血漿脂蛋白代謝特征、紊亂的生物化學(xué)的檢驗(yàn)要求

1、血漿脂蛋白代謝特征、紊亂的生物化學(xué)的檢驗(yàn)要求MAJOR OBJECTIVES了解脂蛋白代謝紊亂和動(dòng)脈粥樣硬化的關(guān)系。熟悉脂蛋白的特征、脂代謝有關(guān)酶類的特點(diǎn)和生理功能。掌握血漿脂類組成及脂蛋白的分類、主要載脂蛋白和脂蛋白受體的特征與功能、高脂蛋白血癥分型及其特征,血漿脂蛋白代謝紊亂的生物化學(xué)檢驗(yàn)。 重點(diǎn)血漿脂蛋白的分類和特征、高脂蛋白血癥分型及其特征血漿脂蛋白代謝紊亂的生物化學(xué)檢驗(yàn)。 難點(diǎn)血漿載脂蛋白和脂蛋白受體的特征與功能。BRIEF CONTENTS第一節(jié) 血漿脂蛋白及其代謝第二節(jié) 脂蛋白代謝紊亂第三節(jié) 脂蛋白代謝紊亂的生物化學(xué)檢驗(yàn) 第一節(jié) 血漿脂蛋白及其代謝 一、血漿脂蛋白的分類 二、血漿

2、脂蛋白的組成和特征 三、載脂蛋白的組成和特征 四、脂蛋白受體和脂蛋白結(jié)合蛋白 五、血漿脂蛋白的代謝 前言血漿脂質(zhì)總量為。 包括： 1. 膽固醇(total cholesterol，TC) 游離膽固醇 (free cholesterol，F(xiàn)C) 膽固醇酯 (cholesterol ester，CE) 2. 磷脂 (Phospholipid，PL) 3. 甘油三酯 (triacylglycerol/triglyceride，TG) 4. 游離脂肪酸 (free fatty acid，F(xiàn)FA) 脂蛋白(lipoprotein，LP)的概念 血漿中脂質(zhì)和蛋白質(zhì)相結(jié)合形成的一類大分子復(fù)合物，是血漿脂類的

3、主要存在形式與運(yùn)輸形式。絕大多數(shù)脂蛋白是在肝臟和小腸合成，并主要經(jīng)肝臟進(jìn)行分解代謝。（一）超速離心法(ULTRA CENTRIFUGATION METHOD) 依據(jù)LP在一定密度的介質(zhì)中離心時(shí)，因漂浮速率差異進(jìn)行分離的方法。蛋白質(zhì)含量較高，脂類含量較低者，密度較大。（二）電泳法(ELECTROPHORESIS METHOD) 電泳技術(shù)是基于脂蛋白分子所帶的電荷和分子量大小不同進(jìn)行分離。 一、血漿脂蛋白的分類超速離心法與電泳法分離血漿脂蛋白的相應(yīng)關(guān)系 （）（）中間密度脂蛋白(intermediate density lipoprotein, IDL)離心法和電泳法結(jié)合，可將各種脂蛋白分成多種亞組

4、分：將LDL分為L(zhǎng)DL14 ，將HDL分為HDL13。LDLA：大而輕，相當(dāng)于LDL12；LDLB：小而重，相當(dāng)于LDL34；又稱小而密LDL（small dense LDL,SLDL/SD-LDL)二、血漿脂蛋白的組成與特征 1. 化學(xué)組成相同點(diǎn)： 蛋白質(zhì)+脂類(TG、PL、FC、CE)不同點(diǎn)： (1)蛋白質(zhì)和脂類的含量不同 依蛋白質(zhì)含量：HDLLDLVLDLCM 依脂類含量：CMVLDLLDLHDL (2)蛋白質(zhì)(APO)的種類不同2. 結(jié)構(gòu)特征相同點(diǎn)：球形 表層：Apo、PL的極性部分 核心區(qū)：TG、CE和 PL的非極性部分 不同點(diǎn)：Apo在表層的覆蓋程度不同表5-1血漿脂蛋白的組成和特

