菊花組織培養(yǎng)經(jīng)典

1、關(guān)于菊花的組織培養(yǎng)經(jīng)典第一張，PPT共四十五頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第二張，PPT共四十五頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月菊花的組織培養(yǎng)第三張，PPT共四十五頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月有絲分裂受精卵細(xì)胞分化 在個(gè)體發(fā)育中，由一個(gè)或一種細(xì)胞增殖產(chǎn)生的后代，在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和生理功能上發(fā)生穩(wěn)定性差異的過(guò)程。1、細(xì)胞分化的概念知識(shí)回顧（一）第四張，PPT共四十五頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 黑色素細(xì)胞在體外培養(yǎng)30多代后仍能合成黑色素；離體培養(yǎng)的上皮細(xì)胞，始終保持為上皮細(xì)胞，而不會(huì)變成其他類型的細(xì)胞。 2、穩(wěn)定性3、不可逆性細(xì)胞分化發(fā)生在整個(gè)生命進(jìn)程中。1、持久性2、細(xì)胞分化的特點(diǎn) 造血干細(xì)胞 原紅細(xì)胞 早幼紅細(xì)胞

2、中幼紅細(xì)胞 晚幼紅細(xì)胞 成熟紅細(xì)胞 死亡4、普遍性第五張，PPT共四十五頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 細(xì)胞分化是否意味著細(xì)胞中遺傳物質(zhì)的改變？ 遺傳物質(zhì)沒(méi)有改變，不同組織的細(xì)胞共同來(lái)源于受精卵，經(jīng)有絲分裂產(chǎn)生。第六張，PPT共四十五頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月3、細(xì)胞分化的實(shí)質(zhì)ABDCEEDCABEDCABEDCABEDCAB基因在個(gè)體發(fā)育過(guò)程中，不同細(xì)胞中遺傳信息的執(zhí)行情況不同即基因的選擇性表達(dá)的過(guò)程第七張，PPT共四十五頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 紅細(xì)胞合成血紅蛋白 (不合成肌動(dòng)蛋白)肌細(xì)胞肌動(dòng)蛋白基因開啟合成肌動(dòng)蛋白 (不合成血紅蛋白)肌動(dòng)蛋白基因關(guān)閉血紅蛋白基因關(guān)閉血紅蛋白基因開啟試一試:現(xiàn)在你

3、能解釋這些現(xiàn)象了嗎?4、細(xì)胞分化的結(jié)果細(xì)胞產(chǎn)生了不同種類的蛋白質(zhì)即出現(xiàn)了不同的結(jié)構(gòu)和功能第八張，PPT共四十五頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月愈傷組織胚狀體1958，美國(guó)，斯圖爾德 植物組織培養(yǎng)離體回顧知識(shí)（二）第九張，PPT共四十五頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（一）、植物組織培養(yǎng)概念關(guān)鍵詞： 外植體、脫分化、再分化、愈傷組織 在無(wú)菌和人工控制條件下，將離體的植物器官、組織、細(xì)胞，培養(yǎng)在人工配置的培養(yǎng)基上，給予適宜的培養(yǎng)條件，誘導(dǎo)其脫分化產(chǎn)生愈傷組織再分化形成叢芽，最終形成完整的植株。又稱：植物離體培養(yǎng)第十張，PPT共四十五頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月脫分化（或去分化）：由高度分化的植物組織或細(xì)胞產(chǎn)生愈傷組織

4、的過(guò)程。再分化：脫分化產(chǎn)生的愈傷組織繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)，又可以重新分化成根或芽等器官的過(guò)程。外植體：用于離體培養(yǎng)的植物器官或組織片段。愈傷組織：細(xì)胞排列疏松、無(wú)規(guī)則、高度 液泡化的無(wú)定形的薄壁細(xì)胞。第十一張，PPT共四十五頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月切取形成層無(wú)菌接種誘導(dǎo)愈傷組織的形成試管苗的形成培養(yǎng)室移栽脫分化再分化（二）、植物組織培養(yǎng)的基本過(guò)程第十二張，PPT共四十五頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月植物組織培養(yǎng)過(guò)程:離體組織或細(xì)胞植物體脫分化細(xì)胞分裂素生長(zhǎng)素愈傷組織芽根細(xì)胞分裂素生長(zhǎng)素細(xì)胞分裂素生長(zhǎng)素細(xì)胞分裂素生長(zhǎng)素細(xì)胞分裂素有利于根的分化有利于芽的分化，抑制根的分化促進(jìn)愈傷組織生長(zhǎng)第二十三張，PPT共四十

