2022年《細胞生物學實驗》教案

1、試驗一細胞外形結(jié)構(gòu)的觀看與顯微測量（必做）一、試驗目的 ：1熟識動物細胞、植物細胞的基本外形結(jié)構(gòu) 2把握暫時裝片的制作方法 3把握顯微測量的原理和方法 4把握生物繪圖的方法；二、試驗原理 ：細胞是生物體結(jié)構(gòu)功能的基本單位,其外形與功能相適應； 不同類型的細胞具有不同的大小、外形和結(jié)構(gòu),以適應其功能；通過制作暫時裝片,可以觀看很 多細胞的結(jié)構(gòu),并借助測微尺測量細胞直徑,進而獲得細胞的體積；三、試驗儀器、試劑及材料：儀器： 光學顯微鏡 （每人 1 臺）,載玻片、蓋玻片、剪刀、鑷子、牙簽、滴管 測微尺（鏡臺測微尺；目鏡測微尺）試劑：1%碘液、瑞氏染液（假如觀看血細胞,就需瑞氏染液）材料：洋蔥、紅辣椒

2、、紫色落葵（或紫羅蘭） 、血細胞懸液、口腔上皮細胞四、試驗步驟 ：1 洋蔥鱗莖表皮細胞的觀看 在載玻片中心滴一滴 1%碘液 用剪刀在洋蔥鱗莖葉內(nèi)表面畫一個 1mm2 的方框 用鑷子撕下表皮 在碘液中鋪平 蓋上蓋玻片用吸水紙吸去余外碘液（也可幫忙排除氣泡）椒表皮細胞裝片）2 人口腔黏膜上皮細胞的觀看顯微鏡下觀看 （同法制紅辣在載玻片中心滴一滴 1%碘液 用牙簽刮取上皮細胞 在 1%碘液中攪動分散細胞 染色 1 分鐘 蓋上蓋玻片觀看3 血細胞觀看（見細胞生物學試驗教程第 9 頁）在載玻片右端滴一滴血 用另一張載玻片以 3045 度角（兩玻片夾角）推移血液成勻稱薄膜 滴一滴瑞氏染液染色 13 分鐘自

3、來水沖洗染液,吸水紙吸干 鏡檢4 顯微測量（1）原理： 測微尺由目鏡測微尺和鏡臺測微尺組成,目鏡測微尺位于目鏡內(nèi),為玻璃圓片,上有一條帶刻度的直線,精確度較鏡臺測微尺的低； 鏡臺測微尺是一塊載玻片,中心圓形區(qū)域內(nèi)有一帶刻度的直線,精確度較目鏡測微尺高；（2）測量：用目鏡測微尺的格數(shù)度量細胞的大小,目鏡測微尺每格代表的實際長度用鏡臺測微尺來校定；A、將鏡臺測微尺放入載物臺上,轉(zhuǎn)動目鏡,使二者平行；挑選一處讓二者重合,然后向右側(cè)查找再次重合處,登記二者的數(shù)值, 并依據(jù)目鏡測微尺和鏡臺測微尺的精度關(guān)系換算目鏡測微尺每小格實際代表的刻度值；目鏡測微尺鏡臺測微尺目鏡測微尺每格的長度 = . 正確答案 :

4、 2.5 m B、將鏡臺測微尺取下,換上洋蔥表皮細胞、口腔黏膜上皮細胞、血細胞涂片,用目鏡測微尺測量出其長度和寬度；C、應用 V= 4/3 ab2 a 為長半徑, b 為短半徑 運算出觀看細胞的體積；為什么要測量 5-10 個細胞的數(shù)據(jù),再運算平均值？五、 摸索題： 1結(jié)合試驗分析細胞外形結(jié)構(gòu)的特點及其與功能的適應性；2測量細胞時應留意哪些問題？3繪圖：洋蔥表皮細胞、口腔黏膜上皮細胞、各種血細胞附：生物繪圖必需留意的問題 繪圖是生物試驗報告的一種重要形式,基本要求如下：1預備好 HB 鉛筆、橡皮、刀、尺子及繪圖紙,將繪圖紙放在右邊；2繪圖時,特殊留意觀看物的外形、各部分的位置、比例和毗鄰關(guān)系；

5、3每幅圖的大小、 位置在紙面上必需支配得, 通常圖占報告紙左上方 2/3 的 面積,并考慮注字的位置；4觀看清晰后,挑選典型的細胞或組織,左眼看顯微鏡,右眼協(xié)作右手,先用鉛筆在紙上輕輕描出輪廓,使外形正確,然后再用清晰的線條繪出, 線條粗細要勻稱不要重復；留意紙面的潔凈,鉛筆要保持尖銳,盡量少用橡皮；5用鉛筆繪圖,線條要明確清晰,圖的深淺明暗和立體感一律以點的疏密來表示（深色用密集的黑點,淺色用稀疏的黑點）或進行其它美術(shù)加工；,點要圓而一樣,不得涂暗影6圖繪好后,要在圖的右側(cè)注明各部分結(jié)構(gòu)名稱,引線用直尺畫出,間隔 要勻稱,長短適度,各引線不能交叉,圖注要盡量排列整齊,注字要用正楷；7每一個圖

