輔助性T淋巴細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子檢測及意義

1、輔助性T淋巴細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子檢測及意義前言：乙型肝炎病毒（hepatitis B virus, HBV）感染是世界性的健康問題，全球慢性HBV感染者 約有3.5億，每年大約有100萬人死于HBV引起的疾病，其中大部分在亞洲地區(qū)，目前病毒 性肝炎在我國流行較為廣泛。HBV感染相關(guān)肝病患者肝細(xì)胞內(nèi)輔助性T細(xì)胞（help T cell，Th） 細(xì)胞亞群及相關(guān)細(xì)胞因子變化的研究以及細(xì)胞因子的應(yīng)用性治療研究已經(jīng)成為熱點(diǎn)。Th細(xì)胞 是分泌產(chǎn)生細(xì)胞因子（cytokines）的主要細(xì)胞之一，分為Th1和Th2兩個(gè)亞群，近年來研究 發(fā)現(xiàn)，Th1和Th2平衡是維持正常免疫功能必需的。機(jī)體對HBV的免疫應(yīng)答失衡是

2、慢性乙型 肝炎的重要發(fā)生機(jī)制之一，因此研究HBV感染時(shí)Th1和Th2狀態(tài)對認(rèn)識(shí)乙型肝炎發(fā)病、發(fā)展、 預(yù)后和觀察治療效果均有積極的意義。1材料與方法1.1材料鶴崗市第一人民醫(yī)院、鶴崗市傳染病醫(yī)院的慢性乙型肝炎患者共30例，男性14例，女性 16例，年齡26-61歲，平均年齡38.58.2歲。其中慢性乙型輕型肝炎患者16例，慢性乙型 重型肝炎患者14例。正常對照15例，為體檢中心正常體檢，男性9例，女性6例，年齡 3059歲，平均年齡40.77.8歲。1.2主要試劑和儀器CO2恒溫培養(yǎng)箱，低溫冰柜，IL-10 ELISA檢測試劑盒，IFN-r ELISA試劑盒，生化分析儀，淋 巴細(xì)胞分離液。1.3

3、實(shí)驗(yàn)方法所有研究對象均于清晨空腹靜脈采血10ml，置于肝素抗凝的無菌試管中。提取PBMC。PBMC用含10%胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度至1x106個(gè)/ml接種于24孔板， 置37C、5%二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)72小時(shí)。培養(yǎng)完畢后，將培養(yǎng)液離心，收集上清液進(jìn)行 細(xì)胞因子檢測。采用雙抗體夾心法檢測IL-10及IFN -Y。嚴(yán)格按試劑盒說明書操作。2結(jié)果2.1慢性肝炎輕度、重度與正常對照組IFN-r、IL-10的水平：三組IFN-r差異具有顯著性 （P=0.005），而三組間IL-10的水平的差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.05）（見表1，）。表1各組患者PBMC培養(yǎng)上清液中IFN-

4、r與IL-10的水平（-x士s，pg/ml）組別 n IFN-r IL-10慢性肝炎輕度 16 397.218.26* 50.796.48*慢性肝炎重度 14 287.82 30.46* 97.3311.60*正常對照 15 458.511.30* 43.224.70*注（三組間*P0. 05，*P0.01）2.2不同類型乙型肝炎患者血清IFN-r及IL-10水平與肝功能的關(guān)系：慢性肝炎患者血清IFN-r 水平與血清ALT水平成負(fù)關(guān)（r=-0.925,P0.05），而慢性肝炎患者血清IL-10水平與血清ALT水 平成正相關(guān)（r=0.818, P0.05），可見PBMC上清中IFN-r水平及顯示

5、血清IL-10水平與肝細(xì)胞損 傷程度有關(guān)，即IFN-r水平越低，肝細(xì)胞破壞越嚴(yán)重，而血清IL-10水平越高，肝細(xì)胞破壞越 嚴(yán)重。（見表2）表2不同類型乙型肝炎患者血清IFN-r及IL-10水平與肝功能的關(guān)系組別 ALT IFN-r IL-10慢性肝炎輕度 76.179.46 397.218.26 50.796.48慢性肝炎重度 102.7714.27 287.82 30.46 97.3311.60正常對照 19.64.37 458.511.30 43.224.703討論近年來關(guān)于慢性乙肝患者體內(nèi)Th細(xì)胞分化的研究屢有報(bào)道50，但是在不同型的慢性乙肝患 者體內(nèi)其免疫系統(tǒng)的功能狀態(tài)是否存在差異，此

