微生物檢驗操作要求

1、.：.；食品衛(wèi)生微生物檢驗實驗室操作要求食品微生物實驗室任務人員，必需有嚴厲的無菌觀念，許多實驗要求在無菌條件下進展，主要緣由：一是防止實驗操作中人為污染樣品，二是保證任務人員平安，防止檢出的致病菌由于操作不當呵斥個人污染。 一、無菌操作要求 1. 接種細菌時必需穿任務服、戴任務帽。 2. 進展接種食品樣品時，必需穿公用的任務服、帽及拖鞋，應放在無菌室緩沖間，任務前經(jīng)紫外線消毒后運用。 3. 接種食品樣品時，應在進無菌室前用肥皂洗手，然后用75酒精棉球?qū)⑹植粮蓛簟?4. 進展接種所用的吸管，平皿及培育基等必需經(jīng)消毒滅菌，翻開包裝未運用完的器皿，不能放置后再運用，金屬器具應高壓滅菌或用95%酒精

2、點熄滅灼三次后運用。 5. 從包裝中取出吸管時，吸管尖部不能觸及外露部位，運用吸管接種于試管或平皿時，吸管尖不得觸及試管或平皿邊。 6. 接種樣品、轉(zhuǎn)種細菌必需在酒精燈前操作，接種細菌或樣品時，吸管從包裝中取出后及翻開試管塞都要經(jīng)過火焰消毒。 7. 接種環(huán)和針在接種細菌前應經(jīng)火焰燒灼全部金屬絲，必要時還要燒到環(huán)和針與桿的銜接處，接種結(jié)核菌和烈性菌的接種環(huán)應在沸水中煮沸5min，再經(jīng)火焰燒灼。 8. 吸管汲取菌液或樣品時，運用相應的橡皮頭汲取，不得直接用口吸。 二、無菌間運用要求 1. 無菌間通向外面的窗戶應為雙層玻璃，并要密封，不得隨意翻開，并設有與無菌間大小相應的緩沖間及推拉門，另設有0.5

3、-0.7m2的小窗，以備進入無菌間后傳送物品。 2. 無菌間內(nèi)應堅持清潔，任務后用2%-3%煤酚皂溶液消毒，擦拭任務臺面，不得存放與實驗無關的物品。 3. 無菌間運用前后應將門關緊，翻開紫外燈，如采用室內(nèi)懸吊紫外燈消毒時，需30W紫外燈，間隔 在1.0m處，照射時間不少于30min，運用紫外燈，應留意不得直接在紫外線下操作，以免引起損傷，燈管每隔兩周需用酒精棉球悄然擦拭，除去上面灰塵和油垢，以減少紫外線穿透的影響。 4. 處置和接種食品標本時，進入無菌間操作，不得隨意出入，如需求傳送物品，可經(jīng)過小窗傳送。 5. 在無菌間內(nèi)如需求安裝空調(diào)時，那么應有過濾安裝 三、消毒滅菌要求 微生物檢測用的玻璃

4、器皿、金屬器具及培育基、被污染和接種的培育物等，必需經(jīng)滅菌后方能運用。 一干熱和濕熱高壓蒸氣鍋滅菌方法 1滅菌前預備 1一切需求滅菌的物品首先應清洗晾干，玻璃器皿如吸管、平皿用紙包裝嚴密，如用金屬筒應將上面通氣孔翻開。 2裝培育基的三角瓶塞，用紙包好，試管蓋好蓋，注射器須將管芯抽出，用紗布包好。 2裝放 1干熱滅菌器：裝放物品不可過擠，且不能接觸箱的四壁。 2大型高壓蒸氣鍋：放置滅菌物品分別包扎好，直接放入消毒筒內(nèi)，物品之間不能過擠。 3設備檢查 1檢查門的開關能否靈敏，橡皮圈有無損壞，能否平整。 2檢查壓力表蒸氣排盡時能否停留在零位，關好門和蓋，通蒸氣或加熱后，察看能否漏氣，壓力表與溫度計所