6、下面要注明圖的名稱、放大倍數(shù)；8繪圖紙上全部注字（包括姓名、試驗日期、題目等）均用鉛筆書寫,不 能用其他筆寫；試驗二觀看黑藻的葉綠體和細胞質(zhì)流淌（選做）一、試驗目的：1初步把握高倍顯微鏡的使用方法；2觀看葉綠體外形和分布；3通過顯微鏡的實際觀看,懂得細胞質(zhì)流淌是一種生命現(xiàn)象；二、試驗原理：1高等植物的葉綠體存在于細胞質(zhì)中,葉綠體呈 或球形 ,高倍顯微鏡下清晰可見；2活細胞中的細胞質(zhì)處于不斷流淌的狀態(tài),用 觀看細胞質(zhì)的流淌；三、試驗程序：綠 色、 扁平的橢球形葉綠體 的運動作為標記可光照、室溫條件下水中培育黑藻取一片幼嫩的小葉做暫時裝片：清水+小葉 +蓋玻片低倍觀看葉片細胞高倍觀看葉綠體的流淌及

7、流淌方向；四、留意事項：1、細胞質(zhì)的流淌受細胞的代謝狀況和外界環(huán)境因素的影響,增進細胞代謝作用的因素,如相宜的光照、溫度、pH 值、生長素等,都可以促進細胞質(zhì)的流動；反之,不利的環(huán)境變化和某些化學藥品,如麻醉劑等,就可抑制細胞質(zhì)的流 動；2、在做此試驗時,假如發(fā)覺細胞質(zhì)不流淌,或者流淌很慢,應立刻實行措 施,加速其細胞質(zhì)的流淌；其方法有三種：一是進行光照,即在陽光或燈光下放 置 1520 分鐘；二是提高盛放黑藻的水溫,可加入熱水將水溫調(diào)至 25左右；三是切傷一小部分葉片；試驗三 血型的鑒定 （選做）一、目的： 把握 ABO血型鑒定的方法；二、原理： 依據(jù) lgM 類特異性血型抗體與紅細胞上特異

8、性抗原結(jié)合能夠顯現(xiàn)凝集反應的原理,用已知 lgM 類特異性標準抗血清與被檢者紅細胞在室溫條件下反應, 如被檢者紅細胞顯現(xiàn)凝集現(xiàn)象,說明被檢紅細胞上有與血型抗體對應的抗原；三、器材：載玻片、 75%酒精、棉簽、采血針試劑：標準抗 A、抗 B 血型定型試劑（二） 血型 :1、定義：依據(jù)紅細胞膜表面上特異抗原（凝集原）的類型進行分類；2、血型分類： ABO 血型系統(tǒng)、 Rh 血型系統(tǒng)等（三） ABO 血型系統(tǒng)：臨床常見： A 型、B 型、AB 型和 O 型；紅細胞凝集原 血漿的凝集素A 型 A 抗 B B 型 B 抗 A AB 型 A、 B O 型抗 A、抗 B （四）血型鑒定 的步驟1、預備：載玻

9、片的左上角編號；2. 按標記所示分別滴加抗A、抗 B 血型定型試劑各一滴；3. 采血：無名指指尖內(nèi)側(cè)；每邊各加入受檢者的全血 1 滴；用牙簽攪拌使紅細胞與抗體充分混勻；3、原理：利用凝集反應原理鑒定血型A + 抗 A 凝集反應B + 抗 B 凝集反應4. 觀看和血型判讀：如有凝集,就愈搖動,凝塊愈大；無凝集紅細胞可勻稱分散；依據(jù)有無凝集現(xiàn)象報告結(jié)果；留意事項： 每人每次使用一支采血針兩根攪拌牙簽不能相混觀看有無凝集反應小學問 ： 利用從綠咖啡豆中提取的酶,來清除掉B 型血紅細胞膜表面的多糖體,從而獲得和 O 型血基本相同的紅血球,這樣就可以把 B 型血轉(zhuǎn)變成了 O 型血,可用于緊急輸血；摸索

