醫(yī)學(xué)專題藥敏試驗(yàn)PPT資料

1、藥敏試驗(yàn)MIC：在與微生物生長速率有關(guān)的特定時間間隔內(nèi)，通常是1824小時，能夠抑制被測菌生長的最低藥物濃度。對倍稀釋的優(yōu)點(diǎn)：操作容易敏感株的MIC呈正態(tài)分布區(qū)分異常(R)與敏感(S)的菌群12021/7/20 星期二藥敏試驗(yàn)折點(diǎn)的建立 1. MIC的分布2. 藥代動力學(xué)和藥效學(xué) 定 MIC的折點(diǎn)3. 臨床療效和細(xì)菌清除率4. 抑菌圈直徑的分布 定抑菌圈折點(diǎn)統(tǒng)計學(xué)的線性回歸計算錯誤率：盡可能減少極重要誤差 (假敏感率)22021/7/20 星期二MIC的分布32021/7/20 星期二藥代動力學(xué)和藥效學(xué)藥代動力學(xué)：藥物吸收，分布，代謝，排泄藥效學(xué)：藥物對機(jī)體的作用時間依賴型（TMIC：內(nèi)酰胺類

2、，大環(huán)內(nèi)酯類濃度依賴型（AUC/MIC比率：AGS, FQ這些參數(shù)可用于計算具有最佳藥效的給藥方案42021/7/20 星期二MIC與抑菌圈直徑的線性關(guān)系耐藥 中介 敏感RISLog2. MICD 1 d2 抑菌圈直徑（mm)v52021/7/20 星期二抑菌圈直徑與MIC的關(guān)系62021/7/20 星期二不同國家的判定折點(diǎn)可能不同原因：用藥劑量不同，服藥的間隔不同評價敏感時較保守更強(qiáng)調(diào)檢測出耐藥株（即特定的耐藥群）技術(shù)因素：接種、培養(yǎng)基72021/7/20 星期二敏感性分類(NCCLS的定義)敏感（Susceptible）用常規(guī)用量治療有效常規(guī)用藥時達(dá)到的平均血藥濃度超過細(xì)菌的MIC 5倍以

3、上。耐藥（Resistance）用常規(guī)用量治療不能抑制細(xì)菌的生長MIC高于藥物在血、體液中可能達(dá)到的濃度82021/7/20 星期二敏感性分類（2）中介 (Intermediate)MIC接近血、體液中藥物的濃度，治療反應(yīng)率低于敏感株藥物生理濃集部位有效 (尿FQ)加大用藥劑量可能有效緩沖區(qū)：防止操作的系統(tǒng)誤差造成重大結(jié)果的判定錯誤92021/7/20 星期二藥敏試驗(yàn)的方法學(xué)半定量紙片擴(kuò)散法 (抑菌圈直徑)MIC法：稀釋法(肉湯、瓊脂)自動化儀法抗生素連續(xù)梯度法 (Etest )流式細(xì)胞儀102021/7/20 星期二藥敏試驗(yàn)方法的選擇紙片法有獨(dú)特之處選藥靈活、便宜、易懂MIC法：商品肉湯法

4、(自動化法)可用于厭氧菌、苛氧菌計算機(jī)管理快速，但可能有錯誤（如誘導(dǎo)型菌）新藥的評價112021/7/20 星期二藥敏試驗(yàn)方法1（紙片擴(kuò)散法材料：浸有一定Abs的干燥的園濾紙片步驟：制備菌懸液涂平板貼紙片孵育卡尺測量抑菌圈直徑判定R、I、S優(yōu)點(diǎn)：選藥靈活、便宜、一個平皿可測多個藥缺點(diǎn)：影響因素多適用于快生長菌、部分苛養(yǎng)菌122021/7/20 星期二紙片擴(kuò)散法影響因素MIC接種菌量細(xì)菌生長率抗生素含量、擴(kuò)散性平皿厚度溫度，預(yù)孵育時間132021/7/20 星期二紙片擴(kuò)散法標(biāo)準(zhǔn)化NCCLS：美國實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(National Committee for Clinical Laborator

