大型生化分析儀上崗考試培訓

1、與自動生化分析儀使用相關(guān)內(nèi)容的培訓培訓內(nèi)容：第二單元 全自動生化分析儀的分類第三單元 全自動生化分析儀的基本結(jié)構(gòu)第四單元 全自動生化分析儀安裝準備第五單元 全自動生化分析儀的分析參數(shù)的設(shè)置徐國賓北京大學第一醫(yī)院檢驗,100034Tel2054/2042第二單元 全自動生化分析儀的分類 傳統(tǒng)的臨床檢驗，包括生化檢驗多是手工勞動。 要求技術(shù)人員: 技能嫻熟的， 操作專注， 勞動強度大， 工作效率低， 操作結(jié)果存在明顯的個人差異, 可比性和質(zhì)量受到影響。 不適應臨床醫(yī)學的發(fā)展。 二十世紀的60年代，醫(yī)學檢驗自動化在發(fā)達國家已初見端倪。 電子學 光學 計算機和網(wǎng)絡(luò)技術(shù) 生物

2、技術(shù) 酶和蛋白質(zhì)純化 抗體制備，特別是單克隆抗體的制備 加速了臨床檢驗自動化的進程。 我國 80年代：引進全自動生化分析儀， 90年代：引進自動免疫分析儀 全自動血球計數(shù)儀 尿液自動分析儀 微生物培養(yǎng)與鑒定 新千年：自主研發(fā)出自動生化分析儀 血球計數(shù)儀自動化遍及到醫(yī)學檢驗的所有領(lǐng)域。 根據(jù)自動化程度生化分析儀 半自動生化分析儀 全自動生化分析儀 一、半自動生化分析儀 網(wǎng)絡(luò)：提供信息最快技術(shù)/真?zhèn)?分析（一）主要技術(shù)指標分析過程中的部分操作：加樣加試劑 手工完成混勻吸入 比色孵育 自動完成結(jié)果計算 特點 體積小 結(jié)構(gòu)簡單 操作方便 普通檢查 （特種蛋白檢測有困難） 適合診所 吸樣廢液蠕動泵 比

3、色：石英鹵素燈； 比路士泵Peltier控溫反應液（吸液量）：500l左右微量流動比色池：數(shù)十微升恒溫器在數(shù)秒內(nèi)使反應平衡到要求的溫度溫度波動應：小于結(jié)果： 由顯示窗顯示 打印 通過接口將數(shù)據(jù)輸出測定方法： 動力學 兩點法 終點法檢測編排項目： 30-100（二）使用注意事項 1.儀器穩(wěn)定： 電壓，溫度，濕度 2.規(guī)定的清洗液清洗管道 實驗間隔，管道用一般情況：去離子水清洗 堿性液清洗 去離子水清洗特殊情況：去離子水清洗 酸性液清洗 去離子水清洗 3.*基于一級反應的動力學法測定項目 要嚴格掌握啟動反應即刻和吸樣并開始記錄吸光度的時間*基于零級反應的動力學法測定項目 （酶催化活性濃度）控制啟動

4、反應和吸樣并開始記錄吸光度的時間不能擅自縮短延遲時間*終點法測定注意到：顯色產(chǎn)物放置時間對測定具有影響*動力學測定法 代謝物 連續(xù)監(jiān)測法 酶活力濃度 注意到：在測定的延遲期內(nèi)底物消耗 溫度控制光源 比色杯 檢測器 數(shù)據(jù)處理 打印輸出 定量注加系統(tǒng) 樣本 試劑取樣、加試劑、混合、孵育反應、檢測、結(jié)果計算、清洗由儀器自動完成 二、全自動生化分析儀連續(xù)流動式（管道式）離心式分立式干式 管道式分析儀（流動式自動生化分析儀）是指測定項目相同的各待測樣品與試劑混合后的化學反應在同一管道流動的過程中完成分立式生化分析儀 儀器機械手向分立的比色皿中自動定量注加樣本和試劑，一定溫度下孵育反應分別進行比色測定。

