《遼寧絨山羊胚胎移植技術(shù)操作規(guī)程》編制說明

1、PAGE PAGE - 18 -遼寧絨山羊胚胎移植技術(shù)操作規(guī)程編制說明工作簡(jiǎn)介（一）任務(wù)來源 遼寧絨山羊原產(chǎn)于我省遼東南山區(qū)，有其適應(yīng)當(dāng)?shù)丨h(huán)境的生理特點(diǎn)；絨山羊胚胎移植技術(shù)還沒有省級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，尤其是操作技術(shù)方面是空白，國(guó)家行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY/T 8262004綿羊胚胎移植技術(shù)規(guī)程和NY/T 15712007羊胚胎移植技術(shù)規(guī)程偏向技術(shù)理論，可操作性不強(qiáng)；隨著生物科學(xué)技術(shù)發(fā)展胚胎移植所用試劑耗材等也有很多進(jìn)步。因此，亟待有一套絨山羊胚胎移植技術(shù)操作規(guī)程來規(guī)范當(dāng)下該技術(shù)在遼寧絨山羊的操作與應(yīng)用。2017年3月，為了促進(jìn)絨山羊選育工作和胚胎移植技術(shù)推廣應(yīng)用，畜牧業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)（遼寧）提出了制訂遼寧絨山羊胚胎

2、移植技術(shù)操作規(guī)程項(xiàng)目申請(qǐng)，我院負(fù)責(zé)規(guī)程起草制訂。2017年6月，省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局下達(dá)了地方標(biāo)準(zhǔn)制修訂計(jì)劃遼寧省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局關(guān)于下達(dá)2017年第一批遼寧省地方標(biāo)準(zhǔn)制修訂項(xiàng)目計(jì)劃的通知，計(jì)劃編號(hào)2017292。（二）協(xié)作單位標(biāo)準(zhǔn)編制單位為遼寧省畜牧科學(xué)研究院。（三）主要工作過程1.成立了標(biāo)準(zhǔn)起草組織機(jī)構(gòu)提出規(guī)程編制任務(wù)后，按照地方標(biāo)準(zhǔn)管理辦法要求，我們成立了由院領(lǐng)導(dǎo)和技術(shù)骨干人員組成規(guī)程制定項(xiàng)目小組。領(lǐng)導(dǎo)組負(fù)責(zé)規(guī)程制定的方案審定和組織協(xié)調(diào)；項(xiàng)目小組負(fù)責(zé)制定實(shí)施方案和起草規(guī)程等工作，項(xiàng)目組成員集體學(xué)習(xí)了標(biāo)準(zhǔn)制定相關(guān)知識(shí)，保證了規(guī)程制定工作的順利實(shí)施。2.查閱了相關(guān)技術(shù)資料，確定了規(guī)程框架與主要內(nèi)容

3、；開展重復(fù)試驗(yàn)，撰寫規(guī)程初稿項(xiàng)目組收集查閱了相關(guān)技術(shù)資料，包括NY/T 1571-2007羊胚胎移植技術(shù)規(guī)程、NY/T 826-2004綿羊胚胎移植技術(shù)規(guī)程、NY/T 1674-2008牛羊胚胎質(zhì)量檢測(cè)技術(shù)規(guī)程等，將這些標(biāo)準(zhǔn)中重要指標(biāo)做為重要參考，梳理出了規(guī)程框架結(jié)構(gòu)和主要內(nèi)容。2017年5月、6月和9月開展了三批次試驗(yàn)，結(jié)合2001年以來10多次試驗(yàn)，重復(fù)驗(yàn)證重要指標(biāo)、主要內(nèi)容和操作過程。10月項(xiàng)目組根據(jù)試驗(yàn)和操作撰寫了規(guī)程初稿，內(nèi)容完全按照操作流程展開，文字盡量詳細(xì)描述，附錄了計(jì)劃表、記錄表、胚胎圖片等，使規(guī)程完全展現(xiàn)操作過程，為相關(guān)科技人員提供參考、參照。3.征求意見后修改完成標(biāo)準(zhǔn)送審稿

