靜脈移植脂肪來源干細胞治療大鼠腦缺血模型的實驗研究

1、本項目為湖南省衛(wèi)生廳科研基金課題，課題編號（A2004-002）*通訊作者：劉運海，中南大學(xué)湘雅醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，410008，E-mail:靜脈移植脂肪來源干細胞治療大鼠腦缺血模型的實驗研究王瑋1 張寧1 楊興東2 劉運海1 1中南大學(xué)湘雅醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，湖南 長沙 410008 2北京海淀醫(yī)院，北京，100083The Therapeutic Effect Of The Intravenous Administration Of Adipose-derived Adult Stem Cells For Treating Transient Focal Cerebral Ischemia In R

2、ats Wang-Wei 1, Zhang-Ning 1, Yang Xingdong 2, Liu Yunhai11Department of Neurology ,Xiangya Hospital of Central South University,Changsha,410008，China2Beijing Haidian Hospital,Beijing, 410008 , ChinaAbstract AIM: TO observe the survival ,migration,differentiation and the recovery of neurological ded

3、icits after transplantation of ADSCs into ischemic rats.And we also explored the effectiveness of ADSCs transplantation in treating the middle cerebral artery occlusion of Sprague-Dawley rats, and the potential therapeutic time window. METHODS: Adult male SD rats were subjected to middle cerebral ar

4、tery occlusion by the monofilament method.DMEM were transplanted to control group at 3,6,12,24,72 hours after MCAo respectively. About 3*106ADSCs in 1ml prelabeled with BrdU were transplanted transplantation group by venous approach at above-mentioned time. These animals were euthanized at 14 days a

5、fter MCAo. Immunofluoresecence for BrdU,NSE,MAP-2,GFAP were processed to assess neurological functions,TTC staining was used to examine the volumes of cerebral infactions. The apoptotic neurons in ischemic areas were observed by terminal deoxynucleotidyl transferrase-mediated d UTP nick end labeling

6、 (TUNEL)staining . RESULTS: 1.After transplantation, ADSCs labeling with BrdU were present in the ischeminc points and surrounding areas ,while very few BrdU positive cells could be found in the counterlateral hemisphere.2.the percentages of BrdU that labeled expressed BrdU/GFAP, BrdU/NSE, BrdU/MAP-

7、2-positive cells were separedtely 6.9%.1.1% and 1.3% in the ischemic points at 14days after ischemia. 3.In ADSCs transplantation group ,neurological functional recocery were improved significantly at 14days compared with untreated group and control group at the same time points, the scores of motor

8、severity of the rats in 3-h postlesion group was the lowest ,the difference was evident between that in 3-h postelesion group and 72-h postlesion group.4. ADSCs transplantation at all of these time ppints resulted in lesion volume reduction,the infarct lesions were the fewest when ADSCs were intrave

9、nously administrated 3h after MCAo,there is obvious difference compared with that of 72h postlesion group .5.TUNEL-positive cells around the ischemic lesions in ADSCs transplantation group were significantly fewer compared with untreated group and control group at the same time points(P0.05),and the

10、 number of TUNEL-positive cells around the ischemic lesions in ADSCs transplantation group at the same time points (P0.05),and the number of TUNEL-positive cells in the rats in 3h postlesion group was the lowest, the difference was evident between that in 3h postlesion group was the lowest ,the diff

11、erence was evident between that in 3h postlesion group and 72h postlesion group. CONCLUSIONS: 1.ADSCs could migrate into ischemic hemisphere by venous approcach in the MCAo model in the rat ,and express the neuron and the glial cell marks.2.The intravenous administration of ADSCs into rats with MCAo

12、 lead to greater functional outcome and fewer lesion size,The therapeutic effects of inravenous administration of ADSCs in rats afer MCAo may contribute to that it can significantly decrease TUNEL-positive neurons in the MCAo model in the rat.3.There is potential therapeutic time window for intraven

13、ous administration of ADSCs in rats after MCAo.The earlier transplantation times after the ischemic insult resuled in more beneficial outcomes ,but the infarct volume in rats transplanted even at 72 h afer MCAo was limited compared with the control lesioned rats ,and that these rats showed improved