5、征 富含甘油三酯的脂蛋白：CM、VLDL、CM殘粒和VLDL殘粒（IDL)富含膽固醇的脂蛋白：LDL，HDL三、載脂蛋白的組成和特征載脂蛋白(apolipoprotein，Apo)定義：脂蛋白中的蛋白部分。生理功能： （1）結(jié)合和轉(zhuǎn)運(yùn)脂質(zhì)、穩(wěn)定脂蛋白的結(jié)構(gòu)。 （2）修飾脂蛋白代謝有關(guān)的酶并影響其活性。 （3）作為脂蛋白受體的配體，參與脂蛋白與 受體的結(jié)合及代謝過程。 各種載脂蛋白的特征、分布及生理功能載脂蛋白 脂蛋白中分布 生 理 功 能 AI HDL、CM LCAT輔因子， 識(shí)別HDL受體 B100 VLDL、IDL、LDL 參與VLDL合成與分解； 識(shí)別LDL受體 B48 CM 參與CM合

6、成與分解； 運(yùn)輸外源性TG CI CM、VLDL、HDL 激活LCAT及LPL CII CM、VLDL、HDL LPL輔因子 E CM、 VLDL、IDL 、HDL 識(shí)別LDL受體 及肝ApoE受體 (a) LDL、HDL 抑制纖溶酶原活性脂蛋白受體（Lipoprotein Receptor）定義：一類位于細(xì)胞膜的糖蛋白，特異性結(jié)合脂蛋白并介導(dǎo)其進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)代謝。 作用：參與脂類代謝,調(diào)節(jié)血脂和脂蛋白水平。主要有LDL受體、清道夫受體、VLDL受體。四、脂蛋白受體和脂蛋白結(jié)合蛋白 （1）LDLR結(jié)構(gòu) 單鏈，由836個(gè)氨基酸殘基組成36面體結(jié)構(gòu)蛋白，分子量約115kD，由五種不同的區(qū)域構(gòu)成。識(shí)別并

7、結(jié)合ApoB100和/或ApoE（一） LDL受體(LDLR) 又稱ApoB-E受體Goldstein和Brown于1973年發(fā)現(xiàn)，獲1985年諾貝爾生理醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。 （3）LDLR受體的分布與性質(zhì)1.分布：廣泛分布于肝、動(dòng)脈壁平滑肌細(xì)胞、 血管內(nèi)皮細(xì)胞、 單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。2性質(zhì)(1) 配體為APOB100和APOE。 (2) LDLR與LDL親和力最高，也可結(jié)合VLDL，IDL，CM殘粒。 LDL受體途徑（LDL RECEPTOR PATHWAY） 1定義：由LDLR介導(dǎo)的、通過細(xì)胞膜吞飲作用而攝入LDL等含ApoB100、ApoE的脂蛋白的過程。 LDLR胞吞作用示意圖2.基本步驟（以攝入

8、LDL為例）： 血漿LDL+細(xì)胞膜上LDLR LDL-LDL受體復(fù)合物，并相繼形成“被膜小窩”、被膜小泡 LDLR與LDL解離，參加下一次循環(huán)；而被膜小泡與溶酶體融合后，LDL被降解: LDL入細(xì)胞被降解： APO 氨基酸 CE FFA+FC（代謝、利用） TG 甘油一酯+FFA 蛋白酶酸性酯酶 LPL3LDLR途徑的調(diào)節(jié) 主要受細(xì)胞內(nèi)FC濃度負(fù)反饋調(diào)節(jié)。若胞內(nèi)FC濃度升高 ，則 ：（1）減少細(xì)胞自身的膽固醇合成。（2）促進(jìn)FC變成CE儲(chǔ)存。（3）下調(diào)LDLR基因的表達(dá)，減少LDL 的攝取。途徑的生理意義：反饋抑制內(nèi)源性膽固醇和LDLR合成，避 免細(xì)胞CE過量堆積。受體對(duì)LDL具有高度親和力，

9、使細(xì)胞 在血漿膽固醇濃度極低條件下也能得到 所需的膽固醇。是肝清除VLDL殘粒和CM殘粒的途徑 之一。（二）VLDL受體（1）結(jié)構(gòu)與LDLR相似， 含5個(gè)結(jié)構(gòu)域；（2）分布于肝外組織（如心肌、骨骼?。?（3）配體為APOE；結(jié)合含APOE的脂蛋白， 如CM殘粒、VLDL，IDL。 （4）不受細(xì)胞內(nèi)FC濃度負(fù)反饋調(diào)節(jié)，脂蛋白的 攝取不受限制，利于巨噬細(xì)胞泡沫化，可 能促進(jìn)早期AS斑塊的形成?？赡芘c肥胖形 成有關(guān)。 1.結(jié)構(gòu) （1）糖蛋白，220KD， 三聚體。 （2）與LDLR相反，其N-末端在膜內(nèi)側(cè)，而C-末端在膜外側(cè)。已知的、型均含6個(gè)結(jié)構(gòu)域。（三）清道夫受體(scavenger rece

