超臨界流體色譜法在中藥有效成分提取中的應(yīng)用研究(共9頁)

1、超臨界流體(lit)色譜法在中藥(zhngyo)有效成分提取中的應(yīng)用(yngyng)研究鄭州大學(xué)網(wǎng)絡(luò)教育本科學(xué)院 孫麗芳 摘要: 綜述了近年來超臨界流體色譜法在中藥有效成分提取中的應(yīng)用, 以及該法和其它分析技術(shù)聯(lián)用測定中藥材有效成分含量的概況。目的:探討超臨界流體色譜法以及該法和其它分析技術(shù)聯(lián)用,在中藥有效成分提取中應(yīng)用，并對其含量進行測定。方法：在SFC中, 采用的流動相是CO, 由于CO極性的關(guān)系, 使SFC 的分析范圍受到了限制, 為了改變其溶劑化能力, 通常是改變壓力或流動相中添加改性劑, 最為常用的改性劑是甲醇和異丙醇,提取分析鹽酸麻黃堿、黃酮類等有效成分。在SFC與其它色譜技術(shù)的聯(lián)

2、用中，采用SF E - H PL C 法測定銀杏葉提物中總黃酮苷的含量以及在延胡索中含量的測定。結(jié)果：超臨界流體色譜在中藥有效成分的分析中起著重要的作用,是氣相色譜和液相色譜技術(shù)的重要補充。我國學(xué)者對該領(lǐng)域也作了大量的研究, 并取得了一定的成果。結(jié)論:隨著超臨界流體理論和技術(shù)的發(fā)展, 相信超臨界流體色譜在中藥的提取和有效成分的分析中會起著越來越大的作用。關(guān)鍵詞: 超臨界流體色譜 中藥 有效成分 提取分析 超臨界流體(Sup e rcr it ica l F lu id, 簡稱 SC F ) 是指溫度和壓力均在其臨界點之上的流體, 現(xiàn)研究最多的流體是CO, 臨界條件較溫和(T c= 31, P

3、c= 7. 48M P a) , 且無毒、不易燃。超臨界流體具有非凝縮性特征, 超臨界流體相對接近液體的密度使它具有較高的溶解度, 而相對接近氣體的粘度使得具有較好的流動性能, 擴散系數(shù)介于液體與氣體之間, 因此超臨界流體對所有萃取的物質(zhì)組織具有較好的滲透性。在臨界點附近壓力的很小變化都會使流體密度產(chǎn)生急劇變化, 從而引起溶解度的改變。 中藥(zhngyo)的化學(xué)成分, 尤其(yuq)是有效成分是中藥發(fā)揮藥效的物質(zhì)基礎(chǔ), 因而有效成分含量測定就成為評價中藥品質(zhì)的重要(zhngyo)標(biāo)志。中藥的質(zhì)量研究, 是保證中藥的安全、有效、可控、穩(wěn)定的重要環(huán)節(jié)。為了提高中藥材質(zhì)量, 有關(guān)部門在“七五”“八

4、五”期間將, “常用中藥材品種整理和質(zhì)量研究”列為國家重點攻關(guān)課題, 在此基礎(chǔ)上,“九五”期間又繼續(xù)立項對中藥材進行質(zhì)量標(biāo)準的規(guī)范化研究, 其目的是逐漸建立起我國中藥的標(biāo)準化、規(guī)范化質(zhì)量標(biāo)準, 爭取使其成為國際上參照執(zhí)行的標(biāo)準, 從而為中藥持續(xù)進入國際 市場創(chuàng)造條件。1、超臨界流體色譜 ( Sup e rcr it ica l f lu id ch rom a to g rap hy, 簡稱 SFC ) 超臨界流體色譜是采用超臨界流體作為流動相的一種新型分析方法 , 由于超臨界流體具有溶解能力強、流動性好、傳質(zhì)速 率快等特點, 因而它比氣相色譜(GC ) 和高效液相色譜(H PL C ) 具有