14、behavioral function also.Key words adipose-derived stem cells ;focal cerebral ischemia ; therapeutic time window；vein graft；Immunofluorescence摘要 目的：觀察ADSCs移植入腦缺血大鼠后細胞的存活、遷移、分化以及大鼠的神經(jīng)功能缺損恢復(fù)情況，探討ADSCs移植治療治療大鼠局灶性腦缺血的有效性和潛在的治療時間窗。方法: 制作成年雄性SD大鼠MCAO模型，未處理組手術(shù)后不作特殊處理，DMEM干預(yù)各組分別在術(shù)后第3、6、12、24、72小時經(jīng)左側(cè)股靜脈注射DME

15、M lml; ADSCs移植各組分別在上述5個時間點靜脈給予ADSCs 1ml，各組大鼠于MCAo術(shù)后14天處死。免疫熒光染色觀察BrdU, NSE, MAP-2和GFAP的表達;第3、7及14天對動物進行神經(jīng)功能評分;TTC染色法測定腦梗死體積，TUNEL染色觀察缺血區(qū)神經(jīng)元凋亡變化。結(jié)果：1、ADSCs移植后主要分布在腦缺血灶周圍，而非缺血側(cè)大腦極少分布;2、ADSCs移植組缺血灶周圍BrdU/GFAP, BrdU/NSE和BrdU/MAP-2雙染陽性細胞比例分別為6.9%、1.1%和1.3%; 3、7、14天時各ADSCs移植組大鼠神經(jīng)功能缺損評分與未處理組或同時間點對照組相比有顯著性降

16、低(P0.05)，而3h組神經(jīng)功能評分最低，與72小時組相比有顯著性差異(P0.05); 4、ADSCs移植組的腦梗死體積明顯小于未處理組或同時間點DMEM處理組(P0.05)，而3h組腦梗死體積最小，與72h組相比有顯著性差異(P0.05);5、 ADSCs移植組的細胞凋亡數(shù)目明顯少于未處理組和同時間點DMEM處理組(P0.01)，而3h組凋亡數(shù)目最小，與72h組相比有顯著性差異(P0.01)。結(jié)論：、靜脈移植在腦內(nèi)能遷移分布到梗死灶周圍，能表達神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細胞標(biāo)志物、靜脈抑制能改善大鼠缺血所致的神經(jīng)功能缺損，減少腦梗死體積。、靜脈移植治療MCAo大鼠存在治療時間窗，早期移植改善作用更為

17、明顯，MCAo后小時移植仍然有效。關(guān)鍵詞 脂肪基質(zhì)干細胞；腦缺血；治療時間窗；靜脈移植；免疫熒光中圖號 R743.32O引言腦血管病是嚴(yán)重威脅人類特別是中老年人生命和健康的一類疾病，是目前人類疾病的三大死亡原因之一。而缺血性腦血管病占腦血管病的75%左右，并且面對缺血性腦血管病的高死亡率和高致殘率，當(dāng)前的治療手段效果甚微。過去認為腦神經(jīng)細胞一經(jīng)壞死則不能再生，當(dāng)前的治療方法亦立足于搶救瀕臨壞死的腦細胞和通過促進其余存留的腦細胞的代償來改善神經(jīng)功能缺損，而對于己壞死的腦細胞則別無良策，這亦是當(dāng)前缺血性腦血管病高死亡率和高致殘率原因的根本所在。脂肪干細 胞(adipose-derived adul

18、t stem cell, ADSCs)從脂肪組織中獲得，它們具有干細胞的特性，能夠自我增殖并分化成多種譜系的細胞1.2.3，新近的研究發(fā)現(xiàn)，ADAS在體外誘導(dǎo)分化后可變?yōu)樯窠?jīng)樣細胞，并能夠表達神經(jīng)細胞特有的信號4.5.6，我們也在前期的研究中發(fā)現(xiàn)腦梗死側(cè)的腦組織上清液也可以誘導(dǎo)脂肪干細胞發(fā)育成神經(jīng)細胞。并且 ADSCs是一種易于獲得、對病人創(chuàng)傷小、易于產(chǎn)生足夠的細胞數(shù)目、無需長時間培養(yǎng)、能夠減少移植后的自體免疫應(yīng)答、且無法律和倫理限制的自體細胞，新近的研究將其推向組織工程和再生醫(yī)學(xué)的前沿。本實驗通大鼠腦缺血模型的ADSCs移植，觀察ADSCs移植入腦缺血大鼠后細胞的存活、遷移、分化以及大鼠的神