4、2018年5月6月，標(biāo)準(zhǔn)主要起草單位遼寧省畜牧科學(xué)研究院就遼寧絨山羊胚胎移植技術(shù)操作規(guī)程（初稿），通過遼寧省畜牧獸醫(yī)局官方網(wǎng)站()向國(guó)內(nèi)各省區(qū)廣泛征求科研、教學(xué)、養(yǎng)殖生產(chǎn)等方面有關(guān)人員意見。提出意見 份共 條，我們?nèi)炕虿糠植杉{意見 條，其余不予采納，并根據(jù)采納意見，標(biāo)準(zhǔn)起草工作組對(duì)遼寧絨山羊胚胎移植技術(shù)操作規(guī)程的內(nèi)容進(jìn)行修正和補(bǔ)充；2018年 月 日形成了完整的遼寧絨山羊胚胎移植技術(shù)操作規(guī)程標(biāo)準(zhǔn)送審稿。2018年 月 日，遼寧省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局組織專家對(duì)遼寧絨山羊胚胎移植技術(shù)操作規(guī)程標(biāo)準(zhǔn)送審稿進(jìn)行了審定，專家組一致同意通過審定，并提出具體修改意見。根據(jù)會(huì)審專家審定意見，標(biāo)準(zhǔn)起草工作組對(duì)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)一

5、步修改，2018年 月 日形成遼寧絨山羊胚胎移植技術(shù)操作規(guī)程（報(bào)批稿），上報(bào)遼寧省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局，報(bào)請(qǐng)遼寧省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局作為推薦性行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，盡快頒布實(shí)施。（四）主要起草人標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：豆興堂、朱延旭、宋先忱、張興會(huì)、郭 丹、李豐田、楊文凱、王家明、全治國(guó)、丁世偉。二、標(biāo)準(zhǔn)編制原則和確定地方標(biāo)準(zhǔn)主要內(nèi)容（一）編制原則本著科學(xué)性、規(guī)范性、實(shí)用性相結(jié)合的原則，參考國(guó)內(nèi)法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)和有關(guān)文獻(xiàn)資料，結(jié)合遼寧絨山羊?qū)嶋H，科學(xué)地確定標(biāo)準(zhǔn)體系框架與主要內(nèi)容，并對(duì)其內(nèi)容進(jìn)行準(zhǔn)確、詳細(xì)、規(guī)范性描述。編寫格式符合GB/T1.12009標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫的要求。（二）主要內(nèi)容本標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容主要包括

6、范圍、規(guī)范性引用文件、術(shù)語(yǔ)和定義、羊只選擇與管理、超數(shù)排卵與同期發(fā)情、胚胎移植、術(shù)后觀察7部分。1. 范圍本規(guī)程規(guī)定了遼寧絨山羊胚胎移植技術(shù)的操作規(guī)范。本規(guī)程適用于遼寧絨山羊品種的胚胎生產(chǎn)及移植技術(shù)操作。2. 規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T 4630 遼寧絨山羊NY/T 826-2004 綿羊胚胎移植技術(shù)規(guī)程N(yùn)Y/T 1571-2007 羊胚胎移植技術(shù)規(guī)程N(yùn)Y/T 1674-2008 牛羊胚胎質(zhì)量檢測(cè)技術(shù)規(guī)程N(yùn)Y/T 2893-2016 絨山羊飼

7、養(yǎng)管理技術(shù)規(guī)范3. 術(shù)語(yǔ)和定義本條款對(duì)術(shù)語(yǔ)，遼寧絨山羊、巴氏玻璃管進(jìn)行了定義。條款內(nèi)容為：3.1遼寧絨山羊 Liaoning cashmere goat原產(chǎn)于遼寧省遼東半島山區(qū)，體表長(zhǎng)絨毛的山羊。3.2巴氏玻璃管 Pasteurized glass tube是一種兩端開口的玻璃管，通常內(nèi)徑約5毫米，管的一端拉細(xì)，內(nèi)徑較小。4. 羊只選擇與管理本條款介紹供受體母羊、種公羊選擇與飼養(yǎng)管理要點(diǎn)。條款內(nèi)容為：4.1 羊只選擇時(shí)間與數(shù)量比例胚胎移植前15 d30 d，選擇供體羊、受體羊以及種公羊。供體羊與受體羊的數(shù)量比例為156。4.2 供體羊、受體羊選擇與管理供體羊?yàn)槟挲g25周歲的經(jīng)產(chǎn)母羊，且符合遼寧

