選修一微生物的實驗室培養(yǎng)1(共41p)課件

1、專題2 微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用課題1 微生物的實驗室培養(yǎng)第1頁，共41頁。培養(yǎng)基可以分為哪幾類？培養(yǎng)基一般都含有哪些營養(yǎng)物質(zhì)，此外還要滿足哪些要求？獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是什么？ 什么是消毒、滅菌，常用方法有哪些？制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的方法步驟？ 學(xué)習(xí)目標(biāo)如何倒平板？第2頁，共41頁。答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度？練習(xí)：思考并討論下面的儀器分別用什么樣的消毒和滅菌方法？將接種后的培養(yǎng)基和一個未接種的培養(yǎng)基什么是消毒、滅菌，常用方法有哪些？請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是什么？問題2：每次劃線前灼燒接種環(huán)的目的：制備牛肉膏蛋白胨

2、固體培養(yǎng)基答：灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。培養(yǎng)12h和24h后，觀察到的實驗結(jié)果相同嗎？如果不同，請分析產(chǎn)生差異的原因？Nacl 5g一旦劃破，會造成劃線不均勻，難以達(dá)到分離單菌落的目的；有些細(xì)菌在一定的條件下，細(xì)胞里面形成一個橢圓形的休眠體，叫做芽孢。H2O 定容至1000ml微生物的類群原生生物：原核生物:真菌:病毒:如酵母菌如草履蟲、單細(xì)胞藻類等無細(xì)胞結(jié)構(gòu)真核細(xì)胞細(xì)菌、藍(lán)藻原核細(xì)胞？第3頁，共41頁。第4頁，共41頁。一、培養(yǎng)基1. 概念：人們按照微生物對_的不同需求，配置出供其_的營養(yǎng)基質(zhì)。營養(yǎng)物質(zhì)生長繁殖2.培養(yǎng)基的類型和用途按物理性質(zhì)固體培養(yǎng)基:加瓊脂；用于分離、鑒定、計

3、數(shù)液體培養(yǎng)基：不加凝固劑；用于工業(yè)生產(chǎn)。半固體培養(yǎng)基：加少量瓊脂；可用于保藏菌種。第5頁，共41頁。按化學(xué)成分合成培養(yǎng)基：成分明確；分類鑒定。天然培養(yǎng)基：成分不明確；用于工業(yè)生產(chǎn)。按目的用途分鑒別培養(yǎng)基：培養(yǎng)基中加入某種試劑或化學(xué)藥品，區(qū)別出不同類型的微生物。選擇培養(yǎng)基：根據(jù)某一種或一類微生物的特殊營養(yǎng)要求或?qū)σ恍┪锢?、化學(xué)抗性設(shè)計培養(yǎng)基。如用青霉素選出酵母菌等。第6頁，共41頁。選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基應(yīng)用加入青霉素分離酵母菌、霉菌等真菌加入高濃度食鹽分離金黃色葡萄球菌不加氮源分離固氮菌不加含碳有機物的無碳培養(yǎng)基分離自養(yǎng)型微生物加入青霉素等抗生素分離導(dǎo)入了目的基因的受體細(xì)胞在微生物學(xué)中，將允許特

4、定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其它種類微生物生長的培養(yǎng)基。第7頁，共41頁。鑒別培養(yǎng)基根據(jù)微生物的代謝特點在培養(yǎng)基加入某種指示劑或化學(xué)藥品配制而成，用以鑒別不同的微生物只起鑒別作用，并不能抑制其他微生物 第8頁，共41頁。固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基第9頁，共41頁。培養(yǎng)基一般都含有哪些營養(yǎng)物質(zhì)，此外還要滿足哪些要求？第10頁，共41頁。不管哪種培養(yǎng)基，一般都含有水、碳源、和氮源、 無機鹽等營養(yǎng)物質(zhì)另外還需要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì),例如:生長因子(即細(xì)菌生長必需，而自身不能合成的化合物,如維生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧氣、二氧化碳、滲透壓等的要求。 第11頁，共41頁。一.培養(yǎng)