19、經(jīng)功能缺損恢復(fù)情況，探討ADSCs1材料和方法1.1材料 1.1.1實驗動物及分組：清潔級健康成年雄性SD大鼠（中南大學(xué)動物部, 鼠齡 6 - 8周，體重280-320g），采用SD大鼠左側(cè)大腦中動脈線拴模型方法,閉塞90分鐘后再通,MCAo術(shù)后隨機分為11組（每組18只），第一組為未處理組，26組對照組，711組為移植組。各組動物在手術(shù)前均禁食1214小時，可自由飲水。未處理組手術(shù)后常規(guī)飲食，不作特殊處理，對照組分別在MCAo術(shù)第3、6、12、24、72小時后通過左側(cè)股靜脈注射DMEM；移植組分別在上述5個時間點靜脈給予ADSCs1ml1.1.2主要試劑：100mL/L水合氯醛（中南大學(xué)藥劑

20、科），型膠原酶，胰酶（Sigma），DMEM低糖（GIBCO/BRL），胎牛血清（Hcylone），小鼠抗MAP-2、抗GFAP單克隆抗體（Neomarkers），小鼠抗NSE(Serotec)、小鼠抗CD34 （Santa Cruz），小鼠抗CD44 （Serotec），小鼠抗CD29 （Biolegend）。 1.2 方法1.2.1 細胞培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)觀察 100mL/L 水合氯醛(3 mL /kg) 腹腔注射麻醉SD大鼠，無菌條件下取出腹股溝處脂肪，剔除軟組織和小血管，PBS 緩沖液沖洗3 次，剪成小塊，37下7.5g/L型膠原酶消化30min，含15%FBS 的DMEM 等體積中和，10

21、00 轉(zhuǎn)/min 離心10min 后棄去上清及脂肪組織，160mmol/L 紅細胞裂解液裂解紅細胞10min，離心棄去上清，含15g/LFBS 的DMEM重懸細胞及沉淀的組織快，接種至含血清培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶。每72h換液1次，810d細胞生長至亞融合狀態(tài)時胰酶消化，離心收集。細胞融合至80%一90%的ADSCs用含0.02%的EDTA的0.25%胰蛋白酶消化(于鏡下控制消化時間)，細胞稀釋2-3倍傳至培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，觀察細胞生長情況，待細胞基本融合，再用胰酶消化，以上述方法進行細胞傳代擴增培養(yǎng)。取第25代細胞，漂洗，離心,戊二醛固定，漂洗，鍔酸固定，丙酮梯度脫水，環(huán)氧丙烷置換，樹脂浸透，1.2.2

22、 動物模型制作以線栓法2制作大鼠MCAO模型。10%的水合氯醛(0.3ml/100mg)腹腔注射麻醉大鼠后，分離右頸總動脈并剪一小口，將頭端燒成光滑杵狀的國產(chǎn)尼龍線(直徑0.235mm，長6cm)插入，以頸總動脈分叉處計算進線深度為180.5mm，至大腦中動脈起始部以完全阻斷血供。模型成功的標(biāo)志是麻醉蘇醒后大鼠出現(xiàn)前肢或后肢癱瘓，并在造模24h后行頭部MRI檢查確定造模成功。24hT1 W1顯示MCA區(qū)的稍低信號（稍長T1信號），T2WI及水抑制系列均顯示MCA區(qū)的異常高信號（長T2信號），與周圍正常組織對比明顯，提示存在缺血損傷病灶。ADSCs懸液1ml（3 106 個細胞/mL ）(細胞移

23、植前與Brdu 共培養(yǎng)24 h)按照0.1ml/秒的速度將1ml細胞懸液全部推注入大鼠左側(cè)股靜脈內(nèi)。 1.2.3 腦缺血大鼠神經(jīng)功能缺損評分 腦缺血2小時待動物清醒后，參照Chen等的方法進行神經(jīng)運動功能評分。具體評分:提尾時：前肢屈曲1分，后肢屈曲1分，30秒內(nèi)頭部垂直運動10度1分（以上三項可以累計）；行走時:正常行走0分，不能走直線1分，向癱瘓側(cè)旋轉(zhuǎn)2分，倒向癱瘓側(cè)3分。按照上述標(biāo)注于再灌注后3、7和14天對動物行為障礙的程度進行評分，0分作為模型不成功剔除，并在后續(xù)實驗中補充前面剔出出組的動物，保證每組6只實驗動物。1.2.4 組織學(xué)檢查 按時間點捕殺動物，過量麻醉，40 g/L多聚甲