5、五頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月思考：以下培養(yǎng)基出現(xiàn)的現(xiàn)象反應(yīng)了什么問(wèn)題？生長(zhǎng)素/細(xì)胞分裂素高 利于根的形成適中 利于愈傷組織的形成第二十四張，PPT共四十五頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月供參考的配方1、誘導(dǎo)菊花愈傷組織：在MS培養(yǎng)基中加入BA和NAA，質(zhì)量濃度均為0.5mg、誘導(dǎo)菊花從芽：在MS培養(yǎng)基中加入BA和NAA，質(zhì)量濃度分別為2-3mg和0.020.03mg3、誘導(dǎo)菊花生根：在MS培養(yǎng)基各成分用量減半，并添加入NAA或IAA，質(zhì)量濃度均為0.1mg第二十五張，PPT共四十五頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月(4)、pH、溫度、光照（菊花組織培養(yǎng)為例） pH=5.8 溫度控制在1822 每日光照12h第二十

6、六張，PPT共四十五頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月制備MS固體培養(yǎng)基外植體消毒 接種 培 養(yǎng)栽 培四、實(shí)驗(yàn)操作 移 栽沖洗酒精無(wú)菌水沖洗氯化汞無(wú)菌水沖洗至少三次之上配制各種母液配制培養(yǎng)基滅菌第二十七張，PPT共四十五頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（一）制備MS固體培養(yǎng)基MS培養(yǎng)基包括20多種營(yíng)養(yǎng)成分，實(shí)驗(yàn)室一般使用4保存配制好的培養(yǎng)基母液來(lái)制備1、配制各種母液無(wú)機(jī)物中大量元素濃縮10倍，微量元素濃縮100倍，常溫保存激素類、維生素類以及用量較小的有機(jī)物一般可按1mg/ml的質(zhì)量濃度單獨(dú)配制成母液用母液配制培養(yǎng)基時(shí)，需要根據(jù)各種母液的濃縮倍數(shù)，計(jì)算用量第二十八張，PPT共四十五頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月2、配

7、制培養(yǎng)基分裝到錐形瓶中，每瓶分裝50ml或100ml 配制培養(yǎng)液 調(diào)PH培養(yǎng)基的分裝 由于菊花的莖段的組織培養(yǎng)比較容易，因此不必添加植物激素3、滅菌分裝好的培養(yǎng)基連同其他器械一起進(jìn)行高壓蒸汽滅菌第二十九張，PPT共四十五頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月1、選材：菊花莖段，取生長(zhǎng)旺盛的嫩枝（二）外植體消毒2、消毒流水沖洗菊花莖段用流水沖洗后可少許洗衣粉，用軟刷輕輕刷洗，刷洗后在流水下沖洗20min左右 酒精處理用無(wú)菌吸水紙吸干外植體表面的水分，放入體積分?jǐn)?shù)為70的酒精中搖動(dòng)23次，持續(xù)67s，立即將外植體取出，在無(wú)菌水中清洗 消毒液處理取出后用無(wú)菌吸水紙吸干外植體表面的水分，放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1的氯化汞

8、溶液中12min，取出后在無(wú)菌水中至少清洗3次，漂凈消毒液第三十張，PPT共四十五頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（三）接種污染的主要來(lái)源是空氣中的細(xì)菌和孢子，接種室消毒是至關(guān)重要的。用70的酒精噴霧使空氣消毒， 酒精或新潔爾滅搽洗工作臺(tái)并用紫外線照射20分鐘1、接種室消毒2、無(wú)菌操作要求操作要在酒精燈火焰旁完成，每次使用器械后，都需要用火焰灼燒滅菌，接種后立即蓋好瓶蓋。3、材料的切取和接種第三十一張，PPT共四十五頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第三十二張，PPT共四十五頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月4、接種注意事項(xiàng)每接種一塊外植體前，鑷子需放入體積分?jǐn)?shù)為70的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精燈火焰上燒一遍，冷卻后