10、ptor, SR )2.清道夫受體的配體 （1） 主要配體：修飾的LDL，如乙?；疞DL、氧化LDL（OX-LDL）; VLDL, LDL , HDL等。 （2）其它配體 多聚鳥苷酸、多糖、 某些磷脂、細(xì)菌脂多糖（內(nèi)毒素）3.清道夫受體的功能 1. 清除細(xì)胞外液中的修飾LDL，尤其是OX-LDL，清除血管過多脂質(zhì)和病菌毒素等。（四）LDL受體相關(guān)蛋白（LRP）分布廣泛，如肝細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞。功能： 特異性結(jié)合CM殘粒、VLDL殘粒。能識(shí)別多種配體（蛋白酶一蛋白酶抑制劑、毒素的受體、某些病毒、乳鐵蛋白、ApoE等）。LRP與AS的形成有密切關(guān)系： LRP參與 LDL的氧化過程

11、，與血管損傷有關(guān)。 LRP與泡沫細(xì)胞的生成有關(guān)。（五）HDL受體和HDL結(jié)合蛋白 HDL受體（HDLR）：可特異性識(shí)別并以高親和力與HDL結(jié)合，引發(fā)下游的生物學(xué)效應(yīng)。HDL結(jié)合蛋白（HBP）：可與HDL結(jié)合，但不產(chǎn)生或只產(chǎn)生較弱的效應(yīng)。 功 能：1. 參與HDL中的CE和VLDL、CM及殘粒中TG、PL的轉(zhuǎn)移。 2. 參與HDL的形成。脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（lipid transfer protein，LTP）（六）膽固醇酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（CETP）(Cholesteryl Ester Transferase Protein)CETP對(duì)膽固醇的逆轉(zhuǎn)運(yùn)過程 五、血漿脂蛋白的代謝 （一）脂蛋白代謝相關(guān)酶脂蛋白脂

12、肪酶 (lipoprotein lipase, LPL)肝脂酶（hepatic lipase, HL） 或肝甘油三酯脂肪酶（HTGL）卵磷脂膽固醇脂酰轉(zhuǎn)移酶： (lecithin-Cholesterol acyl transferase, LCAT)來源：由脂肪細(xì)胞、心肌、骨骼肌和乳腺細(xì)胞以及巨噬細(xì)胞等合成和分泌的一種糖蛋白。生理功能： (1) 催化TG分解為FFA和甘油一酯，供組織氧 化供能和儲(chǔ)存（主）。 (2) 分解PL，如卵磷脂、磷脂酰乙醇胺。 (3) 促進(jìn)脂蛋白之間PL、Apo和Ch的轉(zhuǎn)換。 (4) 促進(jìn)CM殘粒的攝取。輔助因子：ApoC1.脂蛋白脂肪酶 (LIPOPROTEIN LI

13、PASE，LPL)2.肝脂酶（HL / HTGL） 來源：肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞，糖蛋白，53kD ApoA為HL的激活劑；被雄性激素 (+)和雌性激素、腎上腺素等 ()HL的生理功能 (1) 水解VLDL及其殘粒、CM殘粒中的TG（主） (2) 調(diào)節(jié)Ch逆轉(zhuǎn)運(yùn)； (3) 使肝內(nèi)VLDL LDL。3.卵磷脂-膽固醇?；D(zhuǎn)移酶(LCAT) (1) 肝合成，糖蛋白，含416個(gè)AA殘基，。 (2) 功能：催化HDL中的FCCE，CE進(jìn)入 HDL核心儲(chǔ)存(主要) ，參與CH逆向轉(zhuǎn)運(yùn)。 (3) 輔助因子：APOA；（二） 血漿脂蛋白代謝1.外源性代謝途徑：指食物中攝入的膽固醇和甘油三酯在小腸中合成CM及CM代謝的過

