實驗脯氨酸含量電導(dǎo)率的測定

1、抗性生理1植物對脅迫的響應(yīng)機制滲透調(diào)節(jié)（脯氨酸、甘氨酸甜菜堿、可溶性糖）活性氧代謝（抗氧化酶、抗氧化小分子）脅迫蛋白（熱激蛋白、抗凍蛋白等）離子平衡和區(qū)域化（鹽脅迫）水通道蛋白（鹽脅迫）類黃酮、苯丙氨酸（紫外脅迫）2 脯氨酸含量的測定3前 言 逆境條件下（干旱、鹽堿、熱、冷害、凍害）,植物體內(nèi)脯氨酸（proline,Pro）含量會顯著增加，并且積累指數(shù)與植物的抗逆性有關(guān)，因此脯氨酸可作為植物抗逆性的一項生化指標(biāo)。4 酸性條件下,茚三酮和脯氨酸反應(yīng)生成穩(wěn)定的紅色化合物,產(chǎn)物在520nm 波長下具有最大吸收峰。 用磺基水楊酸提取植物樣品時,脯氨酸便游離于磺基水楊酸的溶液中,然后用酸性茚三酮加熱處理

2、后，溶液即成紅色,再用甲苯萃取，則色素全部轉(zhuǎn)移至甲苯中,顏色的深淺即表示脯氨酸含量的高低。實驗原理5材料、儀器及試劑（一）、實驗材料小麥幼苗： 對照、100mM、200mM NaCl處理48h；5%、15% PEG-6000處理48h（二）、儀器設(shè)備天平，燒杯 ，分光光度計，研缽，容量瓶，具塞試管，移液管，膠頭滴管，水浴鍋6主要試劑1. 3%磺基水楊酸；2.冰醋酸；3.甲苯；4. 2.5% 酸性茚三酮溶液（60 ml冰醋酸、16.4 ml磷酸加蒸餾水定容至100 ml，再加入2.5 g茚三酮，溶解后避光保存）；5.脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)母液：精確稱取25 mg脯氨酸，倒入小燒杯內(nèi)，用少量蒸餾水溶解，然后倒

3、入500 ml容量瓶中，加蒸餾水定容至刻度，此標(biāo)準(zhǔn)液中脯氨酸濃度50 g /ml。 7方法及步驟（一）樣品的測定 1稱取不同處理的小麥葉片各0.5 g，于2.5 ml 3%磺基水楊酸試管中，沸水浴中提取10 min。 2吸取1ml上清于另一試管中，加入1 ml水、1 ml冰乙酸、2 ml 2.5的酸性茚三酮，混合液于沸水中顯色30 min。8 3.冷卻后加入4 ml甲苯，搖蕩30S，萃取完全后用吸管輕輕吸取上層紅色甲苯溶液于比色杯中，以甲苯為空白對照，在520nm比色。4.用0.5-5g/ml L-脯氨酸作標(biāo)準(zhǔn)曲線。9（二）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制1標(biāo)準(zhǔn)液中脯氨酸濃度50g/ml。2取6個50 ml容量

4、瓶，分別加入脯氨酸原液 0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 、3.0 ml，用蒸餾水定容至刻度并搖勻，各瓶的脯氨酸濃度分別為0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 g/ml。103分別吸取1ml系列標(biāo)準(zhǔn)濃度的脯氨酸溶液于6個試管中,加入1ml水、1ml冰乙酸、2ml 2.5的酸性茚三酮,于沸水浴中加熱30min。4冷卻后準(zhǔn)確加入4ml甲苯,振蕩30S,靜置片刻,使色素全部轉(zhuǎn)至甲苯溶液。5輕輕吸取各管上層甲苯溶液至比色杯中,以甲苯為空白對照,于520nm進行比色。11五、結(jié)果計算根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出脯氨酸的濃度,然后換算出樣品中脯氨酸的含量（g脯氨酸/gFW）。脯氨酸含量（ g.g-1

5、） c (va )wC為由標(biāo)準(zhǔn)曲線查得脯氨酸含量 g ；V為提取液總體積ml; a為測定液體積ml；W為樣品質(zhì)量g12逆境脅迫對植物質(zhì)膜透性的影響 電導(dǎo)率法13原 理植物細(xì)胞膜對維持細(xì)胞的微環(huán)境和正常的代謝起著重要的作用。在正常情況下，細(xì)胞膜對物質(zhì)具有選擇透性能力。當(dāng)植物受到逆境影響時，如高溫或低溫，干旱、鹽漬、病原菌侵染后，細(xì)胞膜遭到破壞，膜透性增大，從而使細(xì)胞內(nèi)的電解質(zhì)外滲，電導(dǎo)率增大。膜透性增大的程度與逆境脅迫強度有關(guān)，也與植物抗逆性的強弱有關(guān)。14實驗步驟1、取0.2 g對照和鹽或PEG6000處理的小麥葉片，切成約1cm小段；2、用雙蒸水沖洗 3 遍以除去表面粘附的電解質(zhì)；3、加10 ml雙蒸水，25振蕩溫育1小時，期間經(jīng)常搖動，測定此時的電導(dǎo)率為C1；4、將盛有根的試管100煮沸 15 min，冷卻到室溫后，測定此時的電導(dǎo)率為C2