10、1某同學的血液跟 A 型標準血清發(fā)生凝集反應,但其血清遇 A 型血卻不發(fā)生凝集反應；問：該同學的血型是哪一種？2已知甲、乙、丙、丁四人中,只有甲、乙的血與B 型標準血清發(fā)生凝集反應,又知在緊急情形下,甲只能接受丁的血；問：甲、乙、丙、丁各是什么血型3有一對夫婦,父親的血型為A 型,母親的血型為B 型,其兒子卻是O 型,請問這個兒子是不是這對夫婦所生的？說明理由；1答： AB 型；2答： 甲是 A型、乙是 AB型、丙是 B型、丁是各是 O型；3有一對夫婦,父親的血型為A 型,母親的血型為B 型,其兒子卻是 O型,請問這個兒子是不是這對夫婦所生的？說明理由；答： A 型的基因型：AA 和 Ai B

11、 型的基因型：BB 和 Bi AB型的基因型：AB O 型的基因型： ii 父母基因型：BB AA Bi AA 產(chǎn)生配子：B 、 i A B A 子女基因型： A B A B Ai 子女血型：A B 型A B 型A 型父母基因型：BB Ai Ai Bi產(chǎn)生配子：A B i B、iB A 、 i A 、子女基因型： A B Bi Bi Ai ii 子女血型：A B 型B 型 A B型 B 型A 型 O 型這對夫婦有可能生出O型血的兒子；但 O型血的這個兒子也仍不肯定就是這對夫婦所生；通常 ABO血型的法醫(yī)鑒定,只能作排除的檢查,不能確定就是；要 想知道這個兒子是否親生,最好仍是做 DNA鑒定,精

12、確率達 99%；試驗四 血涂片的制備和細胞計數(shù)（必做）課前預習 1細胞計數(shù)的基本原理？2細胞計數(shù)與細菌計數(shù)的異同點？一、試驗目的1制備血涂片,觀看明白血細胞的基本外形；2把握細胞計數(shù)方法；二、試驗原理細胞計數(shù)一般用血細胞計數(shù)板,按白細胞計數(shù)方法進行計數(shù)； 細胞計數(shù)時,先將培育細胞或血細胞稀釋成細胞懸液,然后將細胞懸液滴入細胞計數(shù)板內(nèi),計數(shù)計數(shù)板上計數(shù)室四大格內(nèi)的細胞數(shù)；依據(jù)計數(shù)室的容積及稀釋倍數(shù),即可運算出細胞濃度；三、 試驗儀器、試劑及材料1材料：雞一只2器材和儀器：顯微鏡、載片、蓋片、吸水紙、手術(shù)器材、解剖盤、血球計數(shù)板、小平皿、牙簽3試劑： 0.9生理鹽水四、試驗步驟1制備 10%的雞血

13、細胞懸液2雞血涂片的制備與觀看取雞血懸液,靠近一端滴在載片上,將另一載片的一端呈 30-45 角緊貼在 血滴的前緣,勻稱用力向前推,使血液在載片上形成勻稱的薄層 圖 21；晾 干,顯微鏡下觀看；圖 21 血涂片的制備3細胞計數(shù) 1）制備雞紅細胞懸液： 0.9生理鹽水按確定的稀釋倍數(shù)制成 10%雞紅細 胞懸液；2）熟識血細胞計數(shù)板：血細胞計數(shù)板呈長方形,有2 個計數(shù)室；每個計數(shù)室分為 9 個大正方格,每個大格邊長為 1mm,計數(shù)室的底與蓋玻片間的距離為0.1mm,及每大格的容積為1mm 1mm 0.1mm=0.1mm 3；四角的每個大格被分為 16 個中格；中心的大格被分為25 個中格,中心的每

14、個中格又被分為16 個小格；3）滴片：每人取 1 副血細胞計數(shù)板及 1 張蓋玻片,用布將蓋玻片擦凈,把蓋玻片蓋在血細胞計數(shù)板槽上,然后用吸管將制備好的雞血細胞懸液混勻,吸取血細胞懸液,滴 1 滴于血細胞計數(shù)板的蓋玻片一側(cè)邊緣,使細胞懸液自然流入計數(shù)室內(nèi)；留意： 血細胞懸液不行滴的過多,如溢出或蓋玻片內(nèi)有氣泡必需重做,否就將影響計數(shù)結(jié)果；該吸管加完樣后不能再用；4）計數(shù)：在低倍鏡下按圖運算計數(shù)板的四角大方格（每個大方格又分 16 個小方格）內(nèi)的細胞數(shù)；計數(shù)時, 只計數(shù)完整的細胞,如聚成一團的細胞就按一個細胞進行計數(shù)； 數(shù)出計數(shù)板上計數(shù)室四角四大格中的細胞數(shù),如細胞壓在格線上時,數(shù)上不數(shù)下,數(shù)左不