14、程 。2.內(nèi)源性代謝途徑：指肝臟合成VLDL，然后轉(zhuǎn)變?yōu)镮DL和LDL，并被肝臟或其它器官代謝的過程 的代謝 ：膽固醇的逆向轉(zhuǎn)運(yùn)HDL參與將膽固醇從外周組織運(yùn)輸?shù)礁闻K的過程。 CM代謝VLDL、IDL、LDL代謝HL3HDL代謝 肝和小腸合成未成形HDL, 繼而獲取CM、VLDL表層的PL和ApoA而變成圓盤狀的新生HDL(nascent HDL, HDLn)HDLn從末梢組織細(xì)胞膜獲得FC，經(jīng)LCAT作用生成CE進(jìn)入HDL內(nèi)部，形成成熟型HDL3。HDL3在CETP介導(dǎo)下，與VLDL、LDL交換CE/TG形成球型HDL2。HDL2中的TG經(jīng)肝臟的HL水解作用后， HDL2再變成HDL3。參與

15、脂蛋白代謝的主要生化因素1.脂蛋白受體等： HDLR、VLDLR、 LDLR、SR、LRP2. 酶：LPL、HL、LCAT3.脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白：CETP 脂蛋白代謝紊亂：高脂血癥低脂血癥低HDL血癥高HDL血癥第二節(jié) 脂蛋白代謝紊亂一、高脂血癥高脂血癥（hyperlipidemia)： 指血漿中Ch和（或）TG水平升高，是血漿中某一類或某幾類脂蛋白水平升高的表現(xiàn)。 高脂蛋白血癥(hyperlipoproteinemia)： 指血漿中CM、VLDL、LDL、HDL等脂蛋白有一種或幾種濃度過高的現(xiàn)象。黃色瘤:含有脂類的細(xì)胞在真皮或皮下組織內(nèi)聚集，常在皮膚表面形成黃色的瘤狀損害，因其顏色多為黃色、桔黃或

16、棕紅色而得名。高脂血癥的主要臨床表現(xiàn)：1.黃色瘤（脂質(zhì)在真皮內(nèi)沉積）。2.動(dòng)脈粥樣硬化（atherosclerosis,AS)原發(fā)性高脂血癥 指原因不明的高脂血癥。繼發(fā)性高脂血癥 繼發(fā)于全身系統(tǒng)性疾病，高糖或高脂、嗜酒、服用某種藥物等也可誘發(fā)高脂血癥。1.基于是否繼發(fā)于全身系統(tǒng)性疾?。ㄒ唬└咧Y的分型遺傳缺陷分類： 1. 脂蛋白合成，組成或分泌缺陷2. 載脂蛋白結(jié)構(gòu)缺陷3. 酶類缺陷： 如LPL和LCAT缺陷4. 細(xì)胞識(shí)別、內(nèi)吞和降解脂蛋白缺陷。 2. WHO分型，1970 類型 脂 蛋 白 變 化 血脂變化 I CM增加 TG TC正?；?IIa LDL增加 TG正常 TC IIb LDL

17、及VLDL增加 TG TC III IDL增加（ 寬帶 ） TG TC IV VLDL增加 TG TC 正?；?V VLDL及CM增加 TG TC低高密度脂蛋白血癥：血清HDL-C水平減低 3.簡(jiǎn)易分型高膽固醇血癥：血清TC水平增高?；旌闲透咧Y：血清TC與TG水平均增高。高甘油三酯血癥：血清TG水平增高。 高脂血癥分型的生化檢驗(yàn)依據(jù)為： (1) 血清(血漿)外觀：在4冰箱放置16HR 后的血清外觀。 (2) 血脂濃度：血清TG、TC含量 (3) 血清LP電泳圖譜：某種(些)LP含量(%) 是否升高(相應(yīng)區(qū)帶是否深染、加寬?)血清（漿）靜置試驗(yàn) 將患者空腹12h后采集靜脈血分離出血清置4冰箱

18、中過夜(16-24h)，然后觀察其分層現(xiàn)象及混濁程度。 正常空腹血清應(yīng)清澈透明。 高HDL血癥定義：血漿HDL-膽固醇（HDL-C）含量超過。主要病因：CETP及HL活性降低。CETP缺陷，HDL的CE蓄積，HDL增多；HTGL活性降低，HDL2HDL3轉(zhuǎn)換過程減慢，HDL被肝細(xì)胞攝取減少，濃度增加。分兩類：原發(fā)性、繼發(fā)性二、低脂蛋白血癥(自學(xué)） 診斷（滿足下面三項(xiàng)之一） 血清病因原發(fā)性：ApoA缺乏或變異、LCAT缺乏 癥、無-脂蛋白血癥（Tangier病）、無-脂蛋白血癥、低-脂蛋白血癥等。 繼發(fā)性：內(nèi)分泌疾病 三、脂代謝紊亂與動(dòng)脈粥樣硬化動(dòng)脈粥樣硬化（atherosclerosis，AS