24、醛灌注固定后取腦組織, 常規(guī)行固定、脫水、透明、浸蠟及包埋，切片，厚度為20微米。TCC染色和腦梗死體積測定：將切片置于TCC磷酸緩沖液中避光, 37度恒溫孵育30min,正常組織紅染,不顯色部分為腦梗死組織.甲醛固定24小時后用數(shù)碼相機拍照,應(yīng)用HPIAS-1000病理圖文分析系統(tǒng)測定各層面積及腦梗死面積。Brdu染色標(biāo)記其存活及遷移途徑：PBS沖洗，鹽酸，胰酶, TritonX-100,各處理30min,加入小鼠抗Brdu（1:100），4攝氏度過夜，沖洗，加Fitc標(biāo)記IgG（1：200），封片，觀察。按Tunel試劑盒方法檢測細胞凋亡：切片脫蠟后用蛋白酶K37 消化20min，沖洗后加

25、入3 g/L H2O2(甲醇溶解)之后，1 g/L TritonX-100處理,PBS洗2次，涼干滴加10 L反應(yīng)液 (1 L酶和9 L反應(yīng)緩沖液混勻)置于濕盒37 60 min。依次加入凋亡試劑盒的Buffer A,顯色劑，bufferB，顯色劑。之后，DAB復(fù)染20 s，水洗,脫水，透明，封固。顯微鏡下1.2.5 統(tǒng)計學(xué)分析全部資料采用SPSS 11.0軟件包分析，各組數(shù)據(jù)均用s 表示：多組樣本均數(shù)間比較先用方差分析，再用q檢驗，p0.05表示有顯著性差異。2 結(jié)果2.1 細胞形態(tài)學(xué)觀察 原代細胞培養(yǎng)3天可見少量細胞貼壁，6天左右細胞開始成集落樣生長，形態(tài)呈梭型及不規(guī)則三角型，9天左右集落

26、相互融合，逐漸形成亞融合態(tài)。電鏡顯示ADSCs核呈分葉狀，染色質(zhì)豐富，胞漿內(nèi)細胞器不發(fā)達，呈低分化狀態(tài)，符合原始細胞特點。2.2運動功能評價 各組大鼠在MCAo術(shù)后3天神經(jīng)功能評分最高,進行統(tǒng)計學(xué)分析發(fā)現(xiàn):14天時各ADSCs移植組大鼠神經(jīng)功能缺損評分與未處理組及同時間對照組相比有顯著性降低(P 0.05) ,而在各ADSCs移植組中以3小時組神經(jīng)功能評分最低,與72小時組相比有顯著性差異(P0.05),如表1所示.表1 各組大鼠神經(jīng)功能缺損評分的影響（s）組別例數(shù)3d7d14d未處理（MCAo組）1組243.330.522.80.362.020.43對照組（DMEM處理組）2（3h）243.

27、450.772.780.63 2.000.223（6h）243.530.452.740.721.920.304（12h）243.420.662.820.431.950.305（24h）243.350.502.450.522.000.386（72h）243.390.592.790.571.950.31ADCS干預(yù)組247（3h）243.500.492.420.341.070.408（6h）243.370.572.450.671.370.219（12h）243.430.512.510.371.400.2610（24h）243.440.622.400.531.470.3311（72h）243.660

28、.562.430.651.560.34與未處理組比較P0.05，與同時間點對照組比較P0.05，與7組比較P0.05。2.2 TTC染色觀察及腦梗死體積測定 TCC染色顯示非梗死側(cè)腦組織紅染，而缺血側(cè)發(fā)現(xiàn)有局限的不顯色區(qū)域（白色），與周圍和對側(cè)非缺血區(qū)腦組織（紅染）界限較分明，后缺血區(qū)主要位于視交叉后2-4mm腦皮質(zhì)，各組用數(shù)碼相機拍照，在各組腦組織冠狀切面上，TCC染色應(yīng)用HPIAS-1000病理圖文分析系統(tǒng)測量各層面積，計算腦梗死體積（結(jié)果見表2 ）。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：各移植組大鼠腦梗死體積與未處理組及同時間點對照組相比有顯著性降低（P0.05），在各移植組中又以3小時組腦梗死體積最低，與72小時