5、“順序分析” 離心式自動生化分析儀 結(jié)構(gòu)特點: 化學反應器裝在離心機的轉(zhuǎn)子位置上 儀器機械臂自動將樣品和試劑分別置于轉(zhuǎn)頭中 的樣品槽和試劑槽中。 離心機開動后圓盤內(nèi)的樣品和試劑受離心力的 作用流入盤外比色槽中，混合發(fā)生反應，通過 比色計進行檢測。分析特點:基于“同步分析”的原理而設(shè)計 不是隨機任選式,按項目順序分析比色杯必須人工清洗水平測光和垂直測光兩種方式 A=ECL A=EC(TV/S) 干化學生化分析儀反應在固相載體上，測定的是折射光檢測系統(tǒng)進行檢測的一類儀器分為全自動、半自動生化分析儀檢測項目： 普通臨床生物化學檢驗 藥物檢測 蛋白測定 第三單元 自動生化分析儀的主要結(jié)構(gòu)1.樣品裝載裝

6、置 樣品盤 弧 樣品架 直 2.輸送裝置-傳送帶靠步進馬達驅(qū)動將試管架依次前移再單架逐管橫移至固定位置樣品分配臂采樣 3.取樣單元 組成：取樣針取樣臂取樣注射器前進馬達采樣針結(jié)構(gòu)特點：針的前端有液面?zhèn)鞲衅?防止空吸或深入采血管下層的凝血塊 采樣單元的故障高主要原因 血樣 表面有氣泡 未完全凝固就進行測定 極易導致加樣針阻塞 此樣本的測定值也假性降低；加樣針偏離正確位置 應經(jīng)常注意觀察樣品杯或樣品管口徑小 樣品管過細 取樣針扎偏：破壞采樣裝置4.注加試劑單元 組成：試劑針試劑瓶和試劑倉試劑臂取試劑注射器前進馬達構(gòu)試劑取樣針前端有液面?zhèn)鞲衅鳎悍乐箍瘴蜥樇馍钊朐噭┖械撞恳鹪噭┽樛獗谝后w掛淋。雙試

7、劑有第一試劑和第二試劑取樣單元。很多試劑內(nèi)具有表面活性物質(zhì)，操作不當，如震蕩試劑瓶，或加試劑的速度過快，試劑表面會有氣泡，此時試劑取樣針前端的液面?zhèn)鞲衅饕矔`以為取到樣品，致使測定結(jié)果的偏差。試劑瓶形狀及大小規(guī)格不同應根據(jù)工作量考慮試劑規(guī)格殘留試劑反復使用會影響結(jié)果的準確性要考慮試劑開蓋后在使用過程中的穩(wěn)定性不要在運行中添加、更換試劑封閉系統(tǒng)使用的試劑具有條形碼 儀器設(shè)有條形碼檢查系統(tǒng)，對試劑的種類、批號、規(guī)格、有效期等資料，進行核對校驗*注意事項：加樣臂和試劑臂的活動區(qū)不可放置任何物 品儀器在運行過程中不可用手調(diào)整任何部件， 以免發(fā)生穿刺傷 樣品和試劑的定量注加系統(tǒng)需要定期校正5.反應單元組

8、成：反應盤 混合裝置 溫控裝置 反應盤多為轉(zhuǎn)盤式按固定程序轉(zhuǎn)動反應和檢測同在比色杯中進行比色杯：石英玻璃 無紫外光吸收的塑料混合裝置 攪拌棒 攪拌棒具特氟隆不沾涂層 超聲波6.孵育反應溫控裝置孵育溫度的調(diào)控和恒定由計算機控制理想的孵育溫度波動應小于0.1 應該定期檢測（水浴裝置的控溫性能可自行檢測，采用國家計量院校準的溫度計測定水溫）保持恒溫的方式有三種空氣浴恒溫： 在比色杯與加熱器之間隔有空氣。空氣浴恒溫的特點是方便、速度快、不需要特殊材料，但穩(wěn)定性和均勻性與各廠家的設(shè)計有關(guān)。水浴循環(huán)恒溫式 在比色杯周圍充盈有水，加熱器控制水的溫度。水浴恒熱的特點是溫度恒定，但需特殊的防腐劑以保證水質(zhì)的潔凈