9、再接種外植體在培養(yǎng)基中要分布均勻，放置外植體數(shù)量根據(jù)錐形瓶的大小確定，一般胡蘿卜34塊，菊的莖或葉68塊，也不要太少，以充分利用培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)成分和光照條件插入時(shí)應(yīng)注意方向，不要倒插。莖段、莖尖基部插入培養(yǎng)基利于吸收水分和養(yǎng)分第三十三張，PPT共四十五頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月正常苗污染苗第三十四張，PPT共四十五頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月1、外植體帶菌2、培養(yǎng)基及接種器具滅菌不徹底3、接種操作時(shí)帶入4、環(huán)境不清潔污染途徑第三十五張，PPT共四十五頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月思考：你打算做幾組重復(fù)？你打算設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)嗎？答：每種材料或配方至少要做一組以上的重復(fù)。設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)可以取用一個(gè)經(jīng)過(guò)滅菌的裝有培

10、養(yǎng)基的錐形瓶，與接種操作后的錐形瓶一同培養(yǎng)，用以說(shuō)明培養(yǎng)基制作合格，沒(méi)有被雜菌污染。第三十六張，PPT共四十五頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（四）培養(yǎng)接種后的錐形瓶最好放在無(wú)菌箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)期間應(yīng)定期消毒培養(yǎng)溫度控制在18-22每日用日光燈光照12h第三十七張，PPT共四十五頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（五）移栽 移栽生根的菊花試管苗之前，應(yīng)先打開培養(yǎng)瓶的封口膜，讓試管苗在培養(yǎng)間生長(zhǎng)幾日1、打開封口膜2、清洗轉(zhuǎn)移 用流水清洗根部的培養(yǎng)基，將幼苗移植到消過(guò)毒的蛭石或珍珠巖等環(huán)境下生活一段時(shí)間3、移栽幼苗長(zhǎng)壯后，移栽到土壤中第三十八張，PPT共四十五頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月固體基質(zhì)型，含水量高、蓄水性強(qiáng)、透

11、性好，適合栽培珍珠巖 ,珍珠巖是一種火山噴發(fā)的酸性熔巖，經(jīng)急劇冷卻而成的玻璃質(zhì)巖石，有弧形或圓形裂隙，如珍珠的結(jié)構(gòu)，所以被命名為珍珠巖 。蛭石是一種天然、無(wú)毒的礦物質(zhì)，在高溫作用下會(huì)膨脹的礦物。它是一種比較少見(jiàn)的礦物，屬于硅酸鹽。 第三十九張，PPT共四十五頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（六）栽培 幼苗移栽后，每天觀察并記錄幼苗的生長(zhǎng)情況，適時(shí)澆水、施肥，直至開花第四十張，PPT共四十五頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月1、培養(yǎng)基的滅菌（高壓蒸汽滅菌）2、外植體的消毒（酒精、氯化汞）3、接種的無(wú)菌操作（酒精、酒精燈灼燒）4、無(wú)菌箱中的培養(yǎng)；5、移栽到消過(guò)毒的環(huán)境中生存一段時(shí)間。在整個(gè)操作過(guò)程中，是如何來(lái)實(shí)現(xiàn)無(wú)菌環(huán)境的？第四十一張，PPT共四十五頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月結(jié)果分析與評(píng)價(jià)（一）對(duì)接種操作中污染情況的分析（二）是否完成了對(duì)植物組織的脫分化和再分化（三）是否進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)、對(duì)照與記錄（四）生根苗的移栽是否合格第四十二張，PPT共四十五頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月五、課題延伸1、一般來(lái)說(shuō)，容易進(jìn)行無(wú)性繁殖的植物，也容易進(jìn)行組織培養(yǎng)2、實(shí)例：蘆薈、豆瓣綠、秋海棠、月季第四十三張，PPT共四十五頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月練習(xí)1.答：植物組織培養(yǎng)所利用的植物材料體積小、抗性差，對(duì)培養(yǎng)條件的要求較高。用于