15、數(shù)右；二次重復計數(shù)不應超過5；五、試驗結(jié)果1雞血涂片的制備與觀看顯微鏡觀看可見雞紅細胞為橢球形,有核；白細胞數(shù)目少,為圓形；2細胞濃度運算：將四大格的細胞總數(shù)除以4,得出平均每大格的細胞數(shù),每大格的容積為 0.1mm3,乘以 10000 即為 1000mm3（1mL）；因此,不同稀釋倍數(shù)細胞懸液的細胞濃度可用下式運算：細胞濃度（細胞數(shù) mL）（四大格的細胞數(shù) 4） 10000稀釋倍數(shù)六、試驗報告 1繪圖：顯微鏡下觀看的各種細胞外形 2計數(shù) 每毫升 細胞懸液中的細胞數(shù)（留意單位：個 /ml）3為什么細胞計數(shù)時,細胞懸液逸出凹槽外或有氣泡時要重做？顯微直接計數(shù)法的計數(shù)原理1 1ml 菌液中的總菌數(shù)

16、 = ？= N 10 4B = A/52510 4B N:大方格的總菌數(shù)；A: 五個中方格的總菌數(shù)；B: 菌液的稀釋倍數(shù)；答案： 3+4+4+3+2525104 = 8 105 個/ml 試驗五 DNA 的細胞化學 Feulgen 反應 （必做）一、試驗目的：1Feulgen 反應是專一性染 DNA 的反應,是經(jīng)典的細胞化學方法,通過 試驗使同學把握 Feulgen染色的技術(shù)；2觀看明白 DNA 在細胞內(nèi)的分布；二、試驗原理：稀 HCl 水解 DNA ,破壞嘌呤和脫氧核糖間的化學鍵,并在脫氧核糖 C1 端形成游離的醛基, 醛基和 Schiff 試劑結(jié)合,形成紫紅色的化合物； 因此在有 DNA

17、的部位,就會出現(xiàn)除紫紅色陽性反應；三、 試驗儀器、試劑及材料1試驗材料：紫色洋蔥 2試驗器材： 顯微鏡、染色缸、剪刀、刀片、鑷子、燒杯、培育皿、水浴鍋、 100溫度計、3試劑： 見教材 3132 頁；四、試驗步驟：1撕取洋蔥鱗莖內(nèi)表皮 3 塊（1cm 2,待鋪片時剪成 1mm 2）,分別進行以下操作；1 塊放在 3mL 1M HCL 中,加熱到 60水解 810min；（試驗組）1 塊放在 3mL 1M HCL 中,常溫下水解 810min；（對比組 1）1 塊不用水解,直接從第3 步進行操作（對比組 2）2蒸餾水水洗；3用 Schiff 試劑遮光染色 3060min；1 塊洋蔥內(nèi)表皮約 1.

18、5mL 4用新奇配制的漂洗液洗 5自來水水洗 5min；60.5%亮綠復染 30s；3 次,每次 2mL,2min；7將內(nèi)表皮放到載波片上,蓋上蓋波片,顯微鏡觀看；細胞中凡是有 DNA 的部位應出現(xiàn)紫紅色的陽性反應；（試驗組與 2 個對比組在顯微鏡下對比進行觀看）留意事項： 不要把染液占到自己手上或滴加到桌面上五、作業(yè)： 繪圖示洋蔥鱗莖表皮細胞DNA 的分布部位；試驗六葉綠體的分別與熒光觀看（必做）課前預習： 1 分別細胞器的一般原理和方法？2 葉綠體的熒光為什么不能用一般光學顯微鏡觀看到？一、試驗目的：1通過對植物細胞葉綠體的分別,明白細胞器分別的一般原理和方法；2通過光鏡鑒定葉綠體的純度及

19、明白葉綠體外形；3觀看葉綠體的自發(fā)熒光和次生熒光,明白熒光顯微鏡的原理和使用方法；二、試驗原理 1細胞經(jīng)過破裂后制成勻漿,在等滲介質(zhì)中進行差速離心,是分別細胞器 的常用方法；2利用細胞各組分質(zhì)量大小、外形和密度的不同,挑選不同的離心力和離 心時間,即可分別得到所需要的細胞器或大分子組分；3菠菜是分別完整葉綠體的極好材料,其細胞中所含的質(zhì)體較大,而且它 們都能在不積存淀粉和酚類物質(zhì)的條件下生長；菠菜的葉綠體 /濕重比率較高；葉綠體具有熒光現(xiàn)象,可利用熒光顯微鏡觀看；切片觀看其外形和分布；菠菜葉富含葉綠體, 可采納徒手4葉綠體的分別應在等滲溶液 0.35mol/L 氯化鈉 或 0.4mol/L 蔗

