一輪復(fù)習(xí) 人教版　基因工程-考點(diǎn)二 基因工程的基本操作程序（38張） 課件

1、第38講 基因工程考點(diǎn)二 基因工程的基本操作程序固必備知識(shí)提關(guān)鍵能力固必備知識(shí)一、目的基因的獲取1.目的基因：主要指_的基因,也可以是一些具有_作用的因子。編碼蛋白質(zhì)調(diào)控DNA合成儀基因文庫(kù)mRNA3.PCR技術(shù)單鏈DNA或RNA脫氧核苷酸（2） 過(guò)程解鏈引物二、基因表達(dá)載體的構(gòu)建基因工程的核心1.目的：使目的基因_,同時(shí),使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在,并且可以遺傳給下一代2.基因表達(dá)載體的組成受體細(xì)胞RNA聚合酶轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)錄3.構(gòu)建過(guò)程DNA連接同種限制酶三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞生物種類植物細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞微生物細(xì)胞常用方法_ 轉(zhuǎn)化法受體細(xì)胞體細(xì)胞或受精卵_早期常用原核細(xì)胞農(nóng)

2、桿菌轉(zhuǎn)化法顯微注射技術(shù)受精卵生物種類植物細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞微生物細(xì)胞轉(zhuǎn)化過(guò)程將目的基因插入 質(zhì)粒的 上導(dǎo)入農(nóng)桿菌用農(nóng)桿菌侵染植物細(xì)胞將目的基因整合到受體細(xì)胞的染色體 表達(dá)將含有目的基因的表達(dá)載體提純?nèi)÷眩ㄊ芫眩╋@微注射受精卵發(fā)育獲得具有新性狀的動(dòng)物 處理細(xì)胞感受態(tài)細(xì)胞重組表達(dá)載體DNA分子與感受態(tài)細(xì)胞混合感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA分子續(xù)表四、目的基因的檢測(cè)與鑒定基因工程操作過(guò)程中的5個(gè)易錯(cuò)點(diǎn) 1.目的基因的插入位點(diǎn)不是隨意的：基因表達(dá)需要啟動(dòng)子與終止子的調(diào)控,所以目的基因應(yīng)插入啟動(dòng)子與終止子之間的部位。 5.受體細(xì)胞的選擇：受體細(xì)胞常用植物受精卵或體細(xì)胞（經(jīng)組織培養(yǎng)）、動(dòng)物受精卵（一般不用體細(xì)胞）、微生

3、物（大腸桿菌、酵母菌）等。要合成糖蛋白、有生物活性的胰島素（需內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體的加工、分泌）等必須用真核生物,如酵母菌。一般不用支原體,原因是它們營(yíng)寄生生活;一定不能用哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞,原因是其無(wú)細(xì)胞核,也沒(méi)有核糖體等細(xì)胞器,不能合成蛋白質(zhì)。(2021河南模擬)回答下列有關(guān)基因工程的問(wèn)題：（1） 在基因工程中,獲取目的基因的方法包括：從基因文庫(kù)中獲取目的基因,利用_擴(kuò)增目的基因,_。PCR技術(shù)用化學(xué)方法直接人工合成目的基因（2） 在基因表達(dá)載體中,啟動(dòng)子是_識(shí)別和結(jié)合的部位。若采用原核生物作為基因表達(dá)載體的受體細(xì)胞,最常用的原核生物是_。RNA聚合酶大腸桿菌（3） 將目的基因?qū)胛⑸锍Ｓ?/p>

4、_處理受體細(xì)胞,使之成為感受態(tài)細(xì)胞。我國(guó)科學(xué)家發(fā)明的將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法是_。（4） 基因表達(dá)載體的構(gòu)建是基因工程的核心,一個(gè)完整的基因表達(dá)載體至少包括啟動(dòng)子、目的基因、標(biāo)記基因和_?；蚬こ虒?shí)施時(shí)不能將目的基因連接到載體上的標(biāo)記基因中,原因是_?；ǚ酃芡ǖ婪ńK止子防止標(biāo)記基因被破壞,以便順利進(jìn)行目的基因的檢測(cè)與鑒定提關(guān)鍵能力考向1 基因工程中目的基因的獲取 (2019全國(guó)卷)基因工程中可以通過(guò)PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因?；卮鹣铝袉?wèn)題：（1） 基因工程中所用的目的基因可以人工合成,也可以從基因文庫(kù)中獲得?；蛭膸?kù)包括_和_?；蚪M文庫(kù)（2） 生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時(shí),解開DNA雙鏈的