19、）： 指動(dòng)脈內(nèi)膜的脂質(zhì)、血液成分的沉積，平滑肌細(xì)胞及膠原纖維增生，伴有壞死及鈣化等不同程度病變的一類慢性進(jìn)行性病理過程。AS主要損傷動(dòng)脈壁的內(nèi)膜，嚴(yán)重時(shí)累及中膜。引發(fā)冠心病、缺血性腦卒中.冠心病的主要危險(xiǎn)因素高血壓年齡冠心病家族史血脂紊亂吸煙糖尿病不可改變的可改變的NCEP. Circulation 1994;89:13291445. Eur Heart J 1994;15:13001331.Wood D et al. Eur Heart J 1998;19:14341503.冠心病(一) 脂蛋白殘粒 CM殘粒與VLDL殘粒（IDL） 凡能增加動(dòng)脈壁Ch內(nèi)流和沉積的脂蛋白如LDL、-VLDL、

20、ox-LDL等，都是導(dǎo)致AS的因素。一、致動(dòng)脈粥樣硬化的脂蛋白 (二) 變性的LDL定義：LDL的蛋白組分經(jīng)化學(xué)修飾，其正常的立體構(gòu)像發(fā)生改變，生物學(xué)活性也有相應(yīng)的變化，這種經(jīng)化學(xué)修飾的LDL稱為變性LDL或修飾LDL .主要包括乙酰LDL、氧化LDL（ox-LDL）和糖化LDL。通過SR途徑清除，使巨噬細(xì)胞內(nèi)Ch大量堆積形成泡沫細(xì)胞。ox-LDL對(duì)單核細(xì)胞有趨化作用；促使凝血酶形成，引起血小板聚集，血栓形成。(三) B型LDL（小而密LDL ，SLDL ）LDL中TG被水解，LDL便轉(zhuǎn)化為sLDL。富含TG的sLDL顆粒較小，與LDLR親和力較低，在血漿中停留時(shí)間較長(zhǎng)，有更多機(jī)會(huì)進(jìn)入動(dòng)脈內(nèi)膜

21、下。內(nèi)膜下的sLDL比大而輕的LDL更易被氧化而促進(jìn)泡沫細(xì)胞形成。(四) LP(A)與ASLp(a)是AS的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。apo(a)與纖溶酶原競(jìng)爭(zhēng)性抑制與內(nèi)皮細(xì)胞表面結(jié)合，有助于血栓形成。早期病損中，與纖溶酶原競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合纖維蛋白并聚集陷入病損區(qū)栓子中；絕大部分與病損部位緊密結(jié)合，增加局部膽固醇的沉積；與動(dòng)脈壁平滑肌細(xì)胞糖胺聚糖結(jié)合，促進(jìn)巨噬細(xì)胞吞噬膽固醇。二、抗動(dòng)脈粥樣硬化的脂蛋白血漿HDL水平與AS性心腦血管疾病的發(fā)病率呈明顯負(fù)相關(guān)：血漿HDL-C每下降，冠心病事件的相對(duì)危險(xiǎn)性增加2%3%。抗氧化，抑制內(nèi)膜下ox-LDL生成；抑制單核細(xì)胞粘附；誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞NO的合成，減輕AS早期不正常的血

22、管收縮；第三節(jié) 脂蛋白代謝紊亂的生物化學(xué)檢驗(yàn)一、血漿脂質(zhì)測(cè)定二、血漿脂蛋白測(cè)定三、血漿載脂蛋白測(cè)定四、血漿脂代謝相關(guān)酶的測(cè)定五、脂質(zhì)相關(guān)蛋白基因突變分析六、血脂和脂蛋白檢測(cè)的臨床應(yīng)用 一、血漿脂質(zhì)測(cè)定（一）TG測(cè)定 1化學(xué)法 2酶法測(cè)定 （二）TC測(cè)定 1化學(xué)法 2酶法測(cè)定 （三）FFA測(cè)定（四）磷脂測(cè)定 標(biāo)本采集空腹12hr后采血，72hr不飲酒，否則檢測(cè)結(jié)果升高；及時(shí)分離出血漿（清）標(biāo)本，以免紅細(xì)胞膜PL分解產(chǎn)生FG，或者抗凝劑存在導(dǎo)致血漿稀釋而影響檢測(cè)結(jié)果；（一） 血清（漿）甘油三酯測(cè)定基本操作：1.化學(xué)測(cè)定法TG的抽提分離（有機(jī)溶劑）：提取和純化TG；皂化：TG水解生成甘油；多采用KO