20、糖 溶液 中進行, 以免滲透壓的轉(zhuǎn)變使葉綠體受到損耗；5將勻漿液 1000r/min 的條件下離心 2min, 用 6 層紗布 除去組織殘渣和一些未被破裂的完整細胞,以去除其中的組織殘渣和未被破裂的完整細胞；然后,在 3000r/min 的條件下離心 5min,即可獲得沉淀的葉綠體（混有部分細胞核）；6分別過程最好在 05條件下進行；假如在室溫下,要快速分別和觀看；離心技術(shù)可用于細胞器的分別；1）差速離心法：采納逐步增加離心速度或低速和高速交替進行離心,使沉降速度不同的顆粒在不同的分別速度和離心時間下分批分別的方法,稱為差速離心法；常用于從組織勻漿中分別各種細胞器,見表 2-1；表4-1 差速

21、離心形成的沉淀（植物）沉淀轉(zhuǎn)速x 時間內(nèi)容物A 150g x 20min 完整細胞B 1000g x 20min 細胞核,細胞碎片C 3000g x 6min 葉綠體D 10000g x20min 線粒體、溶酶體、微體E 105000g x120min 微粒體F 105000g x 20min +0.26% 脫氧膽酸納核糖體三、試驗用品1材料：新奇的嫩菠菜,臨用前先暗置過夜,目的是排除淀粉的積存；最好 45冷藏；2試劑：蒸餾水, 0.35mol/L 氯化鈉溶液, 0.4mol/L 蔗糖溶液, 0.0 1%吖啶橙,最好 45冷藏；3器材：立式冰凍高速離心機、組織勻漿機、光學顯微鏡、熒光顯微鏡、天

22、平、研缽、漏斗、 50mL 離心管、紗布、載玻片、蓋玻片等；四、試驗步驟一、葉綠體的提取1新奇嫩菠菜葉洗凈擦干去除葉梗、葉脈,稱2克于放入勻漿器中,加入8mL0.35mol/L 氯化鈉溶液；同樣稱 2克于放入勻漿器中,加入 8mL 0.4mol/L 蔗糖溶液,作對比試驗,貼好標簽；2利用搗碎機低速（ 5000r/min）勻漿, 35min,或快速研磨成勻漿；3將勻漿液用 6 層紗布過濾于 50mL 小燒杯中,4取 6ml 慮液 1000r/min 離心 2min（去除組織殘渣和未被破裂的細胞） ,棄去沉淀；5取上清液在 3000r/min 離心 5min,棄去上清液,保留沉淀（沉淀即為葉 綠體

23、,混有部分細胞核）；6沉淀用大約 1mL0.35mol 氯化鈉溶液懸??；7取葉綠體懸液一滴置于載玻片上,蓋上蓋波片,光學顯微鏡下觀看；8如使用熒光顯微鏡觀看 熒光顯微鏡使用方法 時,將葉綠體懸液滴在無 熒光的載玻片上, 再滴加 1 滴 0.01%吖啶橙熒光染料, 蓋上無熒光的蓋玻片后即 可觀看；【試驗結(jié)果】一般光鏡下, 可看到葉綠體為綠色橄欖形,在高倍鏡下可看到葉綠體內(nèi)部含有較深的綠色小顆粒,即基粒；在選用 B（blue蘭色）激發(fā)濾片的條件下,葉綠體發(fā)出火紅色熒光；加入吖啶橙后, 葉綠體發(fā)出橘紅色熒光, 其中混有的細胞核就發(fā)綠色熒光；二、菠菜葉徒手切片觀看1新奇菠菜葉用刀片切出一斜面置于載玻片

24、上,滴加12 滴 0.35mol/L氯化鈉溶液,蓋上蓋片顯微鏡下觀看,可以看到三種細胞：（1）表皮細胞：為邊緣呈鋸齒形的鱗片狀細胞；（2）保衛(wèi)細胞：為構(gòu)成氣孔的成對存在的腎形細胞；（3）葉肉細胞：為排成柵狀的長形和橢圓形細胞,葉綠體呈綠色橄欖形；保衛(wèi)細胞長形的柵欄細胞橢圓形的海綿細胞葉綠體橄欖形【試驗報告】1. 繪出各種情形下觀看到的葉綠體、氣孔、表皮細胞的生物圖,并對外形、顏 色加以說明；2觀看經(jīng)過加熱和未加熱這兩種葉綠體在外形上的區(qū)分,并繪出草圖；3. 測量葉綠體的長軸和短軸,分別測量510個葉綠體,求其平均值；摸索題： l葉綠體分別的試驗原理是什么？2在分別葉綠體時應留意些什么問題？試驗