5、y Standards)每年修訂更改包括質(zhì)控新藥的判定標(biāo)準(zhǔn)特殊耐藥性的檢測142021/7/20 星期二NCCLS的法規(guī)規(guī)定紙片含量、接種濃度、培養(yǎng)基、平皿厚度、判定標(biāo)準(zhǔn)、質(zhì)控規(guī)定常規(guī)測試報告的抗生素不同的藥判定標(biāo)準(zhǔn)不同不同的菌判定標(biāo)準(zhǔn)也不同152021/7/20 星期二常規(guī)測試并報告的藥物分組(1) 腸桿菌科綠膿和非腸桿菌科一 級 氨芐頭孢他啶 唑林，慶大慶大，替卡，哌拉二級 阿米卡星阿米卡星 氨芐/舒，阿莫/克吡肟，哌酮，氨曲南 頭孢膚肟，頭霉環(huán)丙，亞胺培南，替卡/克 噻肟，曲松，環(huán)丙妥布，磺胺 亞胺培南，替卡，哌拉三級 氨曲南，頭孢他啶頭孢曲松 卡那，奈替，妥布氯霉素，奈替 四環(huán)素，氯霉

6、素 162021/7/20 星期二常規(guī)測試并報告的藥物分組(2) 葡萄球菌腸球菌一級 苯唑，青霉素青霉素，氨芐二級 紅霉素類萬古霉素 克林，萬古三級 氯霉素慶大172021/7/20 星期二常規(guī)測試并報告的藥物分組(3) 流感嗜血桿菌肺炎鏈球菌一級 氨芐，青霉素青霉素，紅霉素 TMP/SMZ TMP/SMZ二級 頭孢膚肟，噻肟氧氟，四環(huán)素 他啶，氯霉素 萬古霉素三級 阿奇，頭孢克羅氯霉素，利福平 環(huán)丙，亞胺培南利福平，四環(huán)素182021/7/20 星期二預(yù)報用藥(一) 測試藥菌名推測其它藥物的敏感性 苯唑西林葡萄球菌所有內(nèi)酰胺類 四環(huán)素所有（除葡多西環(huán)素，米諾環(huán)素 萄球菌和不 動桿菌紅霉素G球

7、菌羅紅，克拉，阿奇克林霉素所有林可霉素192021/7/20 星期二預(yù)報用藥(二)測試藥菌名推測其它藥物的敏感性氨芐西林腸球菌青霉素青霉素G葡萄球菌氨芐，美洛，替卡頭孢噻吩腸桿菌科拉定，頭孢氨芐，克羅奈啶酸s腸桿菌科所有FQs萬古霉素s所有替考拉寧s202021/7/20 星期二紙片擴(kuò)散法操作規(guī)程(一)培養(yǎng)基：MH (重復(fù)性好，低抑制劑，營養(yǎng)好)厚度：4mmPH：7.27.4pH低時，氨基糖甙,大環(huán)內(nèi)酯 pH高時，青霉素類的活性 離子濃度 (Ca 2+ , Mg 2+ )影響 氨基糖甙類、四環(huán)素對Pae活性高時，抑菌圈；212021/7/20 星期二紙片擴(kuò)散法操作規(guī)程(二)接種：純的新鮮菌落，

8、0.5號麥?zhǔn)媳葷峁芫鷳乙涸?5分鐘內(nèi)種入平皿內(nèi)紙片中心的間距=24mm孵育：CO2影響Ags, Tet, Macrolides質(zhì)控: ATCC25922, 35218 ATCC27853, ATCC25923222021/7/20 星期二紙片擴(kuò)散法結(jié)果的判定1. 先看菌名（鑒定到種2. 不同的藥物使用不同的折點(diǎn)藥名菌名RS菌株1菌株2Pip/Taz綠膿171816R30SCAZ綠膿 141816I19S3. 同是S時，偏離敏感折點(diǎn)越高的藥, MIC越低，活性也越高232021/7/20 星期二抑菌圈的分布242021/7/20 星期二抑菌圈的分布252021/7/20 星期二非NCCLS系統(tǒng)的