5、基：微生物生存的環(huán)境和營養(yǎng)物質(zhì)1.基本成分：碳源、氮源、水、無機鹽碳源無機碳源：有機碳源：CO2、CO32-、HCO3-牛肉膏、蛋白胨等自養(yǎng)微生物異養(yǎng)微生物氮源無機氮源：有機氮源：NH4、NO3-牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等注：對于異養(yǎng)微生物，含C、N的化合物既為碳源，也是氮源。第12頁，共41頁。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基 是一種應(yīng)用最廣泛和最普通的細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基。1000ml牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方H2O 定容至1000mlNacl 5g蛋白胨 10g牛肉膏 5g瓊脂20.0g第13頁，共41頁。培養(yǎng)基配制原則目的明確：營養(yǎng)全面、濃度適宜、比例恰當(dāng)適宜的pH值：有機碳源異養(yǎng)型：根據(jù)微生物的種類、

6、培養(yǎng)目的選擇原料自養(yǎng)型：不加碳源加入緩沖劑（CO2碳源）生產(chǎn)科研第14頁，共41頁。2.無菌范圍：實驗操作空間消毒操作者的手、衣著消毒實驗用具滅菌實驗操作過程二.無菌技術(shù)：防止外來雜菌的污染1.消毒與滅菌：酒精燈旁操作超凈工作臺第15頁，共41頁。二、無菌操作技術(shù)1. 獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵？防止外來雜菌入侵2、無菌技術(shù)除了用來防止實驗室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？避免操作者自身被微生物感染第16頁，共41頁。消毒與滅菌消毒：使用較溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對人體有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。滅菌：使用強烈的理化因素殺死物體內(nèi)所有的微生物，包括芽孢和孢子

7、。滅菌與消毒技術(shù)是微生物有關(guān)工作中最普通也是最重要的技術(shù)。第17頁，共41頁。芽孢 有些細(xì)菌在一定的條件下，細(xì)胞里面形成一個橢圓形的休眠體，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，對惡劣的環(huán)境有很強的抵抗力。每一細(xì)胞僅形成一個芽孢，所以其沒有繁殖功能。 細(xì)菌、原生動物、真菌和植物等產(chǎn)生的一種有繁殖或休眠作用的生殖細(xì)胞。能直接發(fā)育成新個體。 孢子特殊的休眠構(gòu)造第18頁，共41頁。消毒的方法：1、煮沸消毒法:100煮沸5-6min2、巴氏消毒法：70-75 下煮30min或 80 下煮15min3、化學(xué)藥劑消毒法:用75%酒精進行皮膚消毒;氯氣消毒水源4、紫外線適用對象：操作空間、液體、雙手等第19頁，共41頁。

8、滅菌的方法：1、灼燒滅菌2、干熱滅菌：160-170 下加熱1-2h。3、高壓蒸汽滅菌：100kPa、121 下維持15-30min.第20頁，共41頁。請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請選擇合適的方法。（1） 培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2） 玻棒、試管、燒瓶和吸管（3） 實驗操作者的雙手思考消毒滅菌 滅菌 第21頁，共41頁。練習(xí)：思考并討論下面的儀器分別用什么樣的消毒和滅菌方法？培養(yǎng)基培養(yǎng)皿空 氣接種環(huán)雙 手牛 奶巴氏消毒化學(xué)消毒紫外線消毒高壓蒸氣滅菌灼燒滅菌干熱滅菌第22頁，共41頁。單個或少數(shù)菌體2.特征：大小、形狀、光澤度、顏色、透明度等。3.功能：1.定義：三

9、、菌落鑒定菌種的重要依據(jù)固體培養(yǎng)基上大量繁殖子細(xì)胞群體第23頁，共41頁。1000ml牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方H2O 定容至1000mlNacl 5g蛋白胨 10g牛肉膏 5g瓊脂20.0g四.大腸桿菌的純化培養(yǎng)制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基1.計算：培養(yǎng)基用量依配方計算各成分的用量2.稱量：3.溶化：牛肉膏黏稠，用稱量紙稱取牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加蓋牛肉膏、稱量紙 、少量水加熱溶解取紙蛋白胨、NaCl瓊脂補水定容4.調(diào)pH、分裝、封口：5.滅菌：6.倒平板：培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿第24頁，共41頁。倒平板約50防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基第25頁，共41