29、組相比有顯著性差異（P0.05）表各組大鼠腦梗死體積的比較（mm3, s）組別例數(shù)腦梗死體積未處理（MCAo組）1組6178.1722.87對照組（DMEM處理組）2（3h）6147.3337.403（6h）6149.1740.604（12h）6152.1741.105（24h）6169.6733.996（72h）6174.3330.22ADCS干預(yù)組67（3h）696.6723.148（6h）6101.6727.149（12h）6108.0025.4810（24h）6121.5023.4611（72h）6133.3331.68與未處理組比較P0.05，與同時間點對照組比較P0.05，與7組比

30、較P0.01)，ADSCs移植組的細胞凋亡數(shù)目明顯少于未處理組和同時間點對照組（p0.01），ADSCs治療各組中以3小時以至組凋亡細胞數(shù)最低，與72小時移植組相比有顯著性差異（P0.01）見表3 。 表各組大鼠梗死周圍區(qū)域凋亡細胞數(shù)目的比較（個，s）組別例數(shù)凋亡細胞數(shù)未處理（MCAo組）1組650.504.84對照組（DMEM處理組）2（3h）647.505.163（6h）656.006.814（12h）653.336.685（24h）651.174.366（72h）654.334.93ADCS干預(yù)組67（3h）621.673.338（6h）634.175.719（12h）633.175.9

31、810（24h）639.834.9611（72h）641.676.74與未處理組比較P0.05，與同時間點對照組比較P0.05，與7組比較P0.05。 3 討論 干細胞具有自我更新能力,能夠向神經(jīng)細胞分化,在局灶性腦缺血性損傷的治療中可能起重要作用。已經(jīng)有研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)腦內(nèi)出現(xiàn)損傷信號時,骨髓干細胞可向腦缺血病灶遷移,將骨髓干細胞移植入缺血腦組織后,這些細胞發(fā)生遷移和分化,并減輕卒中后的神經(jīng)功能缺損0。而脂肪干細胞具有和骨髓干細胞類似的特性, 日前已經(jīng)證實脂肪組織來源干細胞能向脂肪細胞、軟骨細胞、成骨細胞、肌肉細胞及心肌細胞定向誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化11.12，13.14.15，可作為多種組織工程的種子細胞。新

32、近研究發(fā)現(xiàn)，從大鼠腹部摘取的脂肪組織在體外純化并大量擴增后體外定向誘導(dǎo)。大部分ADSCs細胞轉(zhuǎn)變?yōu)楸磉_NSE的神經(jīng)元樣細胞，并有軸突和樹突樣結(jié)構(gòu)出現(xiàn)，多個神經(jīng)元樣細胞之間可形成網(wǎng)絡(luò)。顯示在一定培養(yǎng)條件下，來源于脂肪組織提取物的細胞有分化為神經(jīng)樣細胞的能力11,16-20 因此本研究將ADSCs經(jīng)尾靜脈移植入腦梗死大鼠模型，發(fā)現(xiàn)通過靜脈移植的ADSCs能夠穿透血腦屏障并遷移至缺血腦組織周圍,并且ADSCs主要遷移分布在腦梗死區(qū)域，在非梗死區(qū)域可檢測到極少量的標(biāo)記的ADAS。有研究表明化學(xué)歸巢因子可能促使移植的干細胞向腦缺血區(qū)域遷移。據(jù)報道21 ，大鼠局灶性腦缺血后，缺血腦組織內(nèi)的單核細胞化學(xué)趨化

33、蛋白一1 (monocyto chemoattractant protein-1 , MCP -1)明顯升高;體外研究發(fā)現(xiàn)，缺血腦組織提取物能促進骨髓基質(zhì)細胞(MSCs)的遷移而加用抗MCP- 1抗體后，MSCs的遷移明顯受抑。說明炎性化學(xué)趨化因子MCP-1可促進MScs的遷移并分布至腦缺血部位。此外，巨噬細胞炎性蛋白一la(macrophage inflammatory protein-lalpha , MIP-la)， 白介素一8(interleukin-8,IL-8)等炎性化學(xué)趨化因子及炎性細胞因子也有促進MSCs在缺血腦組織內(nèi)的遷移的作用22 。有報道發(fā)現(xiàn)ADSCs有著一些與骨髓基質(zhì)細