5、更多的優(yōu)點。氣相色譜主要適用于熱穩(wěn)定性好、沸點不高、分子 量小于400的化合物分析, 液相色譜則可在室溫下分析高沸點、熱不穩(wěn)定、分子量大的化合物, 但由于其檢測器的缺陷, 也使其應(yīng)用范圍受到了一定的限制。而超臨界流體色譜恰好既具備了氣相色譜的高速、高效分析性能和液相色譜的高選擇性, 且克服了上述缺陷, 它可與多種檢測器兼容, 如氫火焰離子檢測器(F ID )、紫 外光度檢測器(U V )、蒸發(fā)光散射檢測器(EL SD )、氧化還原電流 檢測器、化學(xué)發(fā)光氮氣檢測器 (CLN D )等, 還可以與質(zhì)譜(M S)、紅外光譜( IR ) 等技術(shù)連用。因此 SFC 是 GC 和H PL C 的有效補充,

6、 成為分析大分子量、難揮發(fā)、遇熱易分解物質(zhì)的有效方 法, 如脂肪酸、磷脂、甘油脂、甾類、類胡蘿卜素等。 SFC 中, 常用(chn yn)的流動相是CO, 由于(yuy)CO極性的關(guān)系(gun x), 使SFC 的分析范圍受到了限制, 為了改變其溶劑化能力, 通常是改變壓力或流動相中添加改性劑, 最為常用的改性劑是甲醇和異丙醇。如郭亞東等人研究了茶葉中咖啡因的超臨界流體色譜分析, 用超臨界流體色譜法(SFC ) 測定茶葉中的咖啡因, 在二氧化碳流動相中加入體積分數(shù)為 5% 的甲醇后, 得到了良好的分離效果, 該方法具有樣品前處理簡單, 共存組分不干擾測定, 分析速度 快等優(yōu)點, 可以用于茶葉中

7、咖啡因的快速分析。近年來, 對固定相的研究也呈上升趨勢, 如 Su to 等采用氟代烷硅膠填充柱分離鹽酸麻黃堿的研究。 劉志敏等利用(lyng) SFC 成功(chnggng)的分離了黃酮類化合物, 研究了流動相組成、柱條件、壓力及溫度的影響。發(fā)現(xiàn)流動相組成是影響分離的一個很重要(zhngyo)的因素; 其次, 色譜柱條件也是影響分離的一個很重要的因素, 并在合適的色譜條件下進行了銀杏葉提取物中黃酮類化合物的分離。趙鎖奇等建立了空白硅膠填料用于SFC 分離強極性物質(zhì)和生物堿的方法, 采用三元流動相(CO- 攜帶劑- 酸堿改性劑) 成功的分離了多羥基黃酮化合物的混合物和生物堿混合物, 探索了操作

8、溫度、壓力、攜帶劑濃度和流速對目的產(chǎn)物分離純化的純度和收率的影響。 由于 SFC 對環(huán)境污染小、分析范圍廣, 是一種理想的藥物分析手段, 可用于手性對映體的分離, 隨著毛細管 SFC 的迅速發(fā)展, SFC 應(yīng)用于手性藥物的分離研究報道也增多。 在今后SFC 的研究焦點是如何將經(jīng)典的一些填充柱應(yīng)用到 SFC 中, 添加改性劑CO的流動相以及各種檢測器的應(yīng)用以及注重一些中等極性化合物的分離。 另外(ln wi), Depta 等研制(ynzh)了采用超臨界CO作為(zuwi)流動相的逆流色譜, 該制備裝置包含了 8 個內(nèi)徑 30 mm 的高壓色譜柱, 可在最高 350 ba r、80下工作。該逆流

