎng)結(jié)果陽性僅表示存在某種真菌，區(qū)分定植和感染困難培養(yǎng)時間長有些標(biāo)本采集困難8非培養(yǎng)方法優(yōu)點(diǎn)快速報告結(jié)果敏感性提高取材簡便多以真菌在致病狀態(tài)產(chǎn)生的物質(zhì)為檢測標(biāo)志物，結(jié)果陽性提示有致病性定量檢測可判斷感染嚴(yán)重程度及療效評估9非培養(yǎng)診斷的方法簡介真菌細(xì)胞壁成分1-3 - - D-葡聚糖檢測G試驗 真菌抗原檢查半乳甘露聚糖galactomannan) 抗原GM) 甘露聚糖(mannan)抗原隱球菌

3、莢膜多糖抗原乳膠凝集試驗真菌特異的代謝產(chǎn)物D-阿拉伯糖醇真菌 DNA 的檢測10臨床診斷、擬診的微生物學(xué)1 合格痰標(biāo)本直接鏡檢發(fā)現(xiàn)菌絲，且連續(xù)培養(yǎng)2次別離到同種真菌2支氣管肺泡灌洗液 (BALF)經(jīng)直接鏡檢發(fā)現(xiàn)菌絲真菌培養(yǎng)陽性3 痰液或BALF直接鏡檢發(fā)現(xiàn)新生隱球菌4 乳膠凝集法檢測隱球菌莢膜多糖抗原陽性5 G實(shí)驗連續(xù)兩次陽性6 GM實(shí)驗連續(xù)兩次陽性11侵襲性真菌感染的診斷標(biāo)準(zhǔn)EORTC/MSG2021修訂版宿主因素臨床特征病原學(xué)真菌鏡檢真菌培養(yǎng)組織病理學(xué)檢查血清學(xué)檢查方法間接證據(jù)CSF隱球菌抗原陽性確診GM-test, G-test臨床診斷Clinical Infectious Diseas

4、es 2021; 46121,3 - - D-葡聚糖檢測13b1,6葡聚糖 磷脂雙分子層幾丁質(zhì)麥角固醇b1,3葡聚糖合成酶mannoproteins1,3真菌細(xì)胞膜、壁構(gòu)造羊毛固醇C14去甲基化酶14位復(fù)原和78位異構(gòu)酶角鯊烯環(huán)氧化酶141,3-D-葡聚糖構(gòu)造葡聚糖廣泛存在于真菌細(xì)胞壁中1,3-D-葡聚糖占真菌壁成分50%以上，是真菌細(xì)胞壁上的特有成分以1,3-糖苷鍵連接的葡萄糖殘基骨架作為主鏈以分支狀1-6-D葡萄糖殘基作為側(cè)鏈151,3-D-葡聚糖特性對熱極為穩(wěn)定，高壓121并不能使其滅活。在念珠菌和曲霉菌細(xì)胞壁中含量較多，對G實(shí)驗靈敏。當(dāng)真菌進(jìn)入人體血液或深部組織后，經(jīng)吞噬細(xì)胞的吞噬、消

5、化等處理后，(1-3)-D-葡聚糖可從胞壁中釋放出來，從而使血液及其它體液中含量增高。當(dāng)真菌在體內(nèi)含量減少時，機(jī)體免疫系統(tǒng)可將其去除。在淺部真菌感染中，(1-3)-D-葡聚糖未被釋放出來，故其在體液中的量不增高?？捎糜跈z測念珠菌、毛孢子菌、曲霉菌、鐮刀菌、卡氏肺孢子菌不可檢測隱球菌、接合菌根霉/毛霉等16“G試驗緣何而來？17 光度濁度法 動態(tài)濁度法 終點(diǎn)濁度法光度（顯色）法 動態(tài)顯色法 終點(diǎn)顯色法定量檢測1-3-D-葡聚糖的方法18 G 試 驗 的 基 本 原 理1-3-D-葡聚糖可特異性激活鱟的變形細(xì)胞裂解物中的G因子，引起裂解物發(fā)生顏色變化，故稱G試驗。（1-3）-D-GlucanTAL