8、絨山羊GB/T 4630一級(jí)以上標(biāo)準(zhǔn)，系譜清楚準(zhǔn)確，健康無病，膘情適中，產(chǎn)羔后4個(gè)月以上，連續(xù)觀察到2個(gè)以上正常發(fā)情周期。供體超排處理前15 d內(nèi)不做免疫，單獨(dú)組群飼養(yǎng)。受體羊?yàn)槟挲g25周歲的經(jīng)產(chǎn)母山羊，健康無病，膘情適中。產(chǎn)羔3個(gè)月以上，連續(xù)觀察到2個(gè)以上正常發(fā)情周期。同期發(fā)情處理前15 d內(nèi)不做免疫，單獨(dú)組群飼養(yǎng)。供體羊與受體羊處理前15 d30 d，除按照NY/T 28932016標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)管理要求投喂飼料外，額外補(bǔ)飼胡蘿卜0.5 Kg/天只，避免應(yīng)激。4.3 種公羊選擇與管理與配種公羊年齡26周歲，符合遼寧絨山羊GB/T 4630特級(jí)以上標(biāo)準(zhǔn)，系譜清楚準(zhǔn)確。健康無病，膘情適中，性欲旺盛，

9、上一年度有繁殖記錄。種公羊配種前15 d30 d，除按照NY/T 28932016標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)管理要求投喂飼料外，需額外補(bǔ)飼胡蘿卜1 Kg/天只，雞蛋3枚5枚，適當(dāng)運(yùn)動(dòng)，配種前1周2周開始排精，3次5次/周。 4.4 試情公羊選擇與管理 年齡25周歲，性欲旺盛，健康無病，膘情適中。按照NY/T 28932016標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)管理。與供體羊、受體羊試情時(shí)，試情公羊要佩戴試情布或試情板，防止誤配。5. 超數(shù)排卵與同期發(fā)情本條款介紹了供體羊超數(shù)排卵與供受體母羊同期發(fā)情技術(shù)操作，本條款內(nèi)容為：5.1 試劑耗材供體羊超數(shù)排卵與同期發(fā)情試劑耗材：促卵泡素(FSH)、促黃體素(LH) 或促黃體素釋放激素A3（LHRH

10、-A3）、孕馬血清促性腺激素(PMSG)、氯前列烯醇(PG)、維生素A+D+E注射液等；羊用孕酮栓（CIDR）及放置槍、75%酒精棉球、0.9%生理鹽水、5mL注射器。受體羊同期發(fā)情試劑耗材：PMSG、 PG、LHRH-A3、維生素A+D+E注射液等；羊用CIDR及放置槍、75%酒精棉球、0.9%生理鹽水、5 mL注射器。5.2 供體羊處理胚胎移植一般宜在9月至11月進(jìn)行。根據(jù)超數(shù)排卵及同期發(fā)情技術(shù)操作推薦程序（附錄A），放栓時(shí)每只羊肌肉注射維生素A+D+E 2 mL3 mL。利用放置槍將CIDR栓呈水平狀態(tài)放入羊只生殖道內(nèi)，操作過程中嚴(yán)格消毒。放置CIDR栓當(dāng)天計(jì)為0天。第11 d開始每只羊

11、肌肉注射FSH 1 mL（1520 mg）/次，共8次，肌肉注射PG 0.7 mL1 mL。撤栓后12h開始公羊試情，間隔6h8h；供體羊接受試情公羊爬跨時(shí)，判定為發(fā)情，種公羊及時(shí)配種，首次配種后供體羊靜脈注射LH 50 IU100 IU或肌肉注射促黃體素釋放激素A3 2025 ug,每天配種34次，直至供體羊不接受爬跨為止。記錄供體羊發(fā)情時(shí)間及配種時(shí)間。5.3 受體羊處理與供體羊同步實(shí)施同期發(fā)情。放栓時(shí)肌肉注射維生素A+D+E 2 mL3 mL/只。按照同期發(fā)情技術(shù)程序肌肉注射PMSG 200 IU250 IU/只，撤栓。同期發(fā)情技術(shù)操作推薦程序見附錄A。6. 胚胎移植本條款介紹了胚胎移植的