9、，且要定期更換循環(huán)水。恒溫液循環(huán)間接加熱式 比色杯周圍流動著一種特殊的恒溫液（具無味、無污染、惰性、不蒸發(fā)等特點）。比色杯和恒溫液之間有極小的空氣狹縫，恒溫液通過加熱狹縫的空氣達到恒溫。與水浴式循環(huán)式相比不需要特殊保養(yǎng)。7.清洗系統(tǒng)探針和攪拌棒采用激流式或瀑布式等方式自動沖洗。比色杯清洗裝置 吸液針 吐液針 擦拭刷 吸去杯壁上掛淋的水， 刷體內(nèi)部有負壓抽吸裝置 注意擦拭刷是否磨損樣本針 試劑針 攪拌棒 比色杯 清洗機構(gòu)（清洗針、清洗液、水）清洗工作流程吸出反應液（吸干）注入洗液（吸干） 堿性液沖洗 酸性液沖洗 去離子水沖洗三遍擦干應用生化分析儀的重要注意事項：啟用前： 正確安裝、調(diào)試 檢測方法

10、學的驗證 攜帶和交叉污染試驗及糾正啟用后： 正確使用、維護和保養(yǎng) 質(zhì)量控制攜 帶 污 染交 叉 污 染攜帶（交叉）污染 測試項目 A試劑殘留（試劑針、攪拌棒、比色杯） 干擾下一個測試 B樣本1(高濃度)項目樣本針(攜帶)污染干擾樣本2測定引發(fā)交叉污染的原因共有化 (試劑/樣本針/攪拌)處理能力提高( 犧牲沖洗的強度和時間為代價)使用/維護不當 污垢積聚 沖洗力低下(儀器/配件老化/欠維護)測定次序不當沖洗方式安排不當試劑組成樣本攜帶交叉污染查明及避免（樣本針）樣本：高值血清 ，1000倍稀釋血清 ，生理鹽水方法：按順序（129號）分析某一項目，如 LDH。平均值A(chǔ)平均值B交叉污染率（%）= 1

11、00 0.3%正常 AB10002135791164212224262818314681115171020232527121929避免樣本攜帶污染方法： 樣本針的檫拭 給出分析項目名稱/指定特殊清洗液試劑攜帶交叉污染 Amylase試劑 鈣 ALP試劑 鎂 鎂試劑 鐵 含磷酸鹽的緩沖液 磷 膽固醇試劑 膽汁酸 基于Trinder反應 基于Trinder反應 高含量測定項目(Glu) 高含量測定項目(Ua) 試劑廠家應提供特定儀器,一定試劑排序后,測定交叉污染; 實驗室的試劑排位與試劑廠家推薦的不同,或試劑生產(chǎn)企業(yè)未能夠提供試劑交叉污染試驗結(jié)果,應該自己,或請有經(jīng)驗的技術(shù)支持做交叉污染試驗; 避

12、免試劑交叉污染的方法調(diào)整通道（加樣）順序設(shè)置避免交叉污染程序, 選擇相關(guān)項目指定清洗液將有交叉污染的項目,放在不同儀器上選擇試劑間交叉污染少的測定試劑比色杯污染的查明及避免杯空白升高，杯間差變大殘留成分對下一分析的影響第1循環(huán)全部項目第2、3、4、5循環(huán)受干擾項目較大的偶然誤差,一般是由于殘留成分的影響比色杯交叉污染避免方法：常規(guī)操作中的清洗特殊清洗從試劑選擇上考慮常規(guī)清洗程序工作正常8比色系統(tǒng)(1)光源 鹵素燈,波長:325800nm氙燈,波長: 285750 nm 壽命長發(fā)光強度不夠時，儀器會自動報警，應及時更換 （2）比色杯 比色杯也是反應杯 光徑 材料：石英、硬質(zhì)玻璃或優(yōu)質(zhì)塑料 要定期

13、檢查清洗 及時更換不合格的比色杯（3） 單色器 各類自動生化分析儀應用的是可見-紫外吸收光譜法，即監(jiān)測200700nm光區(qū)某特定波長下發(fā)色基團吸光度的變化，輔以微機軟件系統(tǒng)的計算來完成測定 可見-紫外吸收光譜定量的基礎(chǔ)是Lamber-Beer定律。該定律說明的是一定濃度范圍內(nèi)吸光物質(zhì)對單色光吸收的強弱與該物質(zhì)的濃度之間的關(guān)系 A=-lgT=ECL 傳統(tǒng)的分光光度測定： 前分光 在光源燈和樣品杯之間先要用濾光片、棱鏡或光柵分光，通過可調(diào)的狹縫，取得與樣品“互補”的單色光之后，照射到樣品杯，再用光電池或光電管作為檢測器，測定樣量對單色光的吸收量 現(xiàn)代大多生化分析儀采用： 后分光測量技術(shù) 將一束白光

