積雪草提取物編制說(shuō)明

1、國(guó)際商務(wù)標(biāo)準(zhǔn)積雪草提取物編制說(shuō)明一、任務(wù)來(lái)源本標(biāo)準(zhǔn)的制定工作，是由中國(guó)醫(yī)藥保健品進(jìn)出口商會(huì)提出而進(jìn)行的，國(guó)際商務(wù)標(biāo)準(zhǔn)植物提取物編號(hào)為 WM。本標(biāo)準(zhǔn)由桂林萊茵生物科技股份有限公司、中國(guó)醫(yī)藥保健品進(jìn)出口商會(huì)等單位負(fù)責(zé)起草。二、標(biāo)準(zhǔn)制定的意義積雪草提取物在國(guó)際市場(chǎng)上主要用于保健品及化妝品，國(guó)際上幾家大保健品公司及化妝品公司均有 用到此產(chǎn)品。用到積雪草提取物的保健品上1000種，廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、飲料、化妝品等工業(yè)。 每年國(guó)內(nèi)該產(chǎn)品的出口額上千萬(wàn)美金，市場(chǎng)前景十分看好。目前該提取物，在國(guó)內(nèi)沒(méi)有相應(yīng)的國(guó)家和行 業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，因此無(wú)法對(duì)產(chǎn)品中有效成份積雪草苷、總苷的含量及污染物限量進(jìn)行有效控制，各生產(chǎn)企業(yè)只

2、 能依靠自己制定的企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢測(cè)及質(zhì)量控制，由于不同企業(yè)的提取工藝和質(zhì)量控制水平不同，產(chǎn)品 質(zhì)量差異較大，又無(wú)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，導(dǎo)致積雪草提取物在國(guó)內(nèi)外銷(xiāo)售市場(chǎng)很容易出現(xiàn)質(zhì)量糾紛，并存在食品 安全隱患，嚴(yán)重制約了積雪草深加工產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，因此迫切需要制定積雪草提取物的出口商務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。制 定本標(biāo)準(zhǔn)將使積雪草提取物的質(zhì)量控制符合食品安全要求，同時(shí)能更好地滿足國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)的質(zhì)量控制要 求，有助于提高積雪草提取物生產(chǎn)企業(yè)的質(zhì)量控制水平和產(chǎn)品的市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力，促進(jìn)積雪草產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。三、標(biāo)準(zhǔn)編寫(xiě)規(guī)則本標(biāo)準(zhǔn)遵循GB/T1.1-2000標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第1部分:標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫(xiě)規(guī)則；GB/T20001.2-2001 標(biāo)準(zhǔn)化工

3、作指南 第2部分：采用國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)則和GB/T20001.4-2001標(biāo)準(zhǔn)編寫(xiě)規(guī)則第4部分： 化學(xué)分析方法1康規(guī)則編寫(xiě)。還參照相關(guān)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)編寫(xiě)指南的要求。四、標(biāo)準(zhǔn)的制(修)訂與起草原則1、積雪草提取物廣泛應(yīng)用于食品、化妝品、藥品等領(lǐng)域，由于沒(méi)有現(xiàn)行的積雪草提取物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)， 本標(biāo)準(zhǔn)在制定過(guò)程中，僅參照和引用了國(guó)內(nèi)外相關(guān)食品、藥用植物等標(biāo)準(zhǔn)。2、積雪草提取物應(yīng)用廣泛，規(guī)格也較多，本標(biāo)準(zhǔn)中選取最常規(guī)的25%積雪草總苷制定標(biāo)準(zhǔn)。3、本標(biāo)準(zhǔn)的重點(diǎn)放在安全性指標(biāo)：重金屬、微生物等。4、積雪草總苷的成分在中國(guó)藥典含積雪草苷、和羥基積雪草苷；歐洲藥典中包括了積雪草苷、積雪 草酸，羥基積雪草苷、羥基積雪草酸4種