9、擴(kuò)散試驗(yàn)方法國家學(xué)會培養(yǎng)基評論比較法UKBSACIso-Sensitest不校正MICsStokesUKBSACIso-Sensitest不校正MICsSFM法國SFMMH與NCCLS相近DIN德國DINMH與NCCLS相近SIR瑞典SMSPDMASMMIC相關(guān)值低Neo-sensitabs丹麥、比利時MH藥片，易保存雙歧澳大利亞Sensitest無中介262021/7/20 星期二藥敏試驗(yàn)的錯誤來源(一)每個系統(tǒng)特有的局限性 （快生長菌培養(yǎng)基（成分、厚度、pH、離子濃度）各種材料的正確保存 (紙片20)操作步驟純菌、35、1628h葡萄球菌、腸球菌 24h272021/7/20 星期二藥敏試

10、驗(yàn)的錯誤來源(二)體內(nèi)、體外試驗(yàn)的不一致性某些菌測某些藥，結(jié)果有誤頭孢菌素、氨基糖甙類：沙門菌、志賀菌頭孢菌素：李斯特菌屬頭孢菌素、氨基糖、克林、TMP/SMZ：腸球菌Beta內(nèi)酰胺類：MRS即使敏感，也應(yīng)報告耐藥282021/7/20 星期二問題菌和耐藥機(jī)制有些菌無標(biāo)準(zhǔn)化的藥敏試驗(yàn)棒桿菌、芽胞桿菌、氣單胞菌、巴斯德菌某些耐藥機(jī)制需要多種檢測方法誘導(dǎo)型：VanB, Bush I型酶MRS的異質(zhì)型表達(dá)ESBL藥敏可能無法檢出新出現(xiàn)的耐藥，VISA292021/7/20 星期二藥敏試驗(yàn)方法2肉湯稀釋法 4 816 32 64 128 256 ug/ml 混 混 清抗生素倍比稀釋，種菌105CFU/

11、ml ， 孵育35，16-20h，判讀302021/7/20 星期二藥敏試驗(yàn)方法2肉湯稀釋法調(diào)節(jié)離子濃度的MH肉湯宏量肉湯法（2ml, 13x100mm ）微量肉湯法 （ 0.1ml, 微量板） 自動化儀優(yōu)點(diǎn)：準(zhǔn)確，可靠，可用于研究缺點(diǎn)：勞動強(qiáng)度大細(xì)菌生長情況不可查312021/7/20 星期二藥敏試驗(yàn)方法3瓊脂稀釋法 濃度 16 32 64 128 256 ug/ml 制備含對倍抗生素濃度梯度的平板，制備菌懸液，點(diǎn)種菌，104/每個點(diǎn)，孵育，判讀結(jié)果322021/7/20 星期二藥敏試驗(yàn)方法3瓊脂稀釋法優(yōu)點(diǎn)：金標(biāo)準(zhǔn) 精確可靠可同時測定多株菌（40株）細(xì)菌生長情況可查缺點(diǎn)： 測多個藥時勞動強(qiáng)度

12、大制備平皿費(fèi)時費(fèi)力332021/7/20 星期二藥敏試驗(yàn)方法4E test 法 細(xì)菌生長區(qū)E test 塑料條橢圓形細(xì)菌生長抑制區(qū)256128 8016判讀抑菌濃度（MIC ug/ml)342021/7/20 星期二藥敏試驗(yàn)方法4E test 法優(yōu)點(diǎn)連續(xù)濃度梯度，與瓊脂稀釋法相關(guān)性好影響因素少，穩(wěn)定性高操作簡單，省時缺點(diǎn)：昂貴用途：快生長菌，苛養(yǎng)菌，厭氧菌，酵母菌， 分枝桿菌352021/7/20 星期二評價藥物體外抗菌活性的指標(biāo)MIC50, MIC90, MIC 均值， MIC 范圍，R，I，SMIC50/ MIC90：MIC從小到排列，位于第50 / 90百分位菌株的MIC值單純比較MIC