5、標示的情況能否吻合，管道有無堵塞。 3對有自動電子程序控制安裝的滅菌器，運用前應檢查規(guī)定的程序，能否符合于進展滅菌處置的要求。 4滅菌處置 (1) 干熱滅菌法：此法順應于在干熱情況下，不損壞、不蛻變、不蒸發(fā)的物品、較常用于玻璃器皿、金屬制品、陶瓷制品等的滅菌。 器械器皿應清洗后再干烤，以防附著在外表的污物炭化。 滅菌時安放物品不能過擠，不要直接接觸底和箱壁，物品之間留有空隙。 菌時將箱門關緊，接上電源，先將排氣孔翻開約30min，排除滅菌器中的冷空氣，溫度升至160調(diào)理指示燈，維持1.5 2h。 滅菌終了后或溫度升溫過程中，須在60以下才干翻開箱門。 (2) 手提式高壓鍋或立式壓力蒸氣滅菌器的

6、運用應按以下步驟進展： 手提式高壓鍋在主體內(nèi)參與3L清水，立式高壓鍋加水16L反復運用時應將水量補足，水變混濁需改換. 手提式壓力鍋將頂蓋上的排氣管插入消毒桶內(nèi)壁的方管中無軟管或軟管銹蝕破裂的滅菌器不得運用。 蓋好頂蓋擰緊，勿使漏氣；置滅菌器于火源上加熱，立式壓力鍋通上電源，并翻開頂蓋上的排氣閥放了冷氣水沸騰后排氣10-15min。 封鎖排氣閥，使蒸氣壓上升到規(guī)定要求，并維持規(guī)定時間按滅菌物品性質(zhì)與有關情況而定。 到達規(guī)定時間后，對需枯燥的物品，立刻翻開排氣閥排出蒸氣，待壓力恢復到零時，自然冷卻至60后開蓋取物，如為液體物品，不要翻開排氣閥，而應立刻將鍋去除熱源，待自然冷卻，壓力恢復至零，溫度

7、降到60以下 再開蓋取物，以防忽然減壓液體猛烈沸騰或容器爆破。 (3) 臥式壓力鍋蒸氣滅菌器的運用按以下步驟進展： 關緊鍋門，翻開進氣閥，將蒸氣引入夾層進展預熱，夾層內(nèi)冷空氣經(jīng)阻氣器自動排出。 夾層到達預定溫度后，翻開鍋室進氣閥，將蒸氣引入鍋室，鍋室內(nèi)冷空氣經(jīng)鍋室阻氣器自動排出。 待鍋室到達規(guī)定的壓力與溫度時，調(diào)理進氣閥，使堅持恒定至 自然或人工降溫至60再開門取物，不得運用快速排出蒸氣法，以防忽然降壓，液體猛烈沸騰或容器爆破。 運用自動程序控制式壓力蒸氣滅菌器，在放好物品關緊門后，應根據(jù)物品類別按動相應開關，以便按要求程序自動進展滅菌，滅菌時必需利用附設儀表記錄溫度與時間以備查，操作要求應嚴

8、厲按照廠家闡明書進展。 5滅菌溫度與時間(1) 干熱滅菌器滅菌溫度160，1.5-2h。(2) 壓力蒸氣滅菌鍋滅菌溫度與時間 二間歇滅菌方法 1.滅菌方法系利用不加壓力的蒸氣滅菌，某些物質(zhì)經(jīng)高壓蒸氣滅菌容易破壞，可用此法滅菌。 1將欲滅菌物品置于鍋內(nèi)，蓋上頂蓋，翻開排水口，使器內(nèi)余水排盡。 2封鎖排水口，翻開進氣門，根據(jù)需求消毒1020min。 3滅菌終了封鎖進氣門，取出物品待冷至室溫溫度，放入37溫箱過夜，次日仍按上述方法消毒，如此三次，即可到達滅菌目的。 2血清凝固器運用方法，培育基中含有血清或雞蛋特殊成份時，因高熱會破壞其營養(yǎng)成份，故用低溫，可使血清凝固，又可到達滅菌目的。 (1) 在運