14、（混合光）先照到樣品杯，然后再用光柵分光，同時用一列發(fā)光二極管排在光柵后面作為檢測器。 后分光的優(yōu)點： 是不需移動儀器比色系統(tǒng)中的任何部件，可同時選用雙波長進行測定，這樣可降低比色的噪聲，提高分析的精確度。 單色器（分光裝置）：干涉濾光片光柵干涉濾光片： 插入式 可旋轉(zhuǎn)的圓盤式 插入式就是將需用的濾光片插入濾片槽中 圓盤式是將儀器配備的濾光片都安裝在圓盤中，使用時旋轉(zhuǎn)至所需濾光片處即可 干涉濾光片價格便宜，但易變潮霉變，從而影響檢測結(jié)果的準確性，半自動生化分析儀多采用此種濾光片光柵全息反射式 玻璃上覆蓋一層金屬膜后制成， 有一定程度的相差，易被腐蝕蝕刻式凹面 所選波長固定地刻制在凹面玻璃上，

15、耐磨損、抗腐蝕、無相差9.樣本條形碼識讀系統(tǒng) 樣本的唯一標識清楚 記錄樣本采集時間 記錄樣本接收時間 減少勞動強度 自動化的要求 依賴HIS的建設(shè)（醫(yī)生工作站）醫(yī)院主機急診看診門診看診 準備採血試管下醫(yī)囑令檢體處理 分派處急診掛號處門診掛號處分派工作令回傳檢驗報告值下醫(yī)囑令批價收費上傳檢驗報告值 LIS SERVER& DATABASE下載醫(yī)囑令下醫(yī)囑令批價收費病房看診查詢檢驗報告查詢檢驗報告查詢檢驗報告急診採血 準備採血試管中央採血室(採血)病房採血 準備採血試管 送病房信息流程條形碼識讀系統(tǒng)：掃描系統(tǒng)信號整形譯碼器 以光源掃射黑條/白空相間的條碼符號 （一維條碼） 由于黑條/白空對光的反射

16、不同 不同寬窄的條符反射光持續(xù)時間不同 產(chǎn)生強度不同的反射光 經(jīng)光電轉(zhuǎn)換元件接收并轉(zhuǎn)換成相應強度的電信號 最后通過信號整形，由譯碼器翻譯用于手工粘貼的普通條碼貼完條碼的試管 All-in-one 的概念條形碼格式與參數(shù)初步規(guī)劃：大小直/橫式參數(shù)內(nèi)容：姓名病歷號碼 性別年齡申請科別病房 優(yōu)先*申請單號樣本種類 抽血量日期時間注意事項 檢驗組別管別索引抗凝劑 保存期限 條形碼提供的信息臨床實驗室工作流程與自動化 前處理系統(tǒng)生化免疫樣品保存血球血凝尿原樣品分類樣品自動運送手工運送手工檢查外送樣品物理連接多個分析儀的系統(tǒng)第1代樸素設(shè)備連接數(shù)量與報告時間的關(guān)系報告時間連接分析儀數(shù)量大家的期望實際時間分析

17、報告時間連接分析儀數(shù)量實際的結(jié)果實際成本分析報告時間連接分析儀數(shù)量投入的資金物理連接多個分析儀的系統(tǒng)第1代樸素功能最大集成化的、模塊組合方式的連接系統(tǒng)（分析儀是一個模塊）第2代發(fā)展生化分析模塊組CentrifugeDecappingAliquottingReceptionlabelingSample sorting生物化學免疫學免疫學物理連接多個分析儀的系統(tǒng)第1代前處理功能最大集成化的、模塊組合方式的、物理連接系統(tǒng)（分析儀是一個模塊）第2代模塊組合方式非在線分析儀方式第3代第四單元 全自動生化分析儀安裝準備1. 自動生化分析儀工作環(huán)境的要求 儀器工作空間實驗室面積足夠大，以保證儀器的操作、保養(yǎng)