25、七細胞膜的通透性（必做）課前預習 1 在等滲溶液中細胞肯定能維護正常外形嗎？2猜測紅細胞在各種溶液中的溶血速度？一、試驗目的：明白相對分子質(zhì)量、 脂溶性大小、 電解質(zhì)和非電解質(zhì)對細胞膜通透性的影響；二、試驗原理：將紅細胞放入數(shù)種等滲溶液中,由于紅細胞膜具有挑選通透性,有的溶質(zhì)可 以進入細胞,有的不能進入, 滲入的物質(zhì)可以提高紅細胞的滲透壓,促使水分進 入細胞,使細胞膨脹,進而破裂,血紅蛋白釋放到介質(zhì)中,細胞溶液變?yōu)榧t色透 明的血紅蛋白溶液,這就是溶血現(xiàn)象；由于物質(zhì)進入細胞的速度不同,溶血時間就不同；因此, 發(fā)生溶血現(xiàn)象所需時間長短可作為測量物質(zhì)進入紅細胞速度的一種指標；測量指標：溶血時間1.

26、相對分子質(zhì)量大小對細胞膜通透性的影響1）紅細胞置于乙二醇、丙三醇（甘油） 、葡萄糖等摩爾濃度的高滲液中,乙 二醇等分子進入紅細胞,使細胞內(nèi)滲透壓提高,導致水分進入,細胞膨脹,細胞 膜破裂,細胞溶血；2）溶血的快慢與進入物質(zhì)的分子量大小有關(guān),相對分子質(zhì)量大的進入細胞 慢,發(fā)生溶血所需時間長；2. 脂溶性大小對細胞膜通透性的影響a 非極性化合物易溶于脂溶劑中, 但在水中的溶解度?。?碳鏈越長, 脂溶性越高；b 細胞膜是脂類雙分子層, 脂溶性大的物質(zhì)簡單通過細胞膜,對細胞的通透性高；c 安排系數(shù)：一種化合物在脂溶劑中的溶解度與其在水中的溶解度之比,稱為分配系數(shù)；3. 電解質(zhì)和非電解質(zhì)溶液對細胞膜通透

27、性的影響1 等滲系數(shù)：具有相同滲透壓的某非電解質(zhì)與某電解質(zhì)溶液濃度之比；2 i葡萄糖的等滲物質(zhì)的量濃度/ NaCL 的等滲物質(zhì)的量濃度；3 等滲濃度：發(fā)生溶血者為低滲液,把發(fā)生溶血的前一管溶液的濃度近似視為紅細胞等滲濃度；三、試驗用品材料：雞血器材： 50ml 燒杯、滴管、試管、試管架 , 阿氏液（ Alsever s 液）試劑： 0. 17mol/L 氯化鈉 0. 17mol/L 氯化銨0. 17mol/L 硝酸鈉 0. 17mol/L 醋酸銨0. 12mol/L 硫酸鈉 0. 12mol/L 草酸銨0. 32mol/L 葡萄糖 0. 32mol/L 甘油0. 32mol/L 乙醇 0. 9

28、%生理鹽水阿氏液： 葡萄糖 2. 02g, 氯化鈉 0. 42g,檸檬酸鈉 0. 80g,檸檬酸 0. 055g,蒸餾水加到 100ml,滅菌, 0-4儲存兩周四、試驗步驟：1、雞紅細胞的制備：從集市買一只活雞現(xiàn)殺取血 雞血（一份雞血加兩份阿氏液）混勻,離心（ 2022rpm）10棄上清液,取沉淀 加 0.9%生理鹽水,至 10ml離心（2022rpm）10,重復 4-5 次 棄上清液,取沉淀 制成 2% 雞紅細胞備用（用生理鹽水稀釋）；2）溶血現(xiàn)象的觀看： 取試管一支,加入5ml 蒸餾水,再加入 0.5ml 制備好的雞血, 留意觀看溶液顏色的變化,由不透亮的紅色逐步澄清；紅細胞發(fā)生破裂,造成

29、 100%紅細胞溶血,使光線比較簡單透過溶液；（將試管貼靠在書上, 隔著試管看書中的字, 如發(fā)覺溶血就文字可看清晰） ；3）紅細胞的滲透性：（1）取試管一支,加入 017mol/L 氯化鈉溶液 5ml,再加入 0.5ml 制備的雞血,輕輕搖動,留意是否有顏色變化？是否有溶血現(xiàn)象？為什么？4）溶血情形判定（1）不溶血（） 液體分 2 層,上層淺黃色透亮,下層紅色不透亮,鏡檢紅細胞完好；（2）不完全溶血 （或）（3）完全溶血 （）溶液渾濁,上層變紅色,鏡檢部分紅細胞破裂 液體變紅而透亮,鏡檢發(fā)覺紅細胞全部呈碎片；（將試管貼靠在書上, 隔著試管看書中的字, 文字看得清清晰楚 完全溶血）；文字看得不是