9、用該法滅菌的血清等分裝時，需嚴厲遵守無菌操作，試管、平皿也經(jīng)滅菌后運用。 (2)將培育基按要求使成斜面或高層，加足水后，接上電源，升溫75901h滅菌，放37溫箱過夜，再如此滅菌三次。 3煮沸消毒：可用煮鍋或煮沸消毒器，水沸騰后再煮515 min，也可在水中參與2石炭酸煮沸5 min，參與0.02甲醛, 80煮60 min均可到達滅菌目的, 但選用煮沸消毒的增消劑時, 應留意對物品的腐蝕性. 4滅菌處置:滅菌后物品,按正常情況已屬無菌,從滅菌器中取出應仔細檢查放置,以免再度污染。 (1) 物品取出,隨即檢查包裝的完好性,假設有破壞或棉塞脫掉,不可作為無菌物品運用。 (2) 取出的物品,如為包裝

10、有明顯的水浸者,不可作為無菌物品運用。 (3) 培育基或試劑等,應檢查能否符合到達滅菌后的色澤或形狀,未到達者應廢棄。 (4) 啟閉式容器,在取出時應將篩孔封鎖。 (5) 取出的物品掉落在地或誤放不潔這處,或沾有水液,均視為遭到污染,不可作為無菌物品運用。 (6) 取出的合格滅菌物品,應存放于貯藏室或防塵柜內(nèi),嚴禁與未滅菌物品混放。 (7) 凡屬合格物品,應標有滅菌日期及有效期限。 (8) 每批滅菌處置完成后,記錄滅菌品名、數(shù)量、溫度、時間、操作者。 四、有毒有菌污物處置要求 微生物實驗所用實驗器材、培育物等未經(jīng)消毒處置，一概不得帶出實驗室。 1. 經(jīng)培育的污染資料及廢棄物應放在嚴密的容器或鐵

11、絲筐內(nèi)，并集中存放在指定地點，待一致進展高壓滅菌。 2. 經(jīng)微生物污染的培育物，必需經(jīng)12130min高壓滅菌。 3. 染菌后的吸管，運用后放入5煤酚皂溶液或石炭酸液中，最少浸泡24h消毒液體不得低于浸泡的高度再經(jīng)12130 min高壓滅菌。 4. 涂片染色沖洗片的液體，普通可直接沖入下水道，烈性菌的沖洗液必需沖在燒杯中，經(jīng)高壓滅菌后方可倒入下水道，染色的玻片放入5煤酚皂溶液中浸泡24 h后，煮沸洗滌。做凝集實驗用的玻片或平皿，必需高壓滅菌后洗滌。 5. 打碎的培育物，立刻用5煤酚皂溶液或石炭酸液噴灑和浸泡被污染部位，浸泡半小時后再擦拭干凈。 污染的任務服或進展烈性實驗所穿的任務服、帽、口罩等

12、，應放入公用消毒袋內(nèi)，經(jīng)高壓滅菌后方能洗滌。 五、培育基制備要求 培育基制備的質(zhì)量將直接影響微生物生長。由于各種微生物對其營養(yǎng)要求不完全一樣，培育目的的不同，各種培育基制備要求如下： 1根據(jù)培育基配方的成分按量稱取，然后溶于蒸餾水中，在運用前對運用的試劑藥品應進展質(zhì)量檢驗。 2PH測定及調(diào)理：PH測定要在培育基冷至室溫時進展，因在熱或冷的情況下，其PH有一定差別，當測定好時，按計算量參與堿或酸混勻后，應再測試一次。培育基PH值一定要準確，否那么會影響微生物的生長或影響結(jié)果的察看。但需留意因高壓滅菌可影響一些培育基的PH降低或升高，故不宜滅菌壓力過高或次數(shù)太多，以免影響培育基的質(zhì)量，指示劑、去氧