34、胞同樣的細胞粘附分子和受體分子，ADSCs的蛋白表達譜與。RNA與骨髓基質(zhì)細胞相似23 ，表明ADSCs在組織工程學(xué)與再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域可能有著與骨髓基質(zhì)細胞相似的潛力，因此上述化學(xué)因子可能也對ADSCs同樣有“招募”作用。同時對各組大鼠神經(jīng)功能缺損評分發(fā)現(xiàn)：各移植組大鼠腦梗死體積與未處理組及同時間點對照組相比有顯著性降低（P0.05），在各移植組中又以3小時組腦梗死體積最低，與72小時組相比有顯著性差異（P0.05），這說明靜脈移植ADSCs能改善大鼠腦缺血所致的神經(jīng)功能缺損，減小腦梗死體積。ADSCs促使神經(jīng)功能改善及縮小梗死體積的具體機制目前仍然不十分明確，目前有以下兩種觀點:一是移植的細胞可

35、以遷移至缺血區(qū)域并替代受損的腦組織:二是增加神經(jīng)生長因子的分泌來實現(xiàn)。本實驗發(fā)現(xiàn)移植后14天雖然有大量的Brdu陽性的細胞聚集在缺血區(qū)域周圍，但是僅有大約2.4%和6.9%植入干細胞表達神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細胞的標(biāo)志物，不足以完全替代損傷的神經(jīng)細胞構(gòu)成神經(jīng)反射回路起到代償功能;因此盡管ADSC移植治療后表達神經(jīng)細胞的蛋白表型，我們?nèi)匀徊荒苷J為這些細胞確實分化并替代了受損的腦組織，細胞移植治療產(chǎn)生效果更可能的機制是減少缺血半影區(qū)的細胞凋亡、增加神經(jīng)生長因子的分泌來實現(xiàn)。當(dāng)前對ADSCs治療缺血性腦損傷移植時間點的選擇也頗有爭議，Mampalam等 認為移植時問應(yīng)選擇在MCAo后2-15天進行，另一些

36、學(xué)者則認為3周時腦組織較為適合移植物的生長，也有一些學(xué)者認為3周時再行NSC移植己不能逆轉(zhuǎn)缺血后繼發(fā)的丘腦萎縮24.25。Satoshi等則在不同時間點對MCAo動物模型移植BMSCs后發(fā)現(xiàn)存在明顯的組織學(xué)和動物行為學(xué)上的差異，而以早期移植效果最佳26 。本研究發(fā)現(xiàn)3小時移植組與其它時間點移植組相比能夠獲得更明顯的神經(jīng)功能改善，一方面，考慮不同缺血損傷后的不同時程，神經(jīng)元的活力和狀態(tài)不一樣，隨著時間的推移，越來越多的神經(jīng)細胞將發(fā)生不可逆損害，所以早期移植更利于保護缺血半影區(qū)腦組織，縮小缺血半影區(qū)體積;另一方面，一些凋亡因子，如Caspase-3是細胞凋亡蛋白酶級聯(lián)反應(yīng)的必經(jīng)之路，在凋亡過程中尤

37、其是缺血所致的凋亡過程中起著關(guān)鍵性的作用。值得注意的是我們的研究結(jié)果表明早期移植效果較好，然而即使是72小時移植組與同時間點的對照組相比仍然獲得了神經(jīng)功能的改善和缺血體積的縮小。盡管目前多種供體細胞都作為卒中治療的細胞來源，脂肪干細胞仍以更多的優(yōu)勢吸引著研究者的目光:取材容易，取材量大，能反復(fù)取材，損傷較小，能保持穩(wěn)定的倍增能力和低水平的衰減，體外擴增簡單易行，因此極有可能會成為多種疾病治療的新替代細胞源。參考文獻1Huang J I ,Beanes SR ,Zhu M ,et al.Rat extramedullary adipose tissue as a source of osteoc

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