30、很清晰 不完全溶血觀察黑乎乎的行,很糊涂不溶血六、細胞膜滲透性試驗結(jié)果比較和分析試管編號所加試劑和濃度是否溶血時 間結(jié)果分析1 017mol/L 氯化鈉2 017mol/L 硝酸鈉3 012mol/L 硫酸鈉4 017mol/L 氯化銨5 017mol/L 醋酸銨6 012mol/L 草酸銨7 032mol/L 葡萄糖8 032mol/L 甘油9 032mol/L 乙醇10 032mol/L 丙酮七、留意事項：1.雞紅細胞的稀釋要用 血的體積相等；0.9%生理鹽水,加入的生理鹽水體積與第一步取的雞2.離心機使用時,要將配平后的離心管對稱放置在離心機內(nèi),禁止未配平就放入離心機和非對稱放置離心管；

31、八、試驗報告1怎樣依據(jù)細胞膜滲透性試驗結(jié)果分析確定物質(zhì)進入細胞的速度？2物質(zhì)進入細胞的快慢有什么規(guī)律？試驗八植物凝集素對紅細胞的凝集作用（必做）課前預習 ：土豆凝集素的本質(zhì)及其使紅細胞凝集的原理？一、試驗目的 明白細胞糖被的特點和功能,明白植物凝集素的作用 二、試驗原理細胞膜表面的有分支狀糖外被,細胞間的聯(lián)系、細胞的生長和分化、免疫 反應、腫瘤的發(fā)生等都和細胞表面的分支狀糖分子有關(guān)；凝集素（lectin）是一 類含糖并能與糖分子專一結(jié)合的蛋白質(zhì),它具有凝集細胞和刺激細胞分裂的作 用；凝集素使細胞凝集是由于它與細胞表面的糖分子連接,在細胞表面間形成“ 橋” 的結(jié)果,加入與凝集素互補的糖可以抑制細

32、胞的凝集；三、試驗用品1材料： 土豆塊莖,一只雞（采血）2器材和儀器： 顯微鏡、載片、雙凹片、蓋玻片、天平、滴管、小燒杯、移液管、離心管、試管和試管架3試劑：0.9生理鹽水、 2雞紅細胞、 PBS緩沖液、阿氏液（ Alsever液）硫酸胺（約 0.4 g/ml ）四、方法步驟1制備 2% 紅細胞懸浮液：雞血（一份雞血加兩份阿氏液）混勻,離心（ 2022rpm）10 棄上清液,取沉淀 加 0.9%生理鹽水,至 10ml 離心（ 2022rpm）10,重復 4-5次 棄上清液,取沉淀制成 2% 雞紅細胞備用（用生理鹽水稀釋）；2 制備土豆凝集素液： 稱取土豆去皮塊莖 20g , 加100 mL P

33、BS緩沖液,浸泡2h,浸出的粗提液過濾,即為土豆凝集素液；3. 制備韭菜凝結(jié)素液：稱取韭菜葉片 4g 洗凈,剪碎 按 1：1（W/V）加入生理鹽水 （即 4ml）研磨成勻漿 過濾 濾液 5000r/min 離心 20 min 棄沉淀（轉(zhuǎn)移上清）上清液加硫酸胺（約 0.4 g/ml ）至 60%飽和度沉淀5000r/min 離心 20 min 沉淀用 0.25ml 磷酸緩沖液溶解；4凝集反應：a 載玻片上滴一滴 土豆凝集素液 ,再滴一滴 2紅細胞液,充分混勻,靜置2min, 低倍顯微鏡下觀看血球凝集現(xiàn)象；b 載玻片上滴一滴韭菜凝集素液, 再滴一滴 2紅細胞液 , 充分混勻,靜置2min, 低倍顯

34、微鏡下觀看血球凝集現(xiàn)象；c以 PBS 緩沖液加 2血細胞作對比試驗；五、試驗結(jié)果1 凝集素液 能使雞紅細胞凝集, PBS 對比液中紅細胞分散勻稱對比組：未凝血 試驗組：凝血五、試驗結(jié)果1. 繪圖表示血細胞凝集現(xiàn)象,并說明緣由；2. 比較馬鈴薯和韭菜凝集素的凝集成效并分析緣由；六、留意事項1. 韭菜的研磨肯定要到位； 2. 韭菜凝結(jié)素提取中硫酸銨的量肯定要適當過量 ,否就沉淀成效不好；詳細標準為加入硫酸銨后振搖溶解,至溶解后在離心管底部, 能看到少量過量的 硫酸銨；3. 離心機使用時, 要將配平后的離心管對稱放置在離心機內(nèi),禁止未配平 就放入離心機和非對稱放置離心管；七、試驗報告試驗九植物細胞的