23、H作皂化劑。氧化：過碘酸在酸性溶液中將甘油氧化成甲醛和甲酸。顯色定量甲醛。4、顯色：甲醛的定量主要有兩種方法：甲醛與變色酸在硫酸溶液中加熱生成紫色化合物，570nm測(cè)定吸光度。靈敏度高，顏色穩(wěn)定。甲醛與乙酰丙酮反應(yīng)生成黃色的二乙酰二氫二甲基吡啶，412nm測(cè)定吸光度。2酶 法 測(cè) 定 （1）磷酸甘油氧化酶法（GPO-PAP法）評(píng)價(jià)：操作簡(jiǎn)便，快速準(zhǔn)確，適合自動(dòng)化分析，線性范圍較寬。 所測(cè)結(jié)果包括了血清中FG，如何解決？去除FG干擾可用下列方法：1.外空白法：同時(shí)用不含LPL的酶試劑測(cè)定FG作空白。需做雙份檢測(cè)，成本加倍。2.內(nèi)空白法：又稱兩步法或雙試劑法 將LPL和4-AAP組成試劑2，其余部

24、分為試劑1，為中華醫(yī)學(xué)會(huì)檢驗(yàn)分會(huì)推薦方法。 血清TG一般隨年齡增加而升高，體重超過標(biāo)準(zhǔn)者往往偏高。 血清TG參考范圍： 成人 合適范圍：； 升高：。 【參考值】【臨床意義】 原發(fā)性高TG血癥:多有遺傳因素,如家族性高TG血癥； 繼發(fā)性高TG血癥:DM、糖原累積病、甲減、腎綜、妊娠、口服避孕藥、酗酒等。富含TG脂蛋白是CHD的獨(dú)立的危險(xiǎn)因子。TG增加表明患者存在MS，需治療。TG降低較少見，見于甲亢、腎上腺皮質(zhì)功能減退和肝功能嚴(yán)重?fù)p傷。 （二）血清（漿）總膽固醇測(cè)定化學(xué)法酶法血清中膽固醇：CE占70；FC占301化學(xué)比色法 四個(gè)階段：抽提；皂化；毛地黃皂苷沉淀純化；顯色比色。代表性的方法： （1

25、）硫磷鐵法（Bowman法）：用無水乙醇沉淀蛋白質(zhì)，提取Ch，提取液中加硫磷鐵試劑顯色。 （2）Abell法：血清中加入氫氧化鈉乙醇溶液，使CE皂化為FC；加入正己烷-水提取后，F(xiàn)C進(jìn)入正己烷相，以醋酐-硫酸試劑顯色定量。國際公認(rèn)的參考方法。2.酶法測(cè)定特點(diǎn)：常規(guī)方法；特異性好，精密度和靈敏度達(dá)臨床實(shí)驗(yàn)室的要求；適合手工操作和自動(dòng)分析；出現(xiàn)了不同程度的基質(zhì)效應(yīng)。 測(cè)定血清TC的常規(guī)方法：膽固醇氧化酶過氧化物酶4氨基安替比林酚法（COD-PAP法） CHER：膽固醇酯酶，COD: 膽固醇氧化酶原理： CEH2O FCFFA FCO2 4-膽甾烯酮H2O2 H2O24-AAP酚 醌亞胺H2O 方法

26、學(xué)評(píng)價(jià)：主要缺點(diǎn)是：優(yōu)點(diǎn)：靈敏度高、準(zhǔn)確度高、精密度好，線性范圍寬。某些CHER對(duì)CE的水解不完全，不能用純膽固醇結(jié)晶配制的溶液作為TC分析的校準(zhǔn)液，而應(yīng)以準(zhǔn)確定值的血清作為標(biāo)準(zhǔn)。 表面活性劑，吐溫-40可以干擾CHER的作用，而聚乙烯醇6000可使結(jié)果提高12。表面活性劑的作用：促進(jìn)Ch從脂蛋白中釋放出來。本法具有氧化酶反應(yīng)途徑的共同缺陷，易受到一些還原性物質(zhì)如尿酸、膽紅素、維生素C和谷胱甘肽等的干擾。 【參考值】血清TC參考范圍： 成人 （110mg/dl220mg/dl）合適范圍：邊緣升高：升高：影響TC水平的因素 年齡與性別；長(zhǎng)期的高膽固醇、高飽和脂肪酸和高熱量飲食可使TC增高；遺傳因