4、，這兩種歸類(lèi)都與實(shí)際情況有差異，在日常貿(mào)易中也存在爭(zhēng)論。 需要根據(jù)實(shí)際情況重新確定積雪草總苷的成分。5、現(xiàn)在測(cè)試方法用的最多的是中國(guó)藥典和歐洲藥典上規(guī)定的方法，兩者各有差異，需要根據(jù)兩種方 法的優(yōu)缺點(diǎn)，在兩者的基礎(chǔ)上重新建立新方法。五、標(biāo)準(zhǔn)編制依據(jù)和主要內(nèi)容1、積雪草提取物廣泛應(yīng)用于食品、化妝品、藥品等領(lǐng)域，由于沒(méi)有現(xiàn)行的積雪草提取物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)， 本標(biāo)準(zhǔn)在制定過(guò)程中，僅參照和引用了國(guó)內(nèi)外相關(guān)食品、藥用植物等標(biāo)準(zhǔn)。2、現(xiàn)在測(cè)試方法用的最多的是中國(guó)藥典2010版一部P389積雪草總苷4和European pharmacopoeia 7.0 (01/2008:1498) corrected 6.05中

5、的方法。本標(biāo)準(zhǔn)中的測(cè)試方法參照中國(guó)藥典方法，為了使羥基積雪草酸和積雪草酸獲得更好的峰形和分離度，進(jìn)行了以下的改進(jìn)：用磷酸調(diào)節(jié)了環(huán)糊精溶液的pH至4， 采用梯度洗脫條件，20分鐘前流動(dòng)相比例與中國(guó)藥典方法無(wú)差異，20分鐘-60分鐘乙腈比例由24%變化至 45%，等度保持15分鐘。按E.P7.0中規(guī)定以積雪草苷為標(biāo)準(zhǔn)品乘以不同的校正因子，來(lái)計(jì)算羥基積雪草 苷、積雪草苷、積雪草酸、羥基積雪草酸的含量，歐洲藥典中羥基積雪草苷的校正因子為1.017、羥基 積雪草酸的校正因子為0.526、積雪草酸的校正因子為0.509。3、本標(biāo)準(zhǔn)設(shè)立了粒度的測(cè)定，并引用了中國(guó)藥典2010版中規(guī)定粒度的測(cè)定方法67。4、本

6、標(biāo)準(zhǔn)設(shè)立了總重金屬、砷、鉛、鎘、汞、銅的限量指標(biāo)，這六項(xiàng)指標(biāo)，是目前國(guó)內(nèi)外食品中比 較常用的重金屬項(xiàng)目。其限量標(biāo)準(zhǔn)，參照并嚴(yán)于WM-T2-2004藥用植物及制劑外經(jīng)貿(mào)綠色行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)罔，測(cè) 試方法采用GB/T 5009.74-20039測(cè)定總重金屬;采用GB 5009.12-2010測(cè)定鉛含量、GB/T 5009.15-2003 測(cè)定鎘含量11、中國(guó)藥典2010版一部附錄IXB鉛、鎘、砷、汞、銅測(cè)定法測(cè)定砷、汞的含量12，并參 考了GB/T5009.11-2003、GB/T 5009.17-20033- 14。5、 本標(biāo)準(zhǔn)設(shè)立了水分不大于5%指標(biāo)，參照了 GB7101-2003固體飲料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn) 3

7、。引用了 GB 5009.3-2010食品中水分的測(cè)定U6作為檢測(cè)方法。6、本標(biāo)準(zhǔn)設(shè)立了灰分不大于3%的指標(biāo)，該指標(biāo)抽查多批25%積雪草總苷確立的。引用了 GB5009.4-2010 食品中灰分的測(cè)定切。7、本標(biāo)準(zhǔn)參考了 GB7101-2003固體飲料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)19中普通型及其他產(chǎn)品要求，綜合考慮，細(xì)菌指標(biāo) 定為小于1000cfu/g,霉菌和酵母定為小于100cfu/g,大腸菌群為小于30MPN/100g，沙門(mén)氏菌、金黃色葡萄 球菌、大腸桿菌均為不得檢出。微生物檢測(cè)方法分別采用了 GB4789.2-2010食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微 生物學(xué)檢驗(yàn) 菌落總數(shù)測(cè)定，GB4789.15-2010食品安全國(guó)家