18、、維修的方便及各種配套設(shè)施（如純水機、UPS不間斷電源）電腦控制設(shè)備的安置。 儀器工作條件沒有陽光直接照射灰塵非常少平坦沒有震動地板承重為儀器重量的130%-140%接地電壓波動10%避免：化學腐蝕物品 灰塵 電磁輻射 溫度和濕度 溫度應控制在1830，工作時波動小于2，部分儀器內(nèi)設(shè)置了允許溫度范圍，當溫度超過允許范圍時儀器自動停止檢測。 濕度有嚴格要求，濕度過高可能引起儀器部件的生銹發(fā)霉等情況降低使用壽命或儀器不工作，過于干燥則可能引起靜電增加，灰塵吸附增加而干擾光路系統(tǒng)的穩(wěn)定性。電源的要求 應根據(jù)儀器對電源的要求和總負載量設(shè)計專用電路 要求始終連接符合要求的地線并連接UPS不間斷電源（最好

19、延時30分鐘以上）。 不正常狀態(tài)（如停電等）下的關(guān)機有可能降低儀器的使用壽命和測定數(shù)據(jù)的丟失。 2.自動生化分析儀的用水及處理 臨床檢驗中必須使用純水配置試劑和淋洗容器，完善的純水或精制水的來源才能獲得良好的實驗結(jié)果。 蒸餾水 蒸餾法是最早使用的純化水的方法，也是普遍使用的方法,但不是純化水的理想方法。這是因為用大蒸餾器制成的蒸餾水重金屬、無機物、懸浮物和微生物的污染較多，CO2不能去除。 蒸餾水的物理化學檢查見中國藥典二部。去離子水 原水通過陽離子交換柱時，原水中陽離子與柱中陰離子基團結(jié)合，氫離子被置換出來，當經(jīng)陽離子樹脂處理過的水流過陰離子交換柱時，水中陰離子滯留在柱中，柱中氫氧根被置換出

20、來，后者與H反應生成水。 RH + M+ RM +H （陽離子交換柱） ROH + X RX + OH （陰離子交換柱） H+ + OH H2O離子交換樹脂具一定壽命，使用期限與水中 所含雜質(zhì)量有關(guān)。經(jīng)過陰陽離子交換樹脂后的水應不含任何離 子，電阻可達18M/CM(25)，柱效高，電 阻也大。隨著使用時間的延長，純化水的電阻減少， 當下降到一定范圍（生化用水應0.5 M/CM），應更換離子交換柱。 目前多用混合式離子交換樹脂柱來純化水，即在柱內(nèi)裝有陽離子和陰離子交換樹脂的混合物。水通過混合床時逐步自動去除陰、陽離子。離子交換樹脂不能去除水中非電離狀態(tài)的有機物，懸浮顆粒和微生物。離子交換樹脂純化

21、水的方法不應單獨應用，而應放在經(jīng)蒸餾或反滲透裝備后面處理經(jīng)其初步純化過的水，以延長交換柱的壽命。反滲透水 反滲透是用加壓的方法使水滲透過極微 小的滲透膜 反滲透膜的孔徑約為，較細菌 （1m），病毒0.4m)要小 可過濾95%以上的溶解和非溶解的無機物、 重金屬、細菌、病毒顆粒； 裝置多放在離子交換柱前，為后者提供初 級純水。4.純水系統(tǒng)-超純水的制備國產(chǎn)純水系統(tǒng)可替代國外產(chǎn)品純水系統(tǒng)基本組成：聚酯纖維過濾柱5m活性碳過濾匣 去除有機物反滲透器 多級混合離子交換床懸浮粒子膜過濾單元反滲透-離子交換純水制備系統(tǒng)工作流程示意圖目前，對于生化分析儀用水尚無行業(yè)標準。但一般可從電阻或電導率、氯離子含量、