12、準(zhǔn)備、供體羊胚胎沖取、揀胚與鑒定分級(jí)、胚胎移植，本條款內(nèi)容為：6.1 準(zhǔn)備工作6.1.1 胚胎操作液胚胎操作液用于胚胎沖取、揀胚、鑒定和移植等，一般選用磷酸鹽緩沖液（PBS）。PBS液可使用市售成品或自行配制，主要成份與配制方法見附錄B。6.1.2 手術(shù)器械準(zhǔn)備可升降式羊用手術(shù)車、可移動(dòng)式手術(shù)器械車、無影燈、水浴鍋。手術(shù)盤，手術(shù)刀柄與刀片，直頭及彎頭止血鉗，直頭及彎頭手術(shù)剪，持針鉗，固定鉗，剃須刀片，鑷子，中號(hào)圓針，中號(hào)棱針等器械，將上述器械用蒸餾水清洗干凈，牛皮紙包裝后， 120、30 min條件下高壓滅菌后待用；術(shù)前在0.1%新潔爾滅液中浸泡30 min，使用前用滅菌的0.9%生理鹽水沖洗

13、。6.1.3 藥品與耗材準(zhǔn)備甲硝唑注射液、青鏈霉素、碘酊（棉球）、75%酒精（棉球）、礦物油、獸用麻醉藥846合劑、獸用蘇醒藥鹽酸苯惡唑、結(jié)晶磺胺、新潔爾滅、0.9%生理鹽水；乳膠手套、手術(shù)服、口罩、鞋套、手術(shù)無菌洞巾、中號(hào)絲線、敷料、噴壺、注射器（50 mL、10 mL、5 mL、1 mL）。6.1.4 胚胎操作設(shè)備與耗材立體顯微鏡、腹腔鏡、水浴鍋、控溫加熱臺(tái)、集卵杯、35 mm培養(yǎng)皿、10#沖胚管、巴氏玻璃管、16#套管針、7#輸液器皮針、細(xì)玻-塑料管、記號(hào)筆、0.22 um濾器、微量移液槍(1 mL、200 uL)、槍頭（1 mL、200 uL）、酒精燈、75%酒精、95%酒精、面巾紙、

14、鋁飯盒、白鋼盤等。巴氏玻璃管等玻璃器具用清水洗凈后，依次采用濃硫酸中浸泡24 h、流水沖洗30 min、洗滌劑刷洗、流水沖洗1 h、蒸餾水沖洗5次、超純水沖洗5次后，放置于干燥箱中烘干，用牛皮紙包裝，120、30min條件下高壓滅菌待用；鋁飯盒、白鋼盤等依次采用流水、蒸餾水沖洗，槍頭（1 mL、200 uL）裝盒，用牛皮紙包裝，120、30min條件下高壓滅菌待用。6.2 供體羊胚胎沖取6.2.1 場(chǎng)所要求待術(shù)羊圈應(yīng)靠近準(zhǔn)備室。準(zhǔn)備室是用于手術(shù)羊只保定、剃毛、消毒等術(shù)前處理的場(chǎng)所。手術(shù)室緊挨準(zhǔn)備室，胚胎操作室以窗口與手術(shù)室相通，用于胚胎撿取、鑒定分級(jí)及裝移植管等胚胎操作。手術(shù)室與胚胎操作室術(shù)前