8、標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)霉菌和酵母計(jì)數(shù)， GB4789.3-2010食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)大腸菌群計(jì)數(shù)，GB4789.4-2010食品安全國(guó)家標(biāo) 準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)，GB4789.10-2010食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)金黃色 葡萄球菌檢驗(yàn)，GB4789.38-2012食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)大腸埃希氏菌計(jì)數(shù)20- 25。8、積雪草總苷為積雪草提取物中特定的成分，因此本標(biāo)準(zhǔn)中沒(méi)有設(shè)立鑒別的標(biāo)準(zhǔn)。本標(biāo)準(zhǔn)為推薦性國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。表1技術(shù)指標(biāo)及編制依據(jù)項(xiàng)目指標(biāo)參考標(biāo)準(zhǔn)粒度（80目篩通過(guò)率），%399%參考客戶要求及提取物特性重金屬（以Pb計(jì)）/（mg/kg）W10參照并嚴(yán)于

9、WM-T2-2004藥用植物及制劑 外經(jīng)貿(mào)綠色行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)（20mg/kg）的指標(biāo)鉛(Pb) / (mg/kg)W3.0參照并嚴(yán)于WM-T2-2004藥用植物及制劑 外經(jīng)貿(mào)綠色行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)（5.0mg/kg）的指標(biāo)鎘(Cd) / (mg/kg)W0.3參照WM-T2-2004藥用植物及制劑外經(jīng)貿(mào) 綠色行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)（0.3mg/kg）的指標(biāo)砷(As) / (mg/kg)W1.0參照并嚴(yán)于WM-T2-2004藥用植物及制劑 外經(jīng)貿(mào)綠色行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)（2.0mg/kg）的指標(biāo)汞(Hg) / (mg/kg)W0.1參照并嚴(yán)于WM-T2-2004藥用植物及制劑 外經(jīng)貿(mào)綠色行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)（0.2mg/kg）的指標(biāo)銅(Cu) /

10、(mg/kg)W5.0參照并嚴(yán)于WM-T2-2004藥用植物及制劑 外經(jīng)貿(mào)綠色行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)（20.0mg/kg）的指標(biāo)水分，%W5.0參考客戶要求并嚴(yán)于中國(guó)藥典2010版積雪草總苷(干燥失重10.0%)的指標(biāo)灰分，%W3.0參考客戶要求及提取物特性積雪草總苷w/%325參考客戶要求及提取物特性細(xì)菌總數(shù)/ (cfu/g)W1000綜合參照中國(guó)藥典微生物限度標(biāo)準(zhǔn)中不 含藥材原粉的制劑(1000 cfu/g)和含藥 材原粉的制劑(10000 cfu/g)霉菌及酵母菌數(shù)/ (cfu/g)W100參照中國(guó)藥典微生物限度標(biāo)準(zhǔn)(100 cfu/g)大腸菌群/ (MPN/100g)W30參照并嚴(yán)于GB7101-2

11、003固體飲料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)(40MPN/100g)大腸桿菌不得檢出參照GB7101-2003固體飲料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)沙門(mén)氏菌不得檢出參照GB7101-2003固體飲料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)金黃色葡萄球菌不得檢出參照GB7101-2003固體飲料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)六、名稱(chēng)、分子式、相對(duì)分子質(zhì)量及CAS編號(hào)1、中文名稱(chēng)：積雪草提取物。2、英文名稱(chēng):Gotu Kola P.E3、分子式、結(jié)構(gòu)式、分子量：積雪草提取物中積雪草總苷有4種組分。其結(jié)構(gòu)式、分子量及分子式如 表2所示。R4表2積雪草總苷各組分組分R1R2R3R4分子量積雪草苷 AsiaticosideHHCH3Rha (1-4) -glc(1-6) -glc959.13羥基積雪

12、草苷 MadecassosideOHCH3HRha (1-4) -glc (1-6) -glc975.13積雪草酸 Asiatic acidHHCH3H488.70羥基積雪草酸Madecassic acidOHCH3HH504.70七、產(chǎn)品技術(shù)要求1、性狀描述：積雪草提取物為黃棕色，有積雪草的特殊氣味。2、積雪草提取物指標(biāo)成分含量范圍：積雪草總苷325%。3、技術(shù)要求：積雪草提取物的技術(shù)要求見(jiàn)表3。表3積雪草提取物技術(shù)要求項(xiàng)目指標(biāo)檢驗(yàn)方法粒度（80目篩通過(guò)率），%399%附錄A中A.2（參照國(guó)藥典2010版一部附錄XI B第二法）重金屬（以Pb計(jì)）/（mg/kg）W10GB/T5009.74鉛