9、色譜裝置在 240 ba r、40下分 離葉綠醇異構(gòu)體, 均達到了 99% 以上的純度。2、超臨界流體色譜法與其它色譜技術(shù)的聯(lián)用 由于超臨界流體色譜法(Sup e rcr it ica l f lu id ex t ract io n, 簡稱 SF E ) 具有良好的選擇性, 使它在中藥有效成分的提取分離過程中發(fā)揮了較大的優(yōu)勢, 并有利于中藥有效成分的分析。分析型超臨界流體技術(shù)與其他分析技術(shù)如 GC , H PL C , GC M S, SFC , TL C , F T IR 等的聯(lián)用可用于中藥有效成分的分析。SF E 與其它分析技術(shù)的聯(lián)用有離線和在線兩種方式。離線方式較為簡單, 應(yīng)用范圍廣,

10、 如 SF E - GC M S 的聯(lián)用, 由于 SF E 技術(shù)的高選 擇性和 GC M S 技術(shù)的方便快捷, 已廣泛應(yīng)用于中藥有效成分的成分分析; 在線方式自動化程度高、定量準確快速、靈敏度高以及對強揮發(fā)性組分回收率高, 實現(xiàn)了樣品的前處理及分離分析的優(yōu)化組合, 國外對在線聯(lián)用技術(shù)方面的研究較為活躍, 在醫(yī)藥化工、環(huán)境等已有較多研究, 但國內(nèi)在這方面的研究甚少。梁延 壽等研究了 SF E - SFC 聯(lián)用在生藥分析中的應(yīng)用。SF E 與其它技術(shù)離線聯(lián)用在中藥有效成分分析中研究較多。2.1 SF E - H PL C M a rx 等建立(jinl)了快速SF E - H PL C 測定(cd

11、ng)Gua rana 中的可可(kk)堿、茶堿、兒茶素和表兒茶素的方法。Ibanez 等研究了從薄荷中提取抗氧化性物質(zhì), 并用反相高效液相色 譜法測定提取物中的含量。何首烏為蓼科植物 P oly g onum m u lti2 f lorum T hunb 的塊根, 具有滋補強壯、解毒消痛、潤腸通便等功能。何首烏含有蒽醌類, 二苯乙烯苷類及磷脂等有效成分, 其中蒽醌類是重要活性成分。袁海龍等建立了SF E - H PL C 法分離測定何首烏中的蒽醌類成分以及磷脂類成分, 為何首烏及其制 劑的質(zhì)量控制提供了方法性依據(jù)。又如延胡索 C ory d a lis y an2 h u su o W.

12、T. w ang 的有效成分為生物堿, 其中以延胡索乙素(d l-te t rahyd rop a lm a t ine) 的止痛、鎮(zhèn)靜、抗驚作用最強。原永芳等建立了 SF E - H PL C , 應(yīng)用硅膠柱- 反相洗脫系統(tǒng)的高效液相色譜法測定延胡索及其成方制劑中延胡索乙素的含量, 方法簡便、 快速、精密度高。此色譜系統(tǒng)同樣適于其他中藥及其制劑中生物堿的定量分析。余佳紅等采用 SF E - H PL C 法測定銀杏葉提物中總黃酮苷的含量, 方法簡便、快速, 重現(xiàn)性好。李迎春等人用超臨界CO流體及共溶劑乙醇萃取丹參中的3種丹參酮, 并用高效液相色譜法(H PL C ) 檢測了萃取產(chǎn)物中3種丹參

13、酮的含量。2.2 SF E - GC M S GC M S 法分析水蒸氣提餾法(SD ) 與超臨界流體(lit)色譜(s p)法(SF E ) 從百里香中提取物的化學(xué)成分, SD 法萃取(cuq)物中有55 個化合物被測定, 含單萜11個, 倍半萜12個; SF E 萃取物中有 75 個化合物被測定, 含單萜13個, 倍半萜7個。百里 香為百里香屬植物, 它的花煎劑流浸膏可以用于支氣管炎或上呼吸道疾病的防治, 也可用于神經(jīng)炎或脊神經(jīng)根炎止痛之用。此外, 臨床報道可以治療急慢性胃病。所以, 分析其化學(xué)成分對研究其藥理作用具有重要意義。陳斌等用超臨界流體萃取法聯(lián)用毛細管氣相色譜法(C GC ) 測