22、不揮發(fā)物、懸浮物和微生物、有機物幾個方面來檢測水的質(zhì)量。檢查方法參照中國藥典。臨床化學實驗室主張用水超純水，以保證實驗結(jié)果的準確性和儀器的正常運轉(zhuǎn)。 純水機技術(shù)指標：采用單片機控制，在線檢測超純水水質(zhì)當水質(zhì)低于要求時，水質(zhì)報警器可自動報警，提示用戶更換超純水柱高水位自動關(guān)機低水位自動開機自動監(jiān)測進水端壓力。當水壓不夠時，主機高壓泵自動停止工作，避免高壓泵空轉(zhuǎn)影響工作 進水壓要求反滲透膜自動沖洗在線監(jiān)測反滲透水電導率，以提示用戶及時更換反滲透膜水質(zhì)：1 M/CM，25產(chǎn)水量：40140L/h進水水源：自來水電阻率儀量程020 M/CM，分辨率0.1 M/CM第五單元 全自動生化分析儀的分析（測定

23、） 參數(shù)的設(shè)置原則 生化分析儀的參數(shù)即儀器工作的指令，操作者通過參數(shù)控制儀器完成一系列復雜而有序的操作程序。 參數(shù)種類很多，有些參數(shù)是在生產(chǎn)制造中設(shè)置好的，如分析儀的一些通用操作，取樣、沖洗、檢測、數(shù)據(jù)處理等，其程序均已經(jīng)固化在存儲器里，用戶不能修改，只需選擇即可工作。 另外一些參數(shù)屬于測試項目的指令，即測定參數(shù) 臨床化學量值溯源的目標新鮮血清不同實驗室測定結(jié)果準確、一致 在我國目前臨床化學常規(guī)測定中，使用的分析系統(tǒng)一般有兩種。 一種是使用原廠家提供的試劑、校準品和儀器，即所謂的“封閉系統(tǒng)”。 這類系統(tǒng)的測定參數(shù)固化在儀器中，除由于批號改變需要更改校準的定值外，其他測定參數(shù)一般勿需更改。 商品

24、試劑帶有與之配套的校準品，這類商品試劑規(guī)定了不同型號生化分析儀的測定參數(shù)，以保證測定結(jié)果的量值溯源。 這一類測定系統(tǒng)稱為“開放的配套系統(tǒng)”。為了保證測定結(jié)果的溯源符合試劑出品商的聲明，必須嚴格按照試劑說明書輸入測定參數(shù)。 Why?如果校準品基質(zhì)效應小，具有互通性，那：如果校準品有基質(zhì)效應，則需要通過比對的方法確定indirect standardisation via human pool seraReferenceReference method human seraRoutine methodReference standardisation of master calibrator(母校

25、正品定值方案 1)Routine method with Master-lot calibrator Reference method / material5 human pool sera master calibratorMaster-lot calibrator is mathematically adjustedvia the formula y = ax + b so that slope (a) = 1 and intercept (b) = 0indirect standardisation via human pool seraSales calibratorMaster ca

26、libratorRoutine method concentration cRoutine method absorbance AValue assignment in calibrator sales lotsThe sales lots are assigned as unknown samples with the master lot calibrator on analyzer with the routine method主（母）校準品賦值兩條途徑 使用人混合血清，通過與參考方法的方法學比較的間接校準。使用一級標準 (參考物質(zhì) 如. NIST)的直接校準。picture place

27、holder 用于對商品校準品和控制品的賦值。 源于常規(guī)產(chǎn)品的一個生產(chǎn)批號，與商品校準品具有相同基質(zhì)。 儲存于-80穩(wěn)定約2年。工廠母校準品（Master Calibrator）又：主校準品小結(jié)：必須嚴格按照廠家提出的要求，正確輸入測定參數(shù)；與特定系統(tǒng)配套的校準品不可用于其它測定系統(tǒng)。否則，會影響到測定的準確性。 測試項目參數(shù)有很多，根據(jù)功能可以將其分為三個部分 檢測參數(shù) 校準參數(shù) 監(jiān)測性參數(shù) 一、分析檢測參數(shù) 分析檢測參數(shù)是指項目分析應具備的基本參數(shù)，包括被分析項目：名稱單位檢測方法主/副波長反應方向試劑量和樣品量反應時間和計時時間1被分析項目名稱 項目名稱常以項目的英文縮寫來表示 ALT