13、(Pb) / (mg/kg)W3.0GB5009.12鎘(Cd) / (mg/kg)W1.0GB/T5009.15砷(As) / (mg/kg)W1.0GB 5009.11汞(Hg) / (mg/kg)W0.1GB/T5009.17銅(Cu) / (mg/kg)W5.0GB/T5009.13水分，%W5.0GB 5009.3灰分，%W3.0GB5009.43積雪草總苷w/%25附錄A.3（檢測(cè)方法參照中國(guó)藥典2010版一 部P389,等度變更為梯度；系數(shù)計(jì)算參照 歐洲藥典7.0）細(xì)菌總數(shù)/ (cfu/g)V1000GB 4789.2霉菌及酵母菌數(shù)/ （cfu/g）V100GB 4789.15大

14、腸菌群/ (MPN/100g)V30GB 4789.3大腸桿菌不得檢出GB 4789.38沙門(mén)氏菌不得檢出GB4789.4金黃色葡萄球菌不得檢出GB4789.10八、方法驗(yàn)證8.1 HPLC 檢測(cè)8.1.1儀器8.1.1.1分析天平，感量為0.01mg。8.1.1.2超聲波清洗儀；8.1.1.3高效液相色譜儀（附紫外DAD檢測(cè)器）。8.1.2試劑和溶液8.1.2.1甲醇，色譜純。8.1.2.2乙月青，色譜純。8.1.2.3磷酸，分析純。8.1.2.4超純水。8.1.2.5 2mmolp環(huán)糊精（pH=4）：稱(chēng)取2.27gp -環(huán)糊精，加入1000ml超純水超聲溶解后，用磷酸調(diào)節(jié) 溶液至pH=4.

15、超聲混合均勻后經(jīng)0.45網(wǎng)濾膜過(guò)濾，即可。8.1.2.6標(biāo)準(zhǔn)品：積雪草苷（中國(guó)食品藥品檢定研究院）8.1.3色譜條件及系統(tǒng)適用性8.1.3.1色譜條件a） 色譜柱：Luna C18,250mmX 4.6mm, 5pmb）流動(dòng)相：乙青:2mmol/Lg環(huán)糊精（磷酸調(diào)節(jié)pH=4） =24： 76 （V/V）梯度條件:TimeB% （乙腈）A%（P環(huán)糊精緩沖液）0.0024.0076.0020.0024.0076.0060.0045.0055.0075.0045.0055.0076.0024.0076.00c）檢測(cè)波長(zhǎng)：205nm。d）流速：0.8mL/mine）進(jìn)樣量：5以18.1.3.2系統(tǒng)適用

16、性理論塔板數(shù)按積雪草苷峰計(jì)算應(yīng)不低于4000。8.1.4操作方法8.1.4.1對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取積雪草苷適量，用甲醇配制成濃度約為0.8mg/ml的溶液，備用。8.1.4.2供試品溶液的制備稱(chēng)取積雪草提取物（約含積雪草總苷30%）約150mg，置25ml容量瓶中，甲醇超聲溶解，冷卻至室 溫，甲醇定容至刻度，搖勻，過(guò)0.45p m濾膜，待測(cè)。8.1.4.2.1試驗(yàn)結(jié)果6次試驗(yàn)，供試品溶液與對(duì)照品溶液的圖譜見(jiàn)附錄1。8.2粒度的測(cè)定8.2.1儀器8.2.1.1天平：感量為0.1 mg。8.2.1.2分析篩。8.2.2操作步驟取接收盒，將分樣篩放在接收盒上，稱(chēng)取約40g提取物粉末（mg）置于分

17、樣篩內(nèi)，將篩蓋蓋好。將分樣篩保持水平狀態(tài)，左右往返輕輕篩動(dòng)5min，稱(chēng)量接收盒內(nèi)的提取物粉末質(zhì)量（m2，g）。8.2.3驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果10次平行測(cè)定結(jié)果及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差見(jiàn)表5。產(chǎn)品技術(shù)要求80目99%以上通過(guò)。表5 10次平行粒度測(cè)定結(jié)果樣品樣品重量接收盒內(nèi)樣品重量80目通過(guò)率編號(hào)gG%140.025039.708899.21240.284040.022299.35342.102941.850399.40441.121840.817599.26540.804740.523199.31642.506342.183399.24742.302142.006099.30840.210239.948899.