27、素； 其它：缺少運(yùn)動(dòng)、腦力勞動(dòng)、精神緊張等可能使TC升高。 TC除了作為高膽固醇血癥的診斷指標(biāo)之外，不能作為其它任何疾病的診斷指標(biāo)。 TC與冠心病的發(fā)病率呈正相關(guān). TC升高：各種高脂蛋白血癥、梗阻性黃疸、腎病綜合征、甲低、慢性腎衰、糖尿病等。此外，吸煙、飲酒、緊張、血液濃縮等也可使TC升高。 TC降低：各種脂蛋白缺陷狀態(tài)、肝硬化、惡性腫瘤、營(yíng)養(yǎng)不良、巨細(xì)胞性貧血等。 【臨床意義】（三）FFA測(cè)定 (自學(xué))血濃度很低，成人；兒童和肥胖成人稍高。受脂代謝、糖代謝和內(nèi)分泌功能等因素影響。半壽期為1min2min。血清中的FFA是與清蛋白結(jié)合進(jìn)行運(yùn)輸。 FFA測(cè)定標(biāo)本：4分離和測(cè)定血清。貯存的標(biāo)本僅

28、限于24hr內(nèi)。因血中各種脂肪酶易使血中TG和PL分解成FFA，使血中FFA上升。血清FFA測(cè)定方法： 1非酶法測(cè)定 包括滴定法、比色法、原子吸收分光光度法和高效液相層析法。前三種方法準(zhǔn)確性差，高效液相層析法儀器太昂貴，不便于批量操作。 2酶測(cè)定法 主要用脂肪酶測(cè)定?？煞謩e定量測(cè)定產(chǎn)物乙酰CoA、AMP或輔酶A。結(jié)果準(zhǔn)確可靠快速，易于批量檢測(cè)。（四）磷脂測(cè)定(自學(xué))血清中PL包括： 卵磷脂(60)和溶血卵磷脂(210)； 磷脂酰乙醇胺 (2)； 鞘磷脂(20)。血清PL定量方法: 1化學(xué)測(cè)定法 抽提分離；灰化； 顯色定量。 2酶測(cè)定法 利用磷脂酶分解測(cè)定其產(chǎn)物進(jìn)行定量，多采用磷脂酶D(PL-D

29、)。該法快速準(zhǔn)確，便于自動(dòng)化批量檢測(cè)。二、血漿脂蛋白測(cè)定（一）電泳法（二）超速離心法（三）脂蛋白膽固醇測(cè)定 1沉淀分離法 2均相測(cè)定法 3間接法 （四）Lp(a)測(cè)定（一）電泳法原理：不同脂蛋白因蛋白質(zhì)含量不同、其電荷量不同，故可用電泳方法進(jìn)行分離，并根據(jù)血漿脂蛋白電泳遷移率不同予以判斷確認(rèn)。方法：分為預(yù)染法和電泳后染色法兩大類。 預(yù)染法：操作較簡(jiǎn)單，分離效果直觀。 將待測(cè)血清和蘇丹黑染料按一定比例混合進(jìn)行預(yù)染處理，離心后取上清液進(jìn)行電泳分析。 電泳后染色法：用電泳方法先將血漿脂蛋白各成份分開，再用蘇丹黑或油紅O進(jìn)行染色。 預(yù)染法： （1）預(yù)染、電泳: 親脂染料如蘇丹黑B等進(jìn)行預(yù)染再電泳； （

30、2）掃描、計(jì)算：置于光密度計(jì)內(nèi)進(jìn)行掃描，計(jì)算出各種脂蛋白的百分比，該數(shù)值乘以血漿總脂量，即可求出-脂蛋白、-脂蛋白和前-脂蛋白含量。電泳支持物 ： 醋酸纖維薄膜、瓊脂糖凝膠或聚丙烯酰胺凝膠。血清脂蛋白瓊脂糖凝膠電泳：正常參考值(百分比)：-脂蛋白 25.7%4.1%前-脂蛋白 21.0%4.4%-脂蛋白 53.3%5.3%乳糜微粒：陰性?！緟⒖贾怠浚ㄈ┭獫{脂蛋白膽固醇測(cè)定脂蛋白中膽固醇含量較為穩(wěn)定，因此目前以測(cè)定脂蛋白中膽固醇總量的方法作為脂蛋白的定量依據(jù)。高密度脂蛋白-膽固醇(HDL-C)低密度脂蛋白-膽固醇(LDL-C)極低密度脂蛋白-膽固醇(VLDL-C)1. 沉淀分離法原理：在不同p