15、紫外線照射消毒1 h2 h，室溫保持在2025。各室間需采取物理措施隔離，術(shù)前用0.2%新潔爾滅消毒液對(duì)地面噴灑擦拭消毒。6.2.2 胚胎沖取時(shí)間供體羊于計(jì)劃周期的第17 d，對(duì)28細(xì)胞期胚胎手術(shù)沖?。辉缙谀遗哂诘?1 d沖取。6.2.3 手術(shù)準(zhǔn)備術(shù)前羊只禁食不少于24 h，可少量飲水。將羊只仰面保定于手術(shù)架上，頭下尾上，固定四肢；在乳房延向腹部長(zhǎng)約20 cm寬約15 cm為術(shù)區(qū)，用彎頭手術(shù)剪剪除術(shù)區(qū)絨毛，剃須刀片將短毛剃凈，清洗術(shù)區(qū)皮膚、晾干。每只羊按0.01 ml/kg體重肌肉注射獸用麻醉藥846合劑，待羊只頭部自然下垂時(shí)，用固定鉗將無菌洞巾四角與皮膚固定，用碘酊（棉球）對(duì)皮膚消毒，2 m

16、in3 min后75%酒精（棉球）對(duì)涂碘酊區(qū)皮膚脫碘。注射麻醉藥后，注意羊只狀況，防止口腔異物窒息。手術(shù)前用0.1%溶液浸泡3 min5 min洗手消毒，再用滅菌生理鹽水沖洗。6.2.4 手術(shù)沖胚 輸卵管沖胚在距乳房約5cm的腹中線一側(cè)，避開血管，用手術(shù)刀縱向切開皮膚長(zhǎng)約8 cm10 cm，用手術(shù)柄將皮下脂肪及腹肌分離，直至腹膜，零星出血處用敷料壓迫止血，若有血管破裂出血用直頭或彎頭止血鉗止血，敷料清創(chuàng)。輕輕將腹膜做一切口，用剪刀將腹膜剪開長(zhǎng)約5 cm8 cm左右切口；術(shù)員手部消毒后，食指及中指伸入腹腔，將子宮角拉出至創(chuàng)口外，適當(dāng)牽拉卵巢，觀察排卵情況，做好記錄。將細(xì)玻-塑料管的玻璃管端從左側(cè)

17、輸卵管傘口送入約3 cm左右，捏緊傘口與套管并固定，針另一端準(zhǔn)備用集卵杯收集沖胚的操作液。用7#輸液器皮針在宮管結(jié)合部往輸卵管傘方向30度刺入3cm左右，確定針位于輸卵管腔內(nèi)，注射器取10 mL20 mL胚胎操作液，再與輸液器皮針相連，勻速持續(xù)推注操作液，觀察液體回收情況，如遇阻力時(shí)可調(diào)整皮針或玻璃管位置；沖胚完成后皮針刺入點(diǎn)若出血需用敷料按壓止血，卵巢及輸卵管表面點(diǎn)滴少許礦物油后，送入腹腔。右側(cè)胚胎沖取同上。兩側(cè)沖取完畢后，腹腔內(nèi)注入甲硝唑液，關(guān)閉創(chuàng)口。創(chuàng)口沿腹部至乳房方向，用中號(hào)圓針、絲線連續(xù)縫合腹膜肌肉層，避免傷及腹腔內(nèi)器官；創(chuàng)口撒放適量結(jié)晶磺胺粉，用大號(hào)棱針、絲線結(jié)節(jié)縫合皮膚層，縫線間

18、距1cm左右；皮膚縫合完畢后，向其表面噴灑適量碘酊液或碘酊（棉球）消毒，3 min5 min后用75%酒精（棉球）脫碘；肌肉注射獸用蘇醒藥（鹽酸苯惡唑）0.02 mL0.04 mL/kg體重。術(shù)后羊只肌肉注射青霉素（160萬IU）及鏈霉素（100萬IU），每天2次，連續(xù)施藥3 d7 d。胚胎回收及移植記錄表見附件C。 子宮角沖胚切口操作同輸卵管沖胚。將左側(cè)子宮角拉出創(chuàng)口，調(diào)整角度位置牽拉卵巢，觀察排卵情況，做好記錄。用消毒回型針頭在左右子宮角分叉處扎一口，將10#沖胚管往輸卵管方向送入約3 cm5 cm，向球囊內(nèi)注入2 mL4 mL空氣，確認(rèn)充盈的球囊與子宮角腔完全緊實(shí)密封，沖胚管另一端與集卵