6、類報(bào)道還較少。本實(shí)驗(yàn)通過研究不同型的慢 性乙肝患者體內(nèi)的Th細(xì)胞因子水平情況，不僅可說明慢性乙肝患者體內(nèi)免疫系統(tǒng)狀態(tài)，并 且可更深一步研究不同型的慢性乙肝患者體內(nèi)的Th細(xì)胞是否存在差異，以解釋臨床現(xiàn)象， 指導(dǎo)、協(xié)助臨床治療。本研究結(jié)果顯示，慢性乙型肝炎組Th1細(xì)胞因子IFN-r明顯低于正常對照組（P0.05），以 及促使Th0細(xì)胞向TH1轉(zhuǎn)化的方向降低，不同臨床類型慢性肝炎患者PBMC培養(yǎng)上清液IFN-r 水平均明顯降低，重型肝炎患者組明顯低于輕型乙肝患者組及正常對照組，三組間有顯著差 異，提示慢性乙肝患者體內(nèi)存在Th細(xì)胞分化的不平衡。同時(shí)研究結(jié)果顯示，而IL-10的水平 則顯著高于正常對照組

7、（P0.05），不同臨床類型慢性肝炎患者PBMC培養(yǎng)上清液IL-10水平 均明顯增高，各組間有顯著差異；PBMC產(chǎn)生IL-10水平由高到低依次為：慢性肝炎重度組、 輕度組、正常對照組，這提示IL-10水平在不同類型的慢性肝炎患者PBMC內(nèi)表達(dá)增高，且增 高程度與病情嚴(yán)重程度相關(guān)。另外還發(fā)現(xiàn)IL-10水平與IFN-r呈負(fù)相關(guān)。機(jī)體內(nèi)細(xì)胞因子是通過細(xì)胞因子組成的網(wǎng)絡(luò)來作用 于病原體，同時(shí)也相互作用。持續(xù)過度活化的Th1細(xì)胞功能受抑制，Th2細(xì)胞型因子占優(yōu)勢， 機(jī)體體液免疫功能得到增強(qiáng)，這與Th1/Th2平衡一致。對不同類型乙型肝炎患者血清IFN-r及IL-10水平與肝功能的關(guān)系的研究中發(fā)現(xiàn)，慢性肝

8、炎患 者血清IFN-r水平與血清ALT水平成負(fù)相關(guān)（r =-0.925），而慢性肝炎患者血清IL-10水平與血清 ALT水平成正相關(guān)（r=0.818），可見PBMC上清中IFN-r水平及顯示血清IL-10水平與肝細(xì)胞損傷 程度基本上是一致的，有顯著相關(guān)性，即IFN-r水平越低，肝細(xì)胞破壞越嚴(yán)重，而IL-10水平 越高，肝細(xì)胞破壞越嚴(yán)重。綜上所述，Th1/Th2細(xì)胞的免疫功能變化與慢性乙型肝炎關(guān)系十分密切，這些結(jié)果提示慢性 乙肝患者PBMC產(chǎn)生Th1/Th2細(xì)胞因子的能力，對臨床了解機(jī)體免疫應(yīng)答狀況、抗病毒能力 的強(qiáng)弱、肝細(xì)胞的免疫病理損傷程度及判斷感染者預(yù)后情況具有一定的實(shí)用價(jià)值，并為臨床 提

9、供了理論基礎(chǔ)。如果能人為的選擇性的誘導(dǎo)或調(diào)控T細(xì)胞亞群的免疫反應(yīng)，平衡Th1/Th2 反應(yīng)的動(dòng)態(tài)，則有可能利于慢性乙型肝炎為的轉(zhuǎn)歸。參考文獻(xiàn)劉源，李軍.樹突細(xì)胞與慢性乙型肝炎相關(guān)性研究進(jìn)展J.國外醫(yī)學(xué).流行病學(xué)傳染病學(xué)分 冊,2004,31（2）:79-81.魏珉.激發(fā)性腎小球疾病診療新進(jìn)展J.實(shí)用兒科臨床雜志.2004, 18（1）： 12.WANG FS XING LH,LIU M X ,et al Dysfunction of peripheral blood dentric cells from patients with chronic hepatitis B virus infectionJ.World J Gastroenterol 2001,740:537-541.李玲，顧長海.Th1/Th2細(xì)胞平衡與病毒性肝炎J.免疫學(xué)雜志，2001，17（3