28、PchE DBil Ua TBA AST Glu TC Urea ALP HbA1C TG SCr GGT Alb HDL-C CCr LDH TP LDL-C hs-CRP CK preAlb ApoAI ASO Amylase TBil ApoB AF Ref to Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry2.單位(Unit) 臨床化學檢驗中的計量單位應為法定計量單位。 離子如鉀、鈉、氯、總碳酸氫鹽以及含量較大的代謝物如葡萄糖、總膽固醇、甘油三酯、尿素、L-乳酸、-羥基丁酸的計量單位為mmol/L.對于含量相對較低的代謝物，如尿酸、膽汁酸等，其計量單

29、位為mol/L 。 1979年國際生化學會為使酶活性單位與國際單位制（SI)相一致，規(guī)定1個催量的每單位為：規(guī)定的條件下，1秒鐘轉(zhuǎn)化的1mol底物的酶量。 酶的計量單位為“katal”(符號kat)，含量以Kat/L表示。由于katal/L單位較大，臨床仍以U/L表示，前者轉(zhuǎn)化為后者需乘以。1 U : umol/min1kat:mol/s1kat=16.67 U1U=1umol/min =(1/1000)/(1/60) mol/s1kal=(1/60)/(1/1000) U 對于蛋白，包括總蛋白、白蛋白以及其他體液中的特定蛋白的濃度單位根據(jù)含量的大小以g/L或mg/L等單位表示。2. 反應溫度

30、選擇 IFCC推薦的酶催化活性濃度測定溫度為37。 臨床化學實驗室所做其他項目，如血糖、血脂等也都用37測定。 1979年，IFCC制定了酶活性測定的總則，提出酶測定的條件，如底物濃度、pH、緩沖液種類和濃度、輔酶和輔因子以及測定的延滯期、測定酶活性的時間間隔等，應控制在最適條件下，以保證酶具有最大的催化活性。此后其陸續(xù)發(fā)布了AST、ALT、LDH、CK、GGT、ALP、AMY等酶在30測定參考方法; IFCC第一批發(fā)布的酶測定參考方法規(guī)定酶反應溫度為30，是因為金屬鎵的熔點為29.9容易標化。但在實際工作中，當室溫超過25時，生化分析儀控制酶反應溫度有困難。 2002年又重新發(fā)布了37新的測

31、定參考方法（見表1）。 3. 波長選擇單波長 多選在指示物最大吸收波長處此時檢測具有最高的靈敏度和最好的穩(wěn)定性。雙波長 由于生化分析儀多采用光電二極管陣列檢測，很容易做雙波長檢測。 雙波長檢測的原理是同時檢測兩個波長下的吸光度，即用主波長的吸光度減去副波長的吸光度來計算待測物的含量。 第二波長，即副波長設(shè)置的主要作用來補償發(fā)光燈每次閃動給結(jié)果造成的差異。副波長的選擇原則： 副波長應趨近于主波長，但吸光度應為“0”。 如干擾物（內(nèi)源性色源，如溶血、乳糜）在主波長和副波長處吸收量相同，那么副波長的設(shè)置就可以有效地減少干擾物造成的偏差。 副波長如果設(shè)置的不合適，會導致實驗結(jié)果出現(xiàn)系統(tǒng)偏差。 例如，以

32、NADH為指示物的測定項目，選擇340nm為測定波長，副波長應選在400nm左右合適，如選在380nm，因為380nm處NADH具有吸收，會影響測定結(jié)果。染料結(jié)合法來測定某些物質(zhì)的含量； 很多染料在可見區(qū)就有吸收，此時應觀察不同濃度待測物與染料結(jié)合后是否有等吸收的波長，如有，則應選擇等吸收處作為測定的第二波長。4. 測定方法與讀點時間的選擇 （1）終點法： 一定反應條件下反應達到平衡，反應液的吸光度不再增加(或降低)，吸光度的增加(或降低)與被測定物的濃度成正比。 應用終點法測定的項目有血清總蛋白、葡萄糖（葡萄糖氧化酶法）、尿酸、總膽固醇、甘油三酯、總膽紅素、結(jié)合膽紅素、高密度脂蛋白-膽固醇、