10、頁。1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50 左右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度？問題討論 答：用手觸摸，剛不燙手。2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？ 答：灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。第26頁，共41頁。3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？4.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？ 答：皿蓋凝結(jié)水珠，防止水珠落入培養(yǎng)基，造成污染； 平板倒置，防止培養(yǎng)基表面的水分揮發(fā)。 答：最好不用，空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生。第27頁，共41頁。二.大腸桿菌的純化培養(yǎng)：制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基純化大

11、腸桿菌：平板劃線法：菌種劃3個平板1個不劃線1.接種：接種環(huán)防止劃破培養(yǎng)基（重復(fù)實驗）（空白對照）第28頁，共41頁。問題2：每次劃線前灼燒接種環(huán)的目的：問題3：劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)的目的： 避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)基 殺死上次劃線結(jié)束后殘留的菌種 及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免污染環(huán)境和操作者。 問題1：第一步灼燒接種環(huán)的目的：問題討論第29頁，共41頁。2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進行劃線？答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。3.在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？ 答：線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開

12、始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細(xì)菌繁殖而來的菌落。第30頁，共41頁。4.為什么不能劃破培養(yǎng)基？一旦劃破，會造成劃線不均勻，難以達(dá)到分離單菌落的目的；二是存留在劃破處的單個細(xì)胞無法形成規(guī)矩的菌落，菌落會沿著劃破處生長，會形成一個條狀的菌落。第31頁，共41頁。6支試管，分別加入9ml無菌水1ml1011ml1021ml1031ml1041ml1051ml106稀釋涂布平板法：a.梯度稀釋菌液：菌液第32頁，共41頁。稀釋涂布平板法：a.梯度稀釋菌液：b.涂布平板：不超過0.1ml各梯度分別涂布3個平板1個不涂布作空白對照滴灼試涂稀釋103倍稀釋104倍稀釋10

13、5倍第33頁，共41頁。平板劃線法：二.大腸桿菌的純化培養(yǎng)：制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基純化大腸桿菌：1.接種：稀釋涂布平板法：2.培養(yǎng)：將接種后的培養(yǎng)基和一個未接種的培養(yǎng)基放入37恒溫箱中培養(yǎng)12h24h后，觀察并記錄第34頁，共41頁。微生物的培養(yǎng)與觀察第35頁，共41頁。大腸桿菌在伊紅美藍(lán)瓊脂(EMB)上典型特征 在普通瓊脂培養(yǎng)基上： 圓形，邊緣整齊，表面光滑，半透明。典型的大腸桿菌在伊紅美藍(lán)瓊脂平板上的特征為:深紫黑色、光滑、濕潤、帶有金屬光澤的圓形菌落。第36頁，共41頁。1.未接種的培養(yǎng)基表面是否有菌落生長？如果有菌落生長，說明了什么？ 2.在接種大腸桿菌的培養(yǎng)基上，能否觀察到獨立的菌落？它們的大小、形狀、顏色相似嗎？ 五、結(jié)果分析與評價若有，說明培養(yǎng)基滅菌不徹底 相似的菌落，接種符合要求第37頁，共41頁。3.培養(yǎng)12h和24h后，觀察到的實驗結(jié)果相同嗎？如果不同，請分析產(chǎn)生差異的原因？4.如果在培養(yǎng)基上觀察到不同形態(tài)的菌落，請分析其可能的原因。 大小會有明顯不同無菌操作未達(dá)到要求：培養(yǎng)基滅菌不徹底；可能是接種時或培養(yǎng)時污染第38頁，共41頁。六.菌種的保藏1.臨時保藏：試管固體斜面培養(yǎng)基上42.長期保存：菌種易被污染、變異甘油管藏