13、膽酸鈉、瓊脂等普通在調(diào)完PH后再參與。 3培育基需堅持廓清，便于察看細菌的生長情況，培育基加熱煮沸后，可用脫脂棉花或絨布過濾，以除去沉淀物，必要時可用雞蛋白廓清處置，所用瓊脂條要預先洗凈晾干后運用，防止因瓊脂含雜質(zhì)而影響透明度。 4盛裝培育基不宜用鐵、銅等容器，運用洗凈的中性硬質(zhì)玻璃容器為好。 5培育基的滅菌既要到達完全滅菌目的，又要留意不因加熱而降低其營養(yǎng)價值，普通12115min即可，如為含有不耐高熱物質(zhì)的培育基如糖類、血清、明膠等，那么應采用低溫滅菌或間歇法滅菌，一些不能加熱的試劑如亞碲酸鉀、卵黃、TTC、抗菌素等，待根底瓊脂高壓滅菌后涼至50左右再參與。 6每批培育基制備好后，應做無菌

14、生長實驗及所檢菌株生長實驗。假設是生化培育基，運用規(guī)范菌株接種培育，察看生化反響結(jié)果，應呈正常反響，培育基不應儲存過久，必要時可置4冰箱存放。 7目前各種枯燥培育基較多，每批需用規(guī)范菌株進展生長實驗或生化反響察看，各種培育基用相應菌株生長實驗良好后方可運用，新購進的或存放過久的枯燥培育基，在配制時也應測PH，運用時需根據(jù)產(chǎn)品闡明書用量和方法進展。 8每批制備的培育基所用化學試劑、滅菌情況及菌株生長實驗結(jié)果、制造人員等應做好記錄，以備查詢。 六、樣品采集及處置要求 1所采集的檢驗樣品一定要具有代表性，采樣時應首先對該批食品原料、加工、運輸、貯藏方法條件、周圍環(huán)境衛(wèi)生情況等進展詳細調(diào)查，檢查能否有

15、污染源存在。 2根據(jù)食品的種類及數(shù)量，采樣數(shù)量及方法應按規(guī)范檢驗方法的要求進展。 3采樣應留意無菌操作，容器必需滅菌，防止環(huán)境中微生物污染，容器不得運用煤酚皂溶液，用新潔爾滅、酒精等消毒藥物滅菌，更不能含有此類消毒藥物或抗生素類藥物，以防止殺死樣品中的微生物，所用剪、刀、匙器具也需滅菌方可運用。 4樣品采集后應立刻送往檢驗室進展檢驗，送檢過程中普通不超越3h，如路程較遠，可保管在15環(huán)境中，如需冷凍者，那么在凍存形狀下送檢。 5檢驗室收到樣品后，進展登記樣品稱號、送檢單位、數(shù)量、日期、編號等，察看樣品的外觀，假設發(fā)現(xiàn)有以下情況之一者，可回絕檢驗。 (1) 樣品經(jīng)過特殊高壓、煮沸或其他方法殺菌者，失去代表原食品檢驗意義者。 (2) 瓶、袋裝食品已啟開者，熟肉及其制品、熟禽等食品已折碎不完好者，即失去原食品外形者食物中毒樣品除外。 (3) 按規(guī)定采樣數(shù)量缺乏者。 對送檢符合要求的樣品，檢驗室收到后，應立刻進展檢驗，假設條件不具備，應置4冰箱存放，及時預備發(fā)明條件，然后進展檢驗。 6樣品檢驗時，根據(jù)其不同性狀，進展適當處置。 (1) 液體樣品接種時，應充分混合均勻，按量汲取進展接種。 (2) 固體樣品，用滅