33、鐵、鈣、鎂等。 這類測定檢測的波長一般都在可見光區(qū)，受樣本色源的影響小。 終點測定法是最常用的分析法。優(yōu)點是吸光度信號變化大，吸光度穩(wěn)定，對孵浴溫度的精度、時間等的要求不高，所以重復性好、精密度高。 對于用酶作為催化劑來檢測代謝物的測定，反應的級別為一級，反應體系中各組分的含量均較大，反應達到平衡的時間一般為2-3min。如反應達到平衡的時間過長，說明試劑的質(zhì)量不高或試劑失效。 對于化學測定方法，反應一般比較迅速，一般在反應后1-2min反應就可以達到平衡。根據(jù)監(jiān)測讀點的不同，終點法還可以分為：一點終點法：生物樣品與相應的試劑在反應系統(tǒng)（反應杯）內(nèi)充分混合，在一定溫度下，經(jīng)過一定時間的反應，通

34、過比色系統(tǒng)測得反應平衡后在特定的波長下吸光度值，讀取的吸光度值由微機系統(tǒng)處理并計算測定結(jié)果。兩點終點法：生物樣品與所用雙試劑中試劑1充分混合，在一定溫度下孵浴一定時間時，在特定波長下，讀取吸光度值，然后加入啟動反應試劑啟動主反應，在反應達到平衡時，第二次讀取吸光度值。兩次吸光度差值由微機系統(tǒng)處理并計算測定結(jié)果。 兩點終點法的優(yōu)點是可以減低樣本空白對測定的影響。 但由于第一試劑的組成（如pH等）和第二試劑不同，所以兩點終點法對于內(nèi)源性色原對測定的干擾的排除可能是有限的。要確認色原物質(zhì)對測定影響的程度仍然必須做干擾實驗。 （2）一級動力學法： 動力學法的概念是與終點法相對而言的，測定的是反應動態(tài)過

35、程中的吸光度的變化。 一級動力學法測定的是反應動態(tài)過程中吸光度的變化，該變化與待測物的濃度成正比。 （3）零級動力學法 指反應速度與被測定物濃度的零次方成正比，與被測定物濃度無關(guān)，在反應時間內(nèi)，測定溶液在某一波長下吸光度均勻地減小或增加，減小或增加的速度與被測物的活性或濃度成正比。 零級動力學法即通常所說的速率法，也被稱為連續(xù)監(jiān)測法，主要用于酶活性的測定。如丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、乳酸脫氫酶、堿性磷酸酶、-谷氨氨酰基轉(zhuǎn)移酶、淀粉酶和肌酸激酶等。 SKm1km 50% Vmax2km 66%3km 75%4Km 80%10km 90%11km12km酶催化活力濃度，應采用配套的校準

36、物校正5.反應方向 反應方向分正向（Positive 或 Increase）和負向（Negative或Decrease）兩種，吸光度增加者為正向反應，下降者為負向反應。 6.試劑量(Reagent volume) 樣品量（Sample volume） 1l起步 精確到0.1l 試劑的劑型可以分為單試劑、雙試劑，加試劑的過程則相應的有單試劑方式、雙試劑方式。 目前生化分析儀大多采用雙試劑分析，它可以提高試劑的穩(wěn)定性和抗干擾性。 對于不同的機型，第一試劑量、第二試劑量、第三試劑量和總反應量有不同的取量范圍，在設(shè)置取量參數(shù)時，應注意體積的上限和下限。 樣品體積與反應液總體積的比值是方法學基本參數(shù)；

37、樣品占總體積比例應在10以下。含量低、吸光度低的被測吸光物質(zhì)，樣品用量較大； 而方法靈敏、吸光度高的實驗方法，樣品用量較?。?樣品試劑比增大，樣品內(nèi)源性干擾增加，方法特異性會下降；比例減少，檢測信號偏低，信噪比(噪音信號)增大，精密度下降，偶然誤差會增加。 樣本/試劑用量及其比，應以試劑說明書為準，不宜輕易改動。7. 反應時間（Reaction time） 計時時間（Read time） 反應時間:指分析儀一個檢測周期的時間，一般小于10分鐘。多數(shù)全自動生化分析儀可以連續(xù)監(jiān)測整個反應周期。 計時時間:讀取該時間段吸光度的變化，計算樣本濃度。 終點法動力學法 一級反應 延遲期 一級反應期 零級 延遲期 零級反應線性期 吸光度 A時間 T試劑空白界限底物耗盡界限動力學法測定反應進程曲線8.底物消耗 在連續(xù)監(jiān)測法測定酶活性或代謝物時，