6、-RM(鱟試驗非內(nèi)毒素反應(yīng)物 )G因子活化G因子凝固酶原凝固酶顯色寡肽 寡肽+顯色基團(tuán)（黃色） （光度法測定）試驗反應(yīng)機(jī)理圖：19分析前本卷須知采用無熱原采血管抽血后2h內(nèi)送檢血標(biāo)本4-8最多存放48h檢測環(huán)境應(yīng)保持清潔201,3-D-葡聚糖相關(guān)影響因素以下情況可出現(xiàn)假陽性：使用纖維素膜進(jìn)展血透，標(biāo)本或患者暴露于紗布或其他含有葡聚糖的材料；靜脈輸注免疫球蛋白、白蛋白、凝血因子或血液制品；鏈球菌血癥；操作者處理標(biāo)本時存在污染；使用多糖類抗癌藥物、放化療造成的粘膜損傷導(dǎo)致食物中的葡聚糖或定植的念珠菌經(jīng)胃腸道進(jìn)入血液等也可能造成假陽性。 211,3-D-葡聚糖檢測臨床價值早期診斷：侵襲性真菌感染增多

7、且復(fù)雜，早期病癥無特異性，往往被原發(fā)病掩蓋，病程長，發(fā)現(xiàn)較晚，死亡率高。因此對深部真菌感染治療成敗的關(guān)鍵在于早期診斷。指導(dǎo)用藥：快速確定真菌感染后，選擇好治療方案,有針對性使用抗真菌類藥物。為臨床選用副作用小，療效高，價格適宜的藥物提供準(zhǔn)確的依據(jù)。評價效果：應(yīng)用抗真菌藥物后，定期檢測血漿中葡聚糖濃度變化，評價選用藥物的有效性。監(jiān)護(hù)病程：監(jiān)護(hù)深部真菌感染易感人群的病發(fā)狀態(tài)。動態(tài)觀察：易感人群，監(jiān)測臨床療效。22曲霉菌半乳甘露聚糖GMFigure 1-10 Noncompetitive sandwich method of immunoassay23中性粒細(xì)胞減少癥患者40例 開展為曲霉菌病的高危

8、人群該研究選擇1,3-D-葡聚糖BG和半乳甘露聚糖GM兩個指標(biāo) 用于監(jiān)測中性粒細(xì)胞減少性成人曲霉菌病患者BG和GM兩項指標(biāo)均可用于指導(dǎo)臨床診斷和治療真菌性疾病, 但BG可早于GM升高. BG和GM聯(lián)合檢測用于曲霉菌病的診療, 其特異性和陽性率均為100% . 例 1結(jié)論： BG和GM聯(lián)合檢測有助于臨床鑒定血液病患者是否合并真菌感染, 并將單一試驗假陽性給診療帶來的影響降低到最小 .1,3-D-葡聚糖與循環(huán)半乳甘露聚糖的檢測比較： 用于治療和監(jiān)測中性粒細(xì)胞減少性成人曲霉菌病 24120名兒童 7月8歲1,3-D-葡聚糖定量檢測結(jié)果： 中位數(shù) 32 pg/ml 平均值 68128 pg/ml 高值

9、 5例 12歲 348 pg/ml 2歲 374 pg/ml 14歲 491 pg/ml 13歲 754 pg/ml 14歲 947 pg/ml 94例(78%) 180pg/ml例 2P.Brian Smith, Daniel K.Benjamin,Jr, etc. CLINICALAND VACCINE IMMUNOLOGY,July2007結(jié)論研究數(shù)據(jù)顯示, 安康兒童的1,3-D-葡聚糖水平高于安康成人 .該指標(biāo)用于兒童感染性疾病的診斷應(yīng)慎重, 1,3-D-葡聚糖在兒童群體的正常值區(qū)間有待進(jìn)一步研究 .兒童1,3-D-葡聚糖水平研究25收集患者82例 侵襲性真菌感染組 22例 其他真菌感