13、50，MIC90是片面的，還要同時看平均MIC及MIC范圍同時結(jié)合R，I，S，（不同藥物血濃度不同，安全范圍不同362021/7/20 星期二抗生素細(xì) 菌人 體 RESISTANCEPHARMACODYNAMICSINFECTIONIMMUNITYSIDE EFFECTSPHARMACOKINETICS抗生素、細(xì)菌、人體372021/7/20 星期二382021/7/20 星期二Time above MICCorrelation of serum pharmacokinetics with MIC (susceptibility)of an organism Time above MICTim

14、eAntibiotic concentration (ug/ml)2Drug ADrug BABDrug A present at concentration of 2 ug/ml for 50% of dosing intervalDrug B present at concentration of 2 ug/ml for 30% of dosing interval468039Slide no2021/7/20 星期二Relationship between Time above MIC and efficacy in animal infection models020406080100

15、020406080100Time above MIC (%)PenicillinsCephalosporinsMortality after 4 days of therapy (%)Craig. Diagn Microbiol Infect Dis 1996; 25:213217402021/7/20 星期二Antibiotic concentrationMIC TimeArea under the curve over MIC24-hr AUC/MIC is correlated with outcome of infection, the magnitude required for s

16、uccess and MIC at which this occurs becomes the PD breakpoint 24-hr AUC/MICCorrelation of serum pharmacokinetics with MIC (susceptibility)of an organism 41Slide no2021/7/20 星期二The relationship between time above MIC90and bacteriological cure in S. pneumoniae (red) andH. influenzae (blue) in otitis m

17、edia and sinusitisOtitis mediaSinusitisTime Above MIC (% of dosing interval)Bacteriological cure (%)020406080100020406080100Craig, ECCMID 2000, Stockholm, Sweden42Slide no2021/7/20 星期二抗生素選擇時需考慮的因素藥物感染部位濃度對細(xì)菌MIC結(jié)果微生物學(xué)抗菌機(jī)制抗菌譜藥代動力學(xué)吸收、分布、代謝、排泄給藥方案藥效學(xué)時間/濃度依賴型殺菌劑/抑菌劑組織滲透抗菌時效臨床效果細(xì)菌清除患者依從性耐受性耐藥產(chǎn)生432021/7/20

18、 星期二抗生素治療失敗的主要原因病人相關(guān)原因依從性差不適當(dāng)給藥途徑免疫抑制病灶藥物原因給藥劑量與方式不當(dāng)藥效學(xué)考慮欠妥藥物失活微生物相關(guān)的原因病原確立錯誤治療中出現(xiàn)耐藥抗菌活性不足接種效應(yīng)其他原因非感染（誤診）基礎(chǔ)疾病442021/7/20 星期二抗生素藥效學(xué)與藥代動力學(xué)關(guān)系研究 PK/PD藥代條件下的藥效 PARAMETERS：PK：Cmax、AUC、T1/2 PD：MIC PK/PD：AUC/MIC Cmax/MIC TMIC452021/7/20 星期二抗生素藥效學(xué)與藥代動力學(xué)關(guān)系研究 抗生素PK/PD分類抗生素分類PK/PD 參數(shù)藥物時間依賴型（短PAE）TMIC青霉素類、頭孢菌素類、氨曲南、碳青霉烯類、大環(huán)內(nèi)酯類、克林霉素、惡唑烷酮類、氟胞嘧啶時間依賴型（長PAE）AUC24/MIC鏈陽霉素、四環(huán)素、萬古霉素、替考拉林、氟康唑、阿齊霉素濃