5、酶是_。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí),使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是_。上述兩個(gè)解鏈過(guò)程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的_。解旋酶氫鍵mRNA逆轉(zhuǎn)錄酶PCR整合到葉肉細(xì)胞染色體DNA上找到第6位氨基酸甲的堿基所在的基因位置,參照密碼子表,將第6位氨基酸甲的堿基替換為氨基酸乙的堿基考向2 基因工程中載體的構(gòu)建載體（質(zhì)粒）、限制酶和DNA連接酶啟動(dòng)子RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位,并驅(qū)動(dòng)基因的轉(zhuǎn)錄（2） 將基因表達(dá)載體導(dǎo)入玉米受體細(xì)胞,經(jīng)組織培養(yǎng)獲得愈傷組織,再將愈傷組織轉(zhuǎn)接到_上,培養(yǎng)至試管苗時(shí)需光照處理,原因是_。待植株長(zhǎng)出新葉后噴灑含_的水溶液,選取存活植株移栽到溫室,以獲

6、得具有除草劑抗性的植株。分化培養(yǎng)基光照有利于葉綠素的合成除草劑（草甘膦）解析 將基因表達(dá)載體導(dǎo)入玉米受體細(xì)胞中最常用的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法,將帶有目的基因的玉米細(xì)胞經(jīng)組織培養(yǎng)獲得愈傷組織,再將愈傷組織轉(zhuǎn)接到分化培養(yǎng)基上,誘導(dǎo)根、芽的產(chǎn)生,由于葉綠素的形成需要光,因此培養(yǎng)至試管苗時(shí)需光照處理。待植株長(zhǎng)出新葉后噴灑含除草劑（草甘膦）的水溶液,選取存活植株移栽到溫室,從而篩選出具有除草劑抗性的植株,這屬于個(gè)體生物學(xué)鑒定的方法。基因組DNA自交圖1圖2圖3（1） 用圖中質(zhì)粒和目的基因構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí),應(yīng)選用限制酶_切割質(zhì)粒,選用_限制酶和_限制酶切割含有目的基因的DNA片段。（3） 基因表達(dá)載體的構(gòu)建

7、是基因工程的核心,這一步的目的是_。使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在,并且可以遺傳給下一代,同時(shí),使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用雙子葉和裸子分泌大量的酚類化合物可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞,并且整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上（5） 在目的基因的檢測(cè)與鑒定中,檢測(cè)目的基因是否發(fā)揮功能作用的第一步是檢測(cè)_,從個(gè)體水平鑒定抗鹽轉(zhuǎn)基因煙草是否培育成功的方法是_。目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA用一定濃度的鹽水澆灌轉(zhuǎn)基因幼苗或?qū)⑵湟圃缘禁}堿地中觀察其生長(zhǎng)狀態(tài)考向 3PCR技術(shù)及應(yīng)用圖1引物1和引物4啟動(dòng)子終止子鈣圖2 .(2021南通模擬)家畜胚胎的性別鑒定技術(shù)對(duì)畜牧業(yè)的發(fā)展具有重要意義。巢式PCR擴(kuò)增反應(yīng)在兩次PCR反應(yīng)

8、中使用兩組不同引物,先使用外引物對(duì)目標(biāo)區(qū)域DNA片段進(jìn)行第一次PCR擴(kuò)增,產(chǎn)生中間產(chǎn)物,然后使用內(nèi)引物對(duì)中間產(chǎn)物進(jìn)行第二次PCR擴(kuò)增,產(chǎn)生目標(biāo)產(chǎn)物。下圖是巢式PCR工作原理示意圖,請(qǐng)回答：（2） 相比于常規(guī)PCR獲得的產(chǎn)物而言,巢式PCR獲得的產(chǎn)物的特異性_,原因是如果利用外引物擴(kuò)增產(chǎn)生了錯(cuò)誤片段,再利用內(nèi)引物擴(kuò)增在錯(cuò)誤片段上進(jìn)行引物配對(duì)并擴(kuò)增的概率_。更強(qiáng)升高解析 巢式PCR通過(guò)兩輪PCR反應(yīng),使用兩套引物特異性地?cái)U(kuò)增DNA片段,第二對(duì)引物的功能是特異性地?cái)U(kuò)增位于首輪PCR產(chǎn)物內(nèi)的一段DNA片段。 第一輪擴(kuò)增中,外引物用以產(chǎn)生擴(kuò)增產(chǎn)物,此產(chǎn)物在內(nèi)引物的作用下進(jìn)行第二輪擴(kuò)增,從而提高反應(yīng)的特異性,獲得的產(chǎn)物特異性更強(qiáng)。利用內(nèi)引物擴(kuò)增在錯(cuò)誤片段上進(jìn)行引物配對(duì)并擴(kuò)增的概率提高。（3） 巢式PCR通常在一個(gè)試管中進(jìn)行第一階段反應(yīng),然后將