10、染組 鐮刀菌/接合菌/絲孢菌感染 17 例 念珠菌感染 23例 對照組(血液腫瘤患者非真菌感染) 20例414份血清標(biāo)本檢測GM 409份血清標(biāo)本檢測BG侵襲性曲霉菌病患者在留取血清標(biāo)本前已承受抗真菌藥物治療 (包括聚烯類、氮雜茂類、棘球白素類等)半乳甘露聚糖和1,3-D-葡聚糖用于診斷血液腫瘤患者煙曲霉菌感染敏感性較低結(jié)論 對于血液腫瘤患者合并侵襲性真菌感染的診斷, BG的敏感度優(yōu)于GM .例 326例 41,3-D-葡聚糖和抗白色念珠菌細(xì)胞壁抗原的IgG亞型抗體用于系統(tǒng)性念珠菌感染診療系統(tǒng)性念珠菌病患者 IgG亞型體液水平升高 抗細(xì)胞壁碎片IgG1抗體(IgG1-CW) 抗磷酸肽甘露聚糖片

11、段IgG2抗體(IgG2-PPM)系統(tǒng)性念珠菌病患者 IgG1-CW/ IgG2-PPM比值升高結(jié)論1,3-D-葡聚糖以及IgG1-CW、IgG2-PPM可用于早期診斷系統(tǒng)性 念珠菌病 .1,3-D-葡聚糖與IgG亞型相結(jié)合檢測可提高陽性預(yù)測值，有效指導(dǎo) 早期抗真菌藥物治療 .27血漿1,3-D葡聚糖檢測對血液病患者侵襲性真菌感染的診斷價值本研究收集疑為IFI的血液病患者血漿標(biāo)本162例,其中化療后患者85例,造血干細(xì)胞移植后患者77例。按照歐洲癌癥研究治療組織及真菌研究組(EORTC/MSG)診斷標(biāo)準(zhǔn),所有病例中有確定診斷2例,臨床診斷18例,擬診75例,排除診斷67例。結(jié)果說明:以20 n

12、g/m l為診斷界值,G試驗的敏感性、特異性、陽性預(yù)測值(PPV)和陰性預(yù)測值(NPV)分別為75%、91%、72.4%和92.4%。例 5劉芳,吳彤,等. 中國實(shí)驗血液學(xué)雜志Journal of Experimental Hematology 202128血漿1,3-D葡聚糖對深部真菌感染診斷的研究例 6趙勇,王紅,等. 中國真菌學(xué)雜志2007年8月第2卷第4期統(tǒng)計學(xué)結(jié)果提示血漿葡聚糖水平對深部真菌感染診斷的準(zhǔn)確性優(yōu)于單純依靠各種標(biāo)本真菌培養(yǎng)或真菌涂片是否陽性對深部真菌感染的判斷。AUC95%置信區(qū)間葡聚糖0.8870.795-0.979真菌培養(yǎng)0.8400.744-0.936真菌涂片0.8

13、330.738-0.927用于診斷深部真菌感染各指標(biāo)ROC曲線下面積29血清1,3-D-葡聚糖檢測在念珠菌菌血癥診斷中的價值例 7對2007年1月至2021年4月的25例念珠菌菌血癥患者、60例細(xì)菌菌血癥患者、25例念珠菌口咽定植者、20例安康體檢者的血清1,3-D-葡聚糖含量進(jìn)展比較分析。念珠菌菌血癥組的血清1,3-D-葡聚糖含量為115.242.3 ng/L,明顯高于其他各組,其他各組間的血清1,3-D-葡聚糖含量無顯著差異。結(jié)論:血清1,3-D-葡聚糖的檢測是診斷念珠菌菌血癥的有效指標(biāo)。劉英其. 中國衛(wèi)生檢驗雜志2021年9月第19卷第9期30血清1,3-D-葡聚糖檢測在念珠菌菌血癥診斷

14、中的價值例 7四組間比較:F=119.493,P0.105;念珠菌菌血癥組與細(xì)菌菌血癥組、念珠菌口咽定植組、安康體檢組的兩兩比較: P值均0.05.劉英其. 中國衛(wèi)生檢驗雜志2021年9月第19卷第9期31血漿1,3-D-葡聚糖與抗深部白色念珠菌感染藥物療效關(guān)系的實(shí)驗研究例 8李世榮,王紅,等. 臨床和實(shí)驗醫(yī)學(xué)雜志2007年第6卷第6期本文采用110只小鼠隨機(jī)分成3組,空白對照組、模型組、氟康唑組,建立深部白色念珠菌感染的動物模型。定量檢測血漿中1,3-D-葡聚糖的含量,雙腎組織勻漿液培養(yǎng)計數(shù)菌落數(shù)。用于探討深部真菌感染小鼠血漿1,3-D-葡聚糖水平與抗真菌藥物療效的關(guān)系。各處理組不同時間點(diǎn)血