19、杯相連準(zhǔn)備接收沖胚操作液。在宮管結(jié)合部避開血管扎一口，將16#套管針套管從口往子宮方向送入約3 cm5 cm，確認(rèn)針位于子宮角腔內(nèi)，捏緊子宮角與套管并固定。注射器取50 mL胚胎操作液，與套管另一端相連，勻速持續(xù)推注操作液，觀察液體回收情況，如遇阻力時(shí)可調(diào)整針的位置，沖胚完成若有出血需先敷料按壓止血后，用35生理鹽水清洗，卵巢子與宮角表面滴礦物油，送入腹腔。右側(cè)胚胎沖取同上。其他縫合等操作同上。胚胎回收及移植記錄表見附件C。6.3 揀胚與鑒定分級(jí)6.3.1 準(zhǔn)備打開熱臺(tái)電源開關(guān)，設(shè)置溫度38.5。揀胚管可購(gòu)買市售成品，也可自制。自制撿胚管時(shí)，在火焰上拉伸巴氏玻璃管，距管肩部2 cm5 cm左右

20、火焰烘烤，使之形成30度角；斷針，斷口內(nèi)徑200 um300 um，并做鈍化處理。在3個(gè)5個(gè)35 mm培養(yǎng)皿內(nèi)分別加入2 mL胚胎操作液，做好編號(hào)標(biāo)記。6.3.2 揀胚集卵杯靜置3 min5 min，立體顯微鏡20倍率下，根據(jù)胚胎的形態(tài)、大小、折光性辨別尋找胚胎，注意集卵杯邊緣處胚胎的存在，在揀胚管中先吸入一小段胚胎操作液，再揀取胚胎，放入含胚胎操作液的35 mm皿內(nèi)，一般揀取2遍。撿取完后將胚胎在胚胎操作液中洗滌3遍，操作中要避免胚胎丟失。洗滌后進(jìn)行胚胎質(zhì)量檢查，確定胚胎級(jí)別，做好記錄。胚胎回收及移植記錄表見附錄C。6.3.3 鑒定分級(jí)立體顯微鏡2040倍率下仔細(xì)觀察，根據(jù)胚胎的大小、形態(tài)、

21、色調(diào)，卵裂球大小、數(shù)量、均勻度，液泡，游離細(xì)胞等影響胚胎發(fā)育的因素，結(jié)合獲取時(shí)的胚胎階段，綜合鑒定與分級(jí)。依據(jù)NY/T 8262004、NY/T 15712007和NT/T 16742008標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行胚胎鑒定與分級(jí)。各發(fā)育期胚胎圖例見附錄D。6.4 胚胎移植6.4.1 時(shí)間28細(xì)胞期胚胎第17 d手術(shù)移植于第15 d發(fā)情受體羊只。早期囊胚第21 d移植于第15 d發(fā)情受體羊只。術(shù)前羊只禁食12 h24 h，少量飲水。胚胎與受體母羊匹配關(guān)系見附錄E。6.4.2 器械、藥品與耗材器械、藥品與耗材和供體羊手術(shù)相同。另需黃體酮。移胚管可購(gòu)買市售成品，也可自制。自制移胚管時(shí)，可將拉制的巴氏玻璃管（見自制撿

22、胚管）另一端與乳膠管相連，乳膠管另一端與1 mL注射器相連，注意連接處要密閉。6.4.3 移植 胚胎裝移植管先吸0.2 mL空氣，吸入約0.1 mL胚胎操作液，再吸入約0.05 mL0.1 mL空氣，然后吸入含23枚胚胎的操作液0.1 mL，吸入約0.05 mL0.1 mL空氣，再吸入約0.1 mL胚胎操作液，待用。胚胎裝管方法見圖1。操作液 空氣 含胚胎操作液 空氣 操作液 空氣圖1 胚胎裝移植管方法示意圖 手術(shù)移植方法.1 輸卵管移植手術(shù)準(zhǔn)備、打開腹腔、縫合等操作同供體羊胚胎沖取手術(shù)。提拉子宮角觀察卵巢黃體情況，正常黃體為卵巢表面火山口狀紅色突起，一般將胚胎移植到黃體側(cè)，無黃體不移植；根據(jù)