18、35941.216140.923599.291041.510641.232599.33X99.30S0.00057CV%0.0578.2.4精密度要求取兩次平行測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值為測(cè)定結(jié)果。兩次平行測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值，不大于算術(shù)平均值 的 0.5%。8.3重金屬測(cè)定檢驗(yàn)方法采用GB/T5009.74-2003食品添加劑中重金屬限量試驗(yàn)8.3.1儀器8.3.1.1天平：感量為0.1mg8.3.1.2馬弗爐8.3.2操作步驟準(zhǔn)確稱(chēng)取5g樣品，精確至0.0001 g，按GB/T5009.74-2003食品添加劑中重金屬限量試驗(yàn) 干法消 解進(jìn)行測(cè)定。表6重金屬添加試驗(yàn)結(jié)果8.3.3驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果樣品編

19、號(hào)樣品10mg/kg 鉛含 量標(biāo)準(zhǔn)液10mg/kg鉛含量標(biāo)準(zhǔn)液+ 樣品20mg/kg鉛含量標(biāo) 準(zhǔn)液+ 樣品1暗色不明顯2暗色不明顯3暗色不明顯驗(yàn)證結(jié)果見(jiàn)表6。4暗色不明顯5暗色不明顯6暗色不明顯7暗色8暗色9暗色10暗色11暗色12暗色13與10mg/kg鉛標(biāo)準(zhǔn)液顏色 相當(dāng)14與10mg/kg鉛標(biāo)準(zhǔn)液顏色 相當(dāng)15與10mg/kg鉛標(biāo)準(zhǔn)液顏色 相當(dāng)16與10mg/kg鉛標(biāo)準(zhǔn)液顏色 相當(dāng)17與10mg/kg鉛標(biāo)準(zhǔn)液顏色 相當(dāng)18與10mg/kg鉛標(biāo)準(zhǔn)液顏色 相當(dāng)19暗色加深20暗色加深21暗色加深22暗色加深23暗色加深24暗色加深8.4鉛、鎘、汞、砷、銅的測(cè)定鉛的檢驗(yàn)方法采用GB/T5009.

20、12-2003食品中鉛的測(cè)定（第一法）石墨爐原子吸收光譜法；鎘的 檢測(cè)方法采用GB/T5009.15-2003食品中鎘的測(cè)定（第一法）石墨爐原子吸收光譜法；碑、汞、銅的 檢測(cè)方法采用中華人民共和國(guó)藥典2010版一部附錄IXB鉛、鎘、砷、汞、銅的測(cè)定。8.4.1儀器8.4.1.1天平：感量為0.1mg。8.4.1.2原子吸收光譜儀（石墨爐、火焰、氫化物發(fā)生器）。8.4.2操作步驟準(zhǔn)確稱(chēng)取適量樣品，依據(jù)國(guó)標(biāo)及藥典方法進(jìn)行各個(gè)項(xiàng)目的測(cè)定。8.4.3驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果驗(yàn)證結(jié)果見(jiàn)表7。表7鉛、鎘、汞、神、銅試驗(yàn)結(jié)果樣品 編號(hào)鉛結(jié)果mg/kg鎘結(jié)果mg/kg汞結(jié)果mg/kg神結(jié)果mg/kg銅結(jié)果mg/kg10.

21、220.31-0.231.8220.190.29-0.221.8530.230.28-0.201.7940.200.30-0.211.7550.180.30-0.211.8460.200.29-0.231.7570.220.32-0.211.8680.190.28-0.221.7690.210.30-0.241.81100.220.31-0.201.87X0.210.300.221.81S0.0170.0130.0130.046CV%8.104.335.912.548.4.4精密度要求取兩次平行測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值為測(cè)定結(jié)果。兩次平行測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值，鉛應(yīng)不大于算術(shù)平 均值的20%，鎘應(yīng)不大