15、漿1,3-D-葡聚糖的比較組別治療前治療第1天治療第3天治療第5天模型組4791.474415.995397.004640.993537.984259.212355.313663.52氟康唑組3978.093500.152976.153953.12662.601665.5417.8715.03對照組8.956.0632血漿1,3-D-葡聚糖與抗深部白色念珠菌感染藥物療效關(guān)系的實(shí)驗研究例 8李世榮,王紅,等. 臨床和實(shí)驗醫(yī)學(xué)雜志2007年第6卷第6期治療前模型組血漿(13)-D-葡聚糖水平明顯高于空白對照組,說明血漿1,3-D-葡聚糖水平異常升高可以反映深部真菌感染的存在。氟康唑組血漿1,3-D

16、-葡聚糖水平隨著治療逐漸減低,從治療第5天開場與模型組相比,血漿1,3-D-葡聚糖水平差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),說明血漿(13)-D-葡聚糖水平與氟康唑的治療呈量效關(guān)系。33天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院 病例1患者A，女性，82歲。病史：2021年8月31日外傷后，面部、左上肢疼痛、伴大小便失禁5天入院，于干部保健科承受治療。入院第一周 21222324252627入院第二周282930 1234入院第三周567891011NovDec送檢血培養(yǎng)(需氧+厭氧)需氧瓶報陽 為季也蒙假絲酵母菌無厭氧菌生長再次送檢血培養(yǎng) 結(jié)果同21日G試驗檢測: 682.6 pg/ml請感染科會診: 診斷為真菌血癥且

17、不除外真菌敗血癥給予科塞斯50mg靜滴因患者體弱給予輸入乳糜營養(yǎng)液數(shù)天科塞斯已用11天給予輸血漿200ml 改變膠體滲透壓34病例1 治療過程11月21日 送檢血培養(yǎng)(需氧+厭氧) 需氧瓶報陽 為季也蒙假絲酵母菌 無厭氧菌生長11月23日 再次送檢血培養(yǎng)(需氧+厭氧) 結(jié)果同上11月26日 請感染科會診：患者為真菌血癥 目前不除外真菌敗血癥 給予科塞斯50mg靜滴以抗真菌血癥11月29日 患者病情平穩(wěn) 無發(fā)熱寒戰(zhàn)11月30日 因患者體弱 給予輸入乳糜營養(yǎng)液數(shù)天12月2日 患者病情穩(wěn)定 未訴不適 神情 兩肺呼吸音粗 12月5日 患者稍有憋氣 有黃疸 不易喀出12月6日 患者憋氣 不能平臥12月7

18、日 患者病情如前 仍有連續(xù)憋氣不適 體溫尚可 * 與臨床醫(yī)生溝通：主治醫(yī)生考慮G試驗結(jié)果升高與輸入血漿和營養(yǎng)脂肪乳有關(guān)35天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院 病例2入院第一周 23242526272829入院第二周3031 12345入院第三周6789101112入院第四周13141516171819OctDec痰培養(yǎng):銅綠假單胞菌無真菌生長痰培養(yǎng): 粘質(zhì)沙雷菌 銅綠假單胞菌 金黃色葡萄球菌無真菌生長G試驗檢測：3280pg/ml患者B，男性，85歲。因肺炎、肺感染入院，于干部保健科承受治療。該顏色區(qū)域表示當(dāng)天給予輸入200ml血漿36病例2 治療過程10月23日 給予輸入血漿200ml10月26日 給予輸入血漿200ml10月28日 給予輸入血漿200ml* 與臨床醫(yī)生聯(lián)系，臨床暫不考慮真菌感染，疑心與輸血漿有關(guān)。11月6日 給予輸入血漿200ml11月9日 痰培養(yǎng) 結(jié)果: 銅綠假單胞菌 無真菌生長11月11日 給予輸入血漿200ml11月12日 送檢G試驗 報告結(jié)果: 3280pg/ml* 再次與臨床聯(lián)系，詢問患者臨床病癥與治療