重組抗體表達服務常見問題解析

1、在此處鍵入重組抗體表達服務常見問題解析重組抗體表達服務常見問題解析1.如何提高抗體的穩(wěn)定性？優(yōu)化洗脫條件，可以從高的PH逐漸降低；純化的樣品要及時中和，甚至一邊純化一邊中和；純化實驗過程中樣品低溫制備和保存；添加蛋白保護劑比如甘油、吐溫；抗體濃度較高時需要及時稀釋，避免高濃度聚沉的風險。2.如果用哺乳體系進行表達的話，選擇293或cho有什么區(qū)別？CHO細胞即中國倉鼠卵巢細胞，是目前表達外源蛋白最多最成功的細胞之一。該細胞屬于成纖維細胞，是一種非分泌型細胞，自身很少分泌內源蛋白，因此有利于目的蛋白的純化分離；相較于其他細胞類型，CHO細胞是治療性蛋白生產的主要宿主細胞的原因如下：（1）能在化學

2、成分限定和無血清懸浮培養(yǎng)中穩(wěn)定生長，（2）該細胞基因組信息明確，在人類致病病毒應答方面表現(xiàn)出合理的安全性，（3）能夠表達與人相似的翻譯后修飾。此外， HYPERLINK /protein-expression-service-index-mammalian.html CHO細胞表達系統(tǒng)的最重要優(yōu)勢之一是能夠容易的得到基因改造的細胞。然而，因為糖基化模式與人類不完全相同，導致CHO細胞產生的重組蛋白在某些時候仍然表現(xiàn)出免疫原性。HEK293細胞是 HYPERLINK /protein-expression-service-index.html 真核蛋白表達常用的細胞之一，它具有以下優(yōu)勢： 更快的

3、生長速度，更高的生長密度、轉染效率高，表達后修飾更接近人體蛋白的結構，可能會有潛在的人病毒污染。3.鐘鼎表達重組抗體服務的優(yōu)勢是什么？可變區(qū)和高變區(qū)：(1)基于生物信息學的氨基酸序列分析，(2)基于結構生物學的同源建模以及計算機輔助設計和抗體改造(3)基于空間結構的序列分析的重要氨基酸的回復突變恒定區(qū)：重鏈、輕鏈載體骨架，人源、鼠源多物種可供選擇。豐富的載體表達哺乳動物抗體恒定區(qū)。4.重組抗體的載體如何選擇？重組抗體表達載體和細胞最好是配套的，比如293T細胞對應PCDNA3.1載體，有EBNA改造的細胞對應有Orip復制起點的載體，還有就標準細胞株和標準質粒，例如Thermo的293F對應PCDNA3.4載體等。5.如何提高重組抗體的產量？選擇高表達系統(tǒng)，制備無內毒素、高超螺旋質粒，細胞狀態(tài)要好，時間允許可以表達優(yōu)化，延長表達時間，提高純化得率。6.表達的重組抗體是否具有活性？真核表達系統(tǒng)較原核表達的優(yōu)勢就是活性較好，理論上大部分都是有活性的，但是不同的樣品穩(wěn)定性不一樣，需要以實際實驗結果為準。7.是否能高通量篩選重組抗體？可以做高通量抗體表達及篩選，利