22、于算術(shù)平均值的10%，砷應(yīng)不大于算術(shù)平均值的15%，汞應(yīng)不大于算術(shù)平均值的 20%，銅應(yīng)不大于算術(shù)平均值的10%。8.5水分的測(cè)定檢驗(yàn)方法采用GB/T5009.3-2010食品中水分的測(cè)定（第一法）直接干燥法。8.5.1儀器8.5.1.1天平：感量為0.1mg。8.5.1.2電熱恒溫干燥箱8.5.2操作步驟準(zhǔn)確稱(chēng)取2g樣品，精確至0.0001 g，按GB/T5009.3-2010食品中水分的測(cè)定（第一法）直接干燥法 測(cè)定。表8干燥失重10平行樣品測(cè)定結(jié)果8.5.3驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果樣品編號(hào)稱(chēng)量瓶重量G樣品重量g稱(chēng)量瓶+樣品干燥至恒 重重量g干燥失重%132.59622.078034.63082.09

23、234.49242.058236.50632.15335.82602.034937.82002.01驗(yàn)證結(jié)果見(jiàn)表8。433.61092.077435.64452.11531.07412.069133.10022.08638.01552.070240.04162.13736.49512.064538.51732.05835.02702.058837.04322.07936.13372.077638.16772.101034.04742.058636.06242.12X2.09S0.041CV%1.968.5.4精密度要求取兩次平行測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值為測(cè)定結(jié)果。兩次平行測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值，應(yīng)不大

24、于算術(shù)平均值的5%。8.6灰分的測(cè)定檢驗(yàn)方法采用GB/T5009.4-2010食品中灰分的測(cè)定。8.6.1儀器8.6.1.1天平：感量為0.1mg。8.6.1.2馬弗爐8.6.2操作步驟準(zhǔn)確稱(chēng)取3g樣品，精確至0.0001 g，按GB/T5009.4-2010食品中灰分的測(cè)定8.6.3驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果驗(yàn)證結(jié)果見(jiàn)表9。表9灰分10次平行樣測(cè)定結(jié)果樣品編號(hào)坩堝重量G樣品重量g坩堝+樣品灼燒至恒重 重量g灰分%154.13753.040254.17161.12259.04643.004159.07911.09354.44633.053554.48021.11454.27703.091054.31071.

25、09557.16083.064857.19451.10656.66223.020156.69601.12755.51553.068455.54891.09855.30743.002655.34071.11954.44403.039554.47681.081054.85853.040254.89191.10X1.10S0.014CV%1.278.6.4精密度要求取兩次平行測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值為測(cè)定結(jié)果。兩次平行測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值，不大于算術(shù)平均值 的 15%。8.7積雪草苷及積雪草總苷的測(cè)定8.7.1儀器和用具8.7.1.1分析天平，感量為0.01mg。8.71.2超聲波清洗儀。8.7.1.3高

26、效液相色譜儀（紫外檢測(cè)器或二極管陣列檢測(cè)器）。8.7.2試劑和溶液8.7.2.1甲醇，分析純。8.7.2.2乙月青，色譜純。8.7.2.3磷酸（分析純8.7.2.4超純水。8.7.2.5 2mmol/Lp環(huán)糊精緩沖液：稱(chēng)取2.27gp -環(huán)糊精，加入1000ml超純水超生溶解后，用磷酸調(diào)節(jié)溶 液至PH=4.超聲混合均勻后過(guò)0.45網(wǎng)膜濾過(guò)，即可。8.7.2.6標(biāo)準(zhǔn)品：積雪草苷對(duì)照品單體（購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院）。積雪草提取物定性對(duì)照品（供總苷含量測(cè)定時(shí)定性用，含羥基積雪草苷、積雪草苷、羥基積雪草酸、積 雪草酸4種成分）8.7.3色譜條件及系統(tǒng)適用性8.7.4色譜條件a）色譜柱：Luna C

