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1、DNS法測定發(fā)酵液中總糖含量3,5二硝基水楊酸與還原糖共熱后被還原成棕紅色的氨基化合物,在一定范圍內(nèi),還原糖的量和反應(yīng)液的顏色強度呈現(xiàn)比例關(guān)系,利用比色法可測知樣品的含糖量。DNS試劑的配方(3,5-二硝基水楊酸試劑):稱取酒石酸鉀鈉18.2g,溶于50ml蒸餾水中,加熱(不超過50C),于熱溶液中依次加入3,5-二硝基水楊酸0.63g,NaOH2.1g(先配成溶液),苯酚0.5g,無水亞硫酸鈉0.5g,攪拌至溶解完全,冷卻后用蒸餾水定容至100ml,貯于棕色瓶中,室溫保存。0.1%葡萄糖標準液:準確稱取100mg分析純的葡萄糖(預(yù)先在105C干燥至恒重),用少量蒸餾水溶解后定容至100ml,
2、冰箱保存?zhèn)溆?。注意事項:在配制的過程中,如果操作不合理,會出現(xiàn)溶液變黑,或者有雞蛋花一樣的絮狀沉淀出現(xiàn)。稱取DNS(具體重量,按照你的配方來,下同),加水溶解,水浴45C;3逐步加入氫氧化鈉溶液,同時不斷攪拌,直到溶液清澈透明;(a.藥品中的氫氧化鈉要配制成溶液;直接加顆粒,可能產(chǎn)生雞蛋花;b.加入氫氧化鈉溶液時,溶液的溫度會上升,所以要慢慢加,不停地攪拌,同時溶液的溫度不能超過48度;溫度高了,溶液顏色變黑。)逐步加入四水酒石酸鉀鈉、苯酚和無水亞硫酸鈉;(順序最好不要更改?。├^續(xù)45度水浴,同時補水,不斷攪拌,直到加入的物質(zhì)完全溶解;(一定要有耐心地攪拌!)停止加熱,冷卻至室溫,用水定容。儲
3、存在棕色瓶中,避光保存。室溫下存放7天后使用。有效期為6個月。(時間不忙的話,最好按照時間來操作,時間緊迫了,時間提前個幾天,推后幾天,也可以用的)操作方法】一、葡萄糖標準曲線的繪制管號112345678數(shù)量項目含糖總量管號112345678數(shù)量項目含糖總量(mg)00.20.40.60.81.01.21.41.60.1%葡萄糖標準液(ml)00.20.40.60.81.01.21.41.6蒸餾水(ml)2.01.81.61.41.21.00.80.60.4DNS試劑(ml)1.51.51.51.51.51.51.51.51.5取9支大試管,分別按下表順序加入各種試劑:均在沸水浴中加熱5min
4、立即用液動冷水冷卻力口熱冷卻-蒸餾水(ml)光密度(d520)21.521.521.521.521.521.521.521.521.5將上述各管溶液混勻后,用72型分光光度計(520nm)進行比色測定,用空白管溶液調(diào)零點,記錄光密度值。以葡萄糖濃度為橫坐標,光密度值為縱坐標繪制出標準曲線。二、樣品中含糖量的測定取7支大試管,分別按下表加入各種試劑:管號空白123456數(shù)量項目樣品量(ml)01.01.01.01.01.01.0蒸餾水(ml)2.01.01.01.01.01.01.0DNS試劑(ml)1.51.51.51.51.51.51.5加熱均在沸水浴中加熱5min冷卻立即用液動冷水冷卻蒸餾水(ml)21.521.521.521.521.521.521.5光密度(d520)將各管
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