31、H值條件下，脂蛋白與聚陰離子、2價(jià)金屬離子(Mn2+，Mg2+、Ca2+、Ni2+、Co2+)結(jié)合形成復(fù)合物沉淀，以達(dá)到分離定量各種脂蛋白的目的。方法： （1）肝素-錳 沉淀血清中VLDL和LDL，離心沉淀，HDL則留在上清液，再定量HDL-C量。 （2）聚乙烯硫酸鹽 沉淀LDL，離心去上清液留沉淀。再定量沉淀其中的LDL-C，即血漿的LDL量。 （3） 磷鎢酸-鎂法 常規(guī)方法 評(píng)價(jià)：操作簡(jiǎn)單，無需昂貴的儀器，是臨床應(yīng)用的檢測(cè)方法。 2均相測(cè)定法（1）HDL-C測(cè)定 原理：利用脂蛋白與表面活性劑的親和性差異進(jìn)行測(cè)定。CM、VLDL、LDL在多聚陰離子存在下與試劑發(fā)生凝集形成遮蔽圈，抑制其表面的

32、FC反應(yīng)或試劑與CM、VLDL、LDL中的Ch反應(yīng)生成H2O2，并將H2O2清除；試劑與HDL形成可溶性復(fù)合體，使HDL中的膽固醇直接與酶試劑反應(yīng)。 血清HDL-C參考范圍： 成年男性 （ 45mg/dl 55 mg/dl） 女性 1.29mmol/L 1.55 mmol/L （50mg/dl60mg/dl） 危險(xiǎn)閾值 【參考值】【臨床意義】 HDL-C與冠心病發(fā)病呈負(fù)相關(guān)， 是冠心病的“負(fù)”危險(xiǎn)因素。是冠心病危險(xiǎn)因素。HDL-C下降多見于腦血管病、DM、肝炎、肝硬化病人。也見于吸煙、肥胖者及高TG血癥。適量飲酒、長(zhǎng)期體力勞動(dòng)和運(yùn)動(dòng)HDL-C升高。（2） 血漿LDL-C測(cè)定SUR法SUR法檢測(cè)

33、原理：試劑中的表面活性劑1能改變LDL以外的脂蛋白結(jié)構(gòu)并解離，所釋放出來的膽固醇與酶試劑反應(yīng)，產(chǎn)生的H2O2在缺乏偶聯(lián)劑時(shí)被消耗而不顯色；試劑中的表面活性劑2使LDL解離釋放膽固醇，參與Trinder反應(yīng)而顯色，色澤深淺與LDL-C量呈比例。 血清LDL-C參考范圍： 成人 2.07mmol/L3.11 mmol/L （80120 mg/dl）LDL-C合適范圍：； 邊緣升高：3.13 mmol/L ； 升高：。 【參考值】【臨床意義】 LDL-C增高是AS發(fā)生發(fā)展的主要脂類危險(xiǎn)因素。因TC水平也受HDL-C水平的影響，所以以LDL-C代替TC作為冠心病危險(xiǎn)因素指標(biāo)。美國全民膽固醇教育計(jì)劃(N

34、CEP) 的成人治療專家組(ATP ) 均以降低LDL-C 為首要治療目標(biāo)值。 3間接法指利用血清中TC、TG和HDL-C含量，按公式推算出LDL-C的量。Friedewald于1972年發(fā)明的一個(gè)經(jīng)驗(yàn)式： LDL-C=TCHDL-C（以mmol/L計(jì)）或 LDL-C=TCHDL-CTG/5（以mg/dl計(jì)）。應(yīng)注意運(yùn)用這一公式有如下條件： 空腹血清不含CM TG濃度在以下 型高脂血癥除外 （四）Lp(a)測(cè)定 Lp(a)測(cè)定可有兩類方法 1.測(cè)定Apo(a)2.測(cè)定Lp(a)-C 目前大都用免疫學(xué)方法測(cè)定。避免或減少因?yàn)榭乖瑼po(a)多態(tài)性不同所造成的Lp(a)定量的準(zhǔn)確性。 正常人群的Lp(a)水平呈明顯的偏態(tài)分布，Lp(a)水平高于醫(yī)學(xué)決定水平（300mg/L），冠心病危險(xiǎn)性明顯增