27、 250mmX4.6mm, 5旦mb）流動(dòng)相：乙青:2mmol/L8環(huán)糊精（磷酸調(diào)節(jié)PH=4） =24： 76 （V/V）TimeB% （乙青）A%（P環(huán)糊精緩沖液）0.0024.0076.0020.0024.0076.0060.0045.0055.00C）流速：0.8ml/mind）檢測(cè)波長(zhǎng)：205nme）進(jìn)樣量：5p lf）柱溫：25C8.7.4.1系統(tǒng)適用性理論塔板數(shù)按積雪草苷峰計(jì)算應(yīng)不低于4000。8.7.5操作方法8.7.5.1先用10%的乙月青，90%的水以1ml/min的流速?zèng)_洗柱子30min，然后再調(diào)出方法。8.7.5.2標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備：積雪草苷對(duì)照品溶液的制備：精密稱(chēng)取積雪

28、草苷適量，用甲醇溶解，配制成 濃度約為0.6 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)使用溶液，備用。8.7.5.3定性對(duì)照品溶液的制備：精密稱(chēng)取積雪草提取物定性對(duì)照品適量，用甲醇超聲溶解，定容，備用。8.7.5.4樣品溶液的制備：精密稱(chēng)取積雪草提取物（約含積雪草苷10%） 150 mg，置25 mL容量瓶中，甲 醇超聲溶解，冷卻至室溫，甲醇定容至刻度，搖勻，過(guò)0.45 gm有機(jī)濾膜，待測(cè)。8.7.5.5依次注射空白溶液、對(duì)照品溶液、定性對(duì)照品溶液、樣品溶液進(jìn)行檢測(cè)，外標(biāo)法定量。8.7.5.6測(cè)完后用10%的乙青，90%的水1ml/min的流速?zèng)_柱子30min，再用乙青沖柱子。8.7.5.7結(jié)果計(jì)算總皂苷含量以質(zhì)量分

29、數(shù)W計(jì)，數(shù)值以表示，按式（A1）計(jì)算：Wi = Ia +（BX1.017）+（CX0.526）+（Dx0.509）xc x VxP 乂的。 （A1）A x m式中：A樣品中積雪草苷的峰面積；B樣品中羥基積雪草苷的峰面積；C樣品中羥基積雪草酸的峰面積；D樣品中積雪草酸的峰面積；c.一積雪草苷對(duì)照品的濃度，單位為毫克每毫升（mg/mL）；V一樣品的定容體積，單位為毫升（mL）；P積雪草苷對(duì)照品的純度，%；A.一積雪草苷對(duì)照品的峰面積；m樣品的稱(chēng)樣量，單位為毫克（mg）；1.017羥基積雪草苷的校正因子0.526一羥基積雪草酸的校正因子0.509積雪草酸的校正因子羥基積雪草苷、積雪草苷、羥基積雪草酸

30、、積雪草酸的校正因子，按表11計(jì)，樣品液相圖譜如附錄2。表11名稱(chēng)羥基積雪草苷積雪草苷羥基積雪草 酸積雪草酸分子量975.13959.13504.70488.70校正因子F1.0171.0000.5260.509保留時(shí)間：T羥基積雪草苷VT積雪草苷VT羥基積雪草酸VT積雪草酸。8.7.6驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果驗(yàn)證結(jié)果見(jiàn)表12,圖譜見(jiàn)附錄2。表12積雪草苷6次平行測(cè)定結(jié)果編號(hào)稱(chēng)樣量（mg）積雪草昔 峰面積積雪草昔 含量（）積雪草總昔 峰面積積雪草總昔含量（）1221.131585.5421111.265453.5465535.712222.411601.3542411.315662.4550935.653

31、249.601800.1150511.326137.5300035.664251.001805.5613811.296139.1111335.695222.681604.3510311.305664.0134235.606220.741586.0430911.285454.6531635.82X11.2935.69S0.0220.075CV%0.190.218.7.7色譜系統(tǒng)穩(wěn)定性試驗(yàn)取積雪草苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6針1）重復(fù)性：6次測(cè)試值的峰面積及保留時(shí)間的RSD值，以積雪草苷計(jì)，峰面積的RSD值應(yīng)不高于1.0%，保留時(shí)間的RSD值應(yīng)不高于2.0%。2）拖尾因子，以4個(gè)積雪草苷組分中拖尾因子

