細(xì)菌培養(yǎng)與革蘭氏染色

1、細(xì)菌培養(yǎng)與革蘭氏染色1.細(xì)菌革蘭氏染色法了解革蘭氏染色原理 掌握革蘭染色的方法 Click to add title in here 12一.實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩?shí)驗(yàn)材料菌種：大腸桿菌、土壤提取菌染料：草酸銨結(jié)晶紫液、盧戈氏碘液 95乙醇、番紅染液其他：顯微鏡、載玻片、接種環(huán)、酒精燈、無(wú)菌生理鹽水 三、基本原理革蘭氏染色法是細(xì)菌學(xué)中廣泛使用的一種鑒別染色法。1884年由丹麥醫(yī)師Gram創(chuàng)立。細(xì)菌先經(jīng)堿性染料結(jié)晶紫染色，再經(jīng)碘液媒染后，用酒精脫色，在一定條件下有的細(xì)菌紫色不被脫去，有的可被脫去，因此可把細(xì)菌分為兩大類，前者叫做革蘭氏陽(yáng)性菌（G+），后者為革蘭氏陰性菌（G-）。為觀察方便，脫色后再用一種紅

2、色染料，如堿性番紅等進(jìn)行復(fù)染。陽(yáng)性菌仍帶紫色，陰性菌則被染上紅色。一般認(rèn)為革蘭氏陽(yáng)性菌體內(nèi)含有特殊的核蛋白質(zhì)鎂鹽與多糖的復(fù)合物，它與碘和結(jié)晶紫的復(fù)合物結(jié)合很牢，不易脫色，陰性菌復(fù)合物結(jié)合程度低，吸附染料差，易脫色，這是染色反應(yīng)的主要依據(jù)。基本原理四、方法與步驟操作過(guò)程如下：涂片 干燥 固定 草酸銨結(jié)晶紫染色（約1min） 水洗 盧戈氏碘液媒染（約1min） 水洗 95%乙醇脫色（約30s） 水洗 番紅復(fù)染（1min） 水洗 干燥 鏡檢方法與步驟關(guān)鍵點(diǎn)： 嚴(yán)格掌握乙醇脫色程度，如脫色過(guò)度，則陽(yáng)性菌被誤染為陰性菌；而脫色不夠時(shí)，陰性菌被誤染為陽(yáng)性菌； 菌齡也影響染色結(jié)果，如陽(yáng)性菌培養(yǎng)時(shí)間很長(zhǎng)，或已

3、死亡及部分自行溶解了，都常呈陰性反應(yīng)。方法與步驟五、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1.對(duì)大腸桿菌、土壤提取菌分別進(jìn)行革蘭氏染色。2.對(duì)大腸桿菌、土壤提取菌混合涂片進(jìn)行革蘭氏染色。革蘭氏陰性（G-）實(shí)驗(yàn)內(nèi)容枯草芽孢桿菌（G+）實(shí)驗(yàn)內(nèi)容陽(yáng)性菌實(shí)驗(yàn)內(nèi)容一種未知的霉菌二、細(xì)菌培養(yǎng)法實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、學(xué)習(xí)和掌握細(xì)菌分離與培養(yǎng)的各種基本技術(shù)2、進(jìn)一步熟悉和掌握微生物的無(wú)菌操作技術(shù)實(shí)驗(yàn)儀器和材料1、儀器：接種環(huán)、酒精燈、記號(hào)筆、試管架等2、材料：普通瓊脂平板培養(yǎng)基、斜面培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基、大腸桿菌菌落、土壤提取菌落2.細(xì)菌培養(yǎng)法平板劃線法斜面培養(yǎng)法液體培養(yǎng)法本實(shí)驗(yàn)的細(xì)菌培養(yǎng)法細(xì)菌培養(yǎng)平板劃線接種法步驟： 標(biāo)記滅菌接種環(huán)取菌種分離劃線接種細(xì)菌（分為四個(gè)區(qū)域） 劃線完畢，放入恒溫箱培養(yǎng)平板劃線接種法恒溫箱培養(yǎng)斜面培養(yǎng)基接種法步驟：標(biāo)記滅菌接種環(huán)兩斜面并持接種細(xì)菌接種完畢，恒溫培養(yǎng)（注意無(wú)菌操作）斜面培養(yǎng)基接種法液