23、受體羊發(fā)情時(shí)間與胚胎發(fā)育階段分級(jí)情況確定移植胚胎，一般移植2 枚3 枚，胚胎裝移植管。暴露卵巢和輸卵管傘，在傘與卵巢系膜附近尋找輸卵管口，將裝入胚胎的移胚針?biāo)腿爰s2 cm3 cm，勻力慢速推動(dòng)注射器，將胚胎送入輸卵管，并觀察輸卵管充盈狀態(tài)，未充盈則移植失敗，可重新移植。肌肉注射黃體酮15 mg25 mg，記錄黃體、胚胎情況。見附錄C。.2 子宮角移植.2.1 開腹手術(shù)法手術(shù)準(zhǔn)備、打開腹腔、縫合等操作同供體羊胚胎沖取手術(shù)。確定卵巢黃體、移植胚胎、胚胎裝移植管等操作同上。鈍型針在子宮角避開血管扎一口，將裝入胚胎的移植針?biāo)腿爰s2 cm3 cm，確認(rèn)針位于子宮角腔內(nèi)，勻力慢速推動(dòng)注射器，將胚胎送入子宮

24、角。肌肉注射黃體酮15 mg25 mg，記錄黃體、胚胎情況。見附錄C。.2.2 腹腔鏡微創(chuàng)法手術(shù)準(zhǔn)備、縫合等操作同供體羊胚胎沖取手術(shù)。距乳房3 cm5 cm，腹中線兩側(cè)3 cm5 cm，避開血管用手術(shù)刀各做1 cm2 cm切口，穿刺套管針從切口穿透肌肉、腹膜直達(dá)腹腔，取出穿刺針；另一切口用穿刺針刺入，操作同上，穿刺時(shí)要避免傷及腹內(nèi)臟器，取出穿刺針，從切口送入彎頭止血鉗，備用。打開腹腔鏡，將窺視鏡從套管送入腹腔，止血鉗配合尋找卵巢并觀察黃體情況，確定卵巢黃體、移植胚胎、胚胎裝移植管等操作同輸卵管移植。用止血鉗將子宮角牽拉至切口外，鈍型針在子宮角避開血管扎一口，將裝入胚胎的移植針?biāo)腿爰s2 cm3

25、cm，確認(rèn)針位于子宮角腔內(nèi)，勻力慢速推動(dòng)注射器，將胚胎送入子宮角。肌肉注射黃體酮15 mg25 mg，記錄黃體、胚胎情況。見附錄C。7. 術(shù)后觀察手術(shù)完成后，解除羊只四肢固定物，輕緩運(yùn)至待術(shù)羊圈，蘇醒后可站立行走，若出現(xiàn)復(fù)眠情況，可驅(qū)趕促其蘇醒。密切觀察術(shù)后羊只狀態(tài)，異常狀況對(duì)癥處理。三、主要試驗(yàn)（或驗(yàn)證）的分析報(bào)告、相關(guān)技術(shù)和經(jīng)濟(jì)影響論證、預(yù)期的社會(huì)經(jīng)濟(jì)效益按照本規(guī)程開展遼寧絨山羊優(yōu)秀種羊胚胎移植擴(kuò)繁，每只供體羊預(yù)期可獲得48只良種后代，公母比例按照11計(jì)算，可獲得24只良種種公羊和24只良種母羊，種公羊通過人工授精技術(shù)可改良上萬只低產(chǎn)絨山羊，優(yōu)秀母羊做母本可繼續(xù)實(shí)施胚胎移植擴(kuò)繁良種羊，如此循環(huán)進(jìn)行，大量增加了良種群體，縮短了絨山羊育種世代間隔，提高了育種進(jìn)程；有效穩(wěn)固了我省絨山羊種羊大省地位，同時(shí)，改良后代產(chǎn)絨量增加，促使養(yǎng)羊戶逐漸淘汰低產(chǎn)羊，緩解環(huán)境壓力，提高了養(yǎng)羊經(jīng)濟(jì)效益，引導(dǎo)市場(chǎng)供給優(yōu)良絨山羊，提高了絨山羊產(chǎn)業(yè)供給側(cè)結(jié)構(gòu)改革成效。綜上所述，本