35、有絲分裂（必做）一、試驗目的：1. 觀看植物細胞有絲分裂的過程,識別有絲分裂的不同時期；2. 初步把握制作根尖有絲分裂裝片的技術(shù),培育同學的動手才能；3. 把握繪制生物圖的方法；二、試驗原理：在植物體中, 有絲分裂常見于根尖、莖尖等分生區(qū)細胞；高等植物細胞有絲分裂的過程,分為分裂間期和有絲分裂期的前期、中期、后期、末期；可以用高倍顯微鏡觀看植物細胞有絲分裂的過程,依據(jù)各個時期細胞內(nèi)染色體 （或染色質(zhì)）的變化情形, 識別該細胞處于有絲分裂的哪個時期；細胞核內(nèi)的染色體簡單被堿性染料著色；三、試驗用具：1. 材料： 洋蔥根尖或蠶豆根尖2. 器材： 顯微鏡,載玻片,蓋玻片,玻璃皿,剪刀,鑷子,量筒（5

36、0ml）,燒杯（ 50ml、100ml）、青霉素瓶、滴瓶、吸管、培育皿、溫度計、紗布、吸水紙3. 試劑： 卡諾氏固定液（甲醇或95%乙醇 3 份,冰醋酸 1 份）、 1N HCl 龍膽紫（質(zhì)量分數(shù)為 0.01g/mL 或 0.02g/mL 溶液（或醋酸洋紅液）四、方法步驟1洋蔥根尖的培育 試驗課前的 34d,取洋蔥一個,留意：洋蔥要挑選底盤大,防止用新 采收的洋蔥；剝?nèi)ネ鈱永掀?用刀削去老根,不要削掉“ 根芽”；放在廣口瓶或燒杯上,瓶內(nèi)裝滿清水,放置在光照處；留意每天換水12 次,使洋蔥的底部總是接觸到水；待根長到 23cm 時,取生長健壯的根尖制片觀看；2裝片的制作1）解離： 剪取根尖 23

37、mm（最好在每天的 1014 點取根,因此時間是洋蔥根尖有絲分裂高峰期） ,立刻放入盛有質(zhì)量分數(shù)為15%的氯化氫溶液和體積分數(shù)為 95%的酒精溶液的混合液（ 1：1）的玻璃皿中,在室溫下解離 35min；2）漂洗： 待根尖酥松后,用鑷子取出,放入盛有清水的玻璃皿中漂洗約10min；3）染色： 把洋蔥根尖放進盛有質(zhì)量濃度為0.01g/mL 或 0.02g/mL 的龍膽紫溶液（或醋酸洋紅液）的培育皿中,染色 35min；4）制片： 取一潔凈載玻片,在中心滴一滴清水,將染色的根尖用鑷子取出,放入載玻片的水滴中,并且用鑷子尖把根尖弄碎,蓋上蓋玻片,在蓋玻片再加一載玻片； 然后,用拇指輕輕地壓載玻片；

38、取下后加上的載玻片, 既制成裝片；3洋蔥根尖有絲分裂的觀看 1）低倍鏡觀看： 把制成的洋蔥根尖裝片先放在低倍鏡下觀看,要求找到分 生區(qū)的細胞,它的特點是：細胞呈正方形,排列緊密,有的細胞正在分裂；2）高倍鏡觀看： 找到分生區(qū)的細胞后,把低倍鏡移走,直接換上高倍鏡,用細準焦螺旋和反光鏡把視野調(diào)整的既清晰又較亮,直到看清細胞物象為止； 仔細觀看,找處處于有絲分裂的前期、中期、后期、末期和間期的細胞；留意： 觀看時,應依據(jù)有絲分裂各時期的特點,認真辨認；由于間期長,視 野中多數(shù)細胞均處于此時期, 易于觀看；其它時期,可先找出細胞分裂期的中期,然后再找到前期、后期、末期的細胞；認真觀看各個時期內(nèi)染色體的變化特點；在同一視野中,很難找全各個時期的細胞,可以漸漸地移動裝片查找；五、繪圖 在觀看清晰有絲分裂各個時期的細胞以后,繪出洋蔥根尖細胞有絲分裂的 各個時期的簡圖； 要求重點：繪植物細胞有絲分裂中期、 后期圖（含 4 個染色體）；六、結(jié)論 洋蔥根尖細胞有絲分裂過程中各個時期的染色體變化有什么特點？七、爭論 制作洋蔥根尖細胞有絲分裂裝片的關(guān)鍵是什么？解離的目的是什么？漂洗的目的呢？壓片的目的是什么？試驗十 雞血細胞