32、最大的計(jì)，應(yīng)不高于2.0。3）理論塔板數(shù)，以4個(gè)積雪草苷組分中理論塔板數(shù)最小的計(jì)，應(yīng)不低于4000。結(jié)果見(jiàn)表13、表14，圖譜見(jiàn)附錄3。表13重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果編號(hào)積雪草保留時(shí)間積雪草峰面積129.7433370.84741229.7393375.26099329.6773380.94019429.7043374.34717529.6913377.26929629.7773388.88184X29.7223377.9240S0.0386.320.130.19CV%表14色譜系統(tǒng)穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果編號(hào)項(xiàng)目結(jié)果15次測(cè)試峰面積的RSD值0.19%25次測(cè)試保留時(shí)間的RSD值0.13%3拖尾因子1.154理

33、論塔板數(shù)608898.7.8線性積雪草苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液曲線的制備精密稱(chēng)取積雪草苷312.93mg，置于50mL容量瓶中，加入甲醇溶液超聲溶解，放置至室溫，甲醇定 容至刻度，搖勻后做儲(chǔ)備液使用。用移液管移取適量，甲醇定容至刻度，依次逐級(jí)稀釋制備其儷個(gè)不 同濃度的溶液，將以上制備好的7個(gè)不同的標(biāo)準(zhǔn)品溶液各5以1分別注入HPLC儀，制備積雪草苷標(biāo)準(zhǔn)溶 液曲線，結(jié)果如表15、表16表15積雪草苷曲線的制備樣品 編號(hào)積雪草昔濃度mg/ml積雪草昔峰面積線性方程相關(guān)系數(shù)R210.0160221.2486520.0801108.07154Y=1272.48287X+22.65222630.4006538.558

34、59R2=0.9999641.00141329.3168952.50343248.6311065.00696412.5078176.25867950.19727表16積雪草苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線8.7.9穩(wěn)定性考察取積雪草苷溶液，每1.5h進(jìn)樣一次，連續(xù)進(jìn)樣11針，前10針?lè)迕娣e顯示樣品溶液峰面積變化不大，在11針時(shí)樣品溶液峰面積顯著增大。實(shí)驗(yàn)說(shuō)明積雪草苷樣品溶液在15小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。結(jié)果如表17編號(hào)峰面積峰面積RSD12714.8781222717.6642432723.7342042721.7650252723.951110.31%62725.0594572732.9843482733.97082927

35、41.80933102734.27918112813.201598.7.10回收率試驗(yàn)取已知含量的積雪草提取物加入一定量的積雪草苷標(biāo)準(zhǔn)品，配制成適宜的濃度，每個(gè)濃度配制3份， 進(jìn)行HPLC分析。積雪草苷回收率結(jié)果應(yīng)在98%-102%之間?；厥章式Y(jié)果見(jiàn)表18表18積雪草苷回收率試驗(yàn)結(jié)果樣品 編號(hào)積雪草昔結(jié)果mg積雪草昔本底mg積雪草昔結(jié)果-本 底mg積雪草昔加入值mg回收率%143.9918.6125.3825.15100.91243.1317.9625.1825.15100.12348.1822.7425.4425.15101.16458.0430.9927.0526.86100.70560.

36、7433.6827.0526.86100.70668.5141.5826.9326.86100.26九、標(biāo)準(zhǔn)起草過(guò)程2012.6第四屆植物提取物分會(huì)理事會(huì)第一次會(huì)議，植物提取物標(biāo)準(zhǔn)會(huì)員會(huì)成立，接受積雪草提取 物標(biāo)準(zhǔn)制定任務(wù)。2012.7 成立標(biāo)準(zhǔn)起草小組。開(kāi)展制標(biāo)文獻(xiàn)調(diào)研，完成資料搜集和整理工作。按照要求，確定本標(biāo)準(zhǔn) 的技術(shù)指標(biāo)和檢驗(yàn)方法，同時(shí)完成實(shí)驗(yàn)材料的采購(gòu)和準(zhǔn)備。開(kāi)展前期驗(yàn)證試驗(yàn)工作。2012.82012.9完成技術(shù)指標(biāo)和分析方法的確定工作。對(duì)樣品各項(xiàng)技術(shù)指標(biāo)的檢測(cè)方法進(jìn)行了方法 驗(yàn)證。按照GB/T1.1-2000、GB/T20001.2-2001和GB/T20001.4-2001的要求，編制標(biāo)準(zhǔn)文本初稿和編制 說(shuō)明初稿。2012.92012.10修改整理上