菌落總數(shù)和大腸菌群數(shù)測定

1、關(guān)于菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測定第一張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月主要內(nèi)容菌落總數(shù)測定大腸菌群測定MPN法原理（拓展內(nèi)容）第二張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月菌落總數(shù)測定掌握菌落總數(shù)測定方法實驗原理 不同稀釋度的樣品，營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，36 ，48h（水產(chǎn)品30 ，72h ），菌落數(shù)第三張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月菌落總數(shù)測定器材與試劑： 樣品，無菌生理鹽水，平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基，1ml吸管，培養(yǎng)皿第四張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月菌落總數(shù)測定第五張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月傾注培養(yǎng)第六張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月培養(yǎng)結(jié)果第七

2、張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月菌落總數(shù)測定實驗步驟 5.菌落計數(shù)： 肉眼觀察，可用放大鏡，可標記 必要時分區(qū)計數(shù)，菌落成片者作廢計算方法 某稀釋度的菌落數(shù)：兩平板菌落數(shù)取平均值 選擇菌落數(shù)在30-300之間的稀釋度 （1）僅有一個稀釋度在此范圍： 菌落數(shù)稀釋倍數(shù)第八張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月菌落總數(shù)測定計算方法： （2）有兩個稀釋度在30-300之間 菌落數(shù)之比2，選較小值 菌落數(shù)之比300 取稀釋倍數(shù)最大者 （4）所有稀釋度均30 取稀釋倍數(shù)最小者 （5）沒有任何稀釋度在30-300之間 選最接近該范圍者結(jié)果單位：CFU/ml（g）第九張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于

3、2022年6月菌落總數(shù)測定注意事項： 1.無菌操作 2.標記 3.何時更換吸管 4.吸吹混勻 5.瓊脂培養(yǎng)基保溫 6.安全常識第十張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月大腸菌群數(shù)測定實驗?zāi)康膶嶒炘?36 ，48h，產(chǎn)氣（小倒管） 三步法：初發(fā)酵、復(fù)發(fā)酵器材與試劑 樣品、無菌生理鹽水、LST肉湯，BGLB肉湯 1ml吸管、10ml吸管、試管、小倒管第十一張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月初發(fā)酵器材與試劑樣品、225ml無菌生理鹽水、9ml無菌生理鹽水、雙料LST肉湯，單料LST肉湯，10ml吸管、1ml吸管、吸球第十二張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月大腸菌群數(shù)測定實驗步驟

4、： 1.初發(fā)酵 第十三張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月第十四張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月第十五張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月吸取樣品方法第十六張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月加注樣品第十七張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月初發(fā)酵結(jié)果右邊為陽性結(jié)果，小倒管內(nèi)有氣體產(chǎn)生。第十八張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月實驗步驟 3.復(fù)發(fā)酵 （1）選取產(chǎn)氣試管 （2）接種至10mlBGLB肉湯中 （3）培養(yǎng)：36，48h （4）觀察指標：若產(chǎn)氣則報告大腸菌群陽性。第十九張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月大腸菌群數(shù)測定實驗步驟 2.分離培養(yǎng)

5、 （1）制備伊紅美藍平板： 45 ，無菌，傾注，15ml （2）選產(chǎn)酸產(chǎn)氣的發(fā)酵管 （3）接種至伊紅美藍平板 分區(qū)劃線法 （4）培養(yǎng)： 36，48h第二十張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月分離培養(yǎng)器材與試劑 初發(fā)酵結(jié)果（4只發(fā)酵管）、酒精燈、接種環(huán)、伊紅美蘭平板培養(yǎng)基第二十一張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月分區(qū)劃線法第一區(qū)劃線滅菌接種環(huán)第二區(qū)劃線滅菌接種環(huán)第三區(qū)劃線滅菌接種環(huán)第二十二張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月分區(qū)劃線法操作要點 1.劃下一個區(qū)前必須滅菌接種環(huán) 2.劃線時接種環(huán)同平板呈30-40角 3.每次劃線應(yīng)該壓到上一個區(qū)域的2-3條線 4.用接種環(huán)的“面”

6、而不是“弧”在平板上滑動第二十三張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月大腸菌群數(shù)測定實驗步驟 2.分離培養(yǎng)： （5）菌落特征： 深紫黑色、有金屬光澤 紫黑色、無或略有金屬光澤 淡紫紅色、中心顏色深 （6）革蘭染色、鏡檢：選特征菌落第二十四張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月革蘭染色法器材與試劑 結(jié)晶紫、盧戈碘液、95%乙醇、酸性復(fù)紅、生理鹽水、酒精燈、載玻片、濾紙第二十五張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月革蘭染色法涂片：接種環(huán)，挑取菌落， 生理鹽水一滴，涂勻熱固定：通過火焰若干次初染：結(jié)晶紫一滴，1min，水洗媒染：盧戈碘液一滴，1min，水洗脫色：95%乙醇，30s或至無色

7、為止復(fù)染：復(fù)紅一滴，30s第二十六張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月涂片第二十七張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月熱固定第二十八張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月初染第二十九張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月媒染第三十張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月脫色第三十一張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月復(fù)染第三十二張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月革蘭氏染色陰性革蘭氏染色陽性革蘭染色法第三十三張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月復(fù)發(fā)酵器材與試劑 培養(yǎng)24小時后的伊紅美蘭平板、酒精燈、接種環(huán)、復(fù)發(fā)酵管第三十四張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于20

8、22年6月大腸菌群數(shù)測定實驗步驟 3.復(fù)發(fā)酵 （1）選取鑒定為無芽孢G-桿菌的菌落1-3個 （2）接種至10ml乳糖蛋白胨培養(yǎng)液 （3）培養(yǎng)：37，24h （4）觀察指標：產(chǎn)酸，產(chǎn)氣第三十五張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月液體接種第三十六張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月復(fù)發(fā)酵復(fù)發(fā)酵陽性結(jié)果，培養(yǎng)基變成黃色，小倒管內(nèi)有氣體產(chǎn)生第三十七張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月大腸菌群數(shù)測定注意事項： 1.無菌操作 2.吸管使用 3.洗去染液的方法 4.顯微鏡保養(yǎng) 5.液體接種第三十八張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月MPN法原理MPN法（Most Probable N

9、umber Method）目的：對某種細菌進行選擇性計數(shù)核心思想：泊松分布實施方法：多次稀釋直至無菌，每個稀釋度分別接種若干培養(yǎng)管，根據(jù)陽性管數(shù)估算MPN值第三十九張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月MPN法原理MPN法（Most Probable Number Method）1.細菌進入發(fā)酵管的概率近似服從泊松分布: P(x=k)=e-x xk/k! x:細菌濃度，k:進入發(fā)酵管的細菌數(shù)2.若在n管發(fā)酵中，令接種水樣量為Vi，陽性管數(shù)為Pi，陰性管數(shù)為Qi，則該檢驗結(jié)果發(fā)生的概率為： 其中C為常系數(shù) V為總水樣量，x為細菌個數(shù)第四十張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月MPN法原理3.當(dāng)y(x)max，XMPN4.由于y(x)為單極值函數(shù)，令dy/dx=0,即5.解此方程，得x=M