14、定了丹參藥材中丹參酮 IIA 的含量, 結(jié)果表明 SF E - C GC 法測定丹參藥材中丹參酮 IIA 簡便快速, 結(jié)果準確可靠。2.3 SF E - L C M S Seno ran s 等采用超臨界流體萃取技術(shù)從薄荷葉中選擇性提取具有抗氧化性的活性物質(zhì), 并用液質(zhì)測定提取物中的活性物質(zhì)。2. 4 SF E - SFC M . A sh raf- Kho ra ssan i 等采用 SF E - SFC聯(lián)用方法從醉椒根中提取并用超臨界流體色譜分析了 7 種醉椒根內(nèi)酯 ( 7, 8 - D ihyd ro kava in, Kava in, 5, 6 - D ehyd ro kava in,

15、 Yango n in, M e thy st icin, 5, 6, 7, 8 - T e t rahy sro yango n in, D ihy d rom e thy st icin )。醉椒根在南太平洋地區(qū)人們的生活中經(jīng)常使用, 它可以治療各種疾病。3、結(jié)束語 綜上所述, 超臨界流體色譜以及超臨界流體技術(shù)與其它(qt)分析技術(shù)的聯(lián)用在中藥有效成分的分析中起著重要的作用,是氣相色譜和液相色譜技術(shù)的重要補充(bchng)。我國學(xué)者對該領(lǐng)域也作了大量的研究, 并取得了一定的成果。但有關(guān)(yugun)超臨界流體的基礎(chǔ)理論還尚未深入, 且超臨界流體色譜是高壓裝置, 一次性投資較大, 限制了超臨

16、界流體技術(shù)的應(yīng)用。但隨著超臨界流體理論和技術(shù)的發(fā)展, 相信它在中藥的提取和有效成分的分析中會起著越來越大的作用。參考文獻:1馬海樂 生物資源的超臨界流體萃取M 安徽:科學(xué)技術(shù)出版社,2000: 108 121.2陳發(fā)奎 常用中草藥有效成分含量測定M 北京:人民衛(wèi)生出版社,1997: 12-12 3郭亞東 茶葉中咖啡因的超臨界流體色譜分析 J 色譜, 20024CA,133;340367b5CA,133;283440u6CA,132；142076x7劉志敏, 趙鎖奇, 王仁安等 黃酮類化合物的超臨界流體色譜分離8J. 分析化學(xué), 1997, 25 (3) : 272 275.9趙鎖奇, 石鐵磐,

17、 王仁安等 硅膠柱超臨界流體制備色譜分離極性化合物J . 西 北大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版) , 2001, 31 (3) : 229 231.10 B u rfo rd M. D , H aw thom e S. B , M ile r D J. A na ly sis o f vo la t ile11 G re ib ro kk T. A pp lica t io n s o f sup e rcr it ica l f lu id ex t ract io n in m u l梁延壽. 超臨界流體萃取- 超臨界流體色譜法聯(lián)用技術(shù)及其在生藥分析 中的應(yīng)用J. 藥物分析雜志, 1996, 16

18、(1) : 60 63. 12CA , 127: 148484x.13CA , 133: 295515k.14袁海龍, 李仙逸, 張純, 等. 超臨界流體萃取(cuq)- 高效液相色譜法測定何首烏中 磷脂成分J . 藥學(xué)(yo xu)學(xué)報, 1999, 34 (9) : 7022705. 15原永芳, 李修祿, 柳正良, 等. 超臨界流體萃取(cuq)法及高效液相色譜法分 析延胡索 中延胡索乙素的含量J. 藥學(xué)學(xué)報, 1996, 31 (4) : 2822286. 16余佳紅, 柳正良. SF E - H PL C 測定銀杏葉粗提物中黃酮類化合物的 含量J. 中草藥, 2000, 31 (2) : 1012103. 17李迎春, 曾健青, 劉莉玫, 等. 丹參中3 種丹參酮的超臨界二氧化碳萃 取及液 相色譜分析J. 色譜, 2002, 20 (