實驗二革蘭氏染色及細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)觀

1、實驗二 細(xì)菌的染色細(xì)菌的簡單染色細(xì)菌的革蘭氏染色芽孢染色莢膜的染色11、掌握細(xì)菌的簡單染色法，初步認(rèn)識細(xì)菌的形態(tài)特征2、學(xué)習(xí)細(xì)菌的革蘭氏染色原理和方法3、了解細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)：芽孢和莢膜5、學(xué)習(xí)訓(xùn)練無菌操作技術(shù)。實驗?zāi)康? 細(xì)菌細(xì)胞微小，透明，不易觀察，需染上顏色。利用單一染料對細(xì)菌進(jìn)行染色，使經(jīng)染色后的菌體與背景形成明顯的色差，從而能更清楚地觀察到其形態(tài)和結(jié)構(gòu)。 簡單染色是利用單一染料對細(xì)菌進(jìn)行染色的一種方法，適用于菌體一般形狀和細(xì)菌排列的觀察。 實驗原理1 細(xì)菌的簡單染色3 常用作簡單染色的染料有：美藍(lán)、結(jié)晶紫、堿性復(fù)紅等。實驗原理 (continued) 常用堿性染料進(jìn)行簡單染色，因為在中

2、性、堿性或弱酸性溶液中，細(xì)菌細(xì)胞通常帶負(fù)電荷，而堿性染料在電離時，其分子的染色部分帶正電荷，因此堿性染料的染色部分很容易與細(xì)菌結(jié)合使細(xì)菌著色，經(jīng)染色后的細(xì)菌與背景形成鮮明的對比，在顯微鏡下更易于識別。41、菌種枯草芽孢桿菌培養(yǎng)物1d2、染色劑石碳酸復(fù)紅染液實驗材料 5菌懸液滴加無菌水取菌苔操作步驟涂片固定干燥染色水洗干燥鏡檢61、涂片 取兩塊載玻片，各滴一小滴（或用接種環(huán)沾?。┥睇}水（或無菌水）于玻片中央，用接種環(huán)以無菌操作從枯草桿菌斜面上挑取少許菌苔于水滴中，混合并涂成薄膜。 如用菌懸液或液體培養(yǎng)物，可用接種環(huán)挑取1-2環(huán)直接涂于載玻片上。 Notes: 1） 載玻片要潔凈無油跡 2）滴生

3、理鹽水和取菌不宜過多 3）涂片要涂抹均勻，不宜過厚。操作步驟（continued） 73、固定固定的目的：1）使細(xì)胞質(zhì)凝固，以固定細(xì)胞形態(tài)；2）并使菌體牢固地附著在載玻片上。固定方法：涂面朝上，通過火焰數(shù)次注意：溫度不宜過高，以玻片背面不燙手為宜，否則會改變甚至破壞細(xì)胞形態(tài)操作步驟（continued） 2、干燥 室溫自然干燥84、染色 將玻片平放于桌面上，滴加染液于涂片上（染液剛好覆蓋涂片薄膜為宜）。 石碳酸復(fù)紅染色約1min。操作步驟（continued） 5、水洗 倒去染液，用洗瓶（或自來水）輕輕沖洗，直至涂片上流下來的水無色為止。Note: 水洗時，不要直接沖洗涂面，而應(yīng)使水從載玻片的

4、一端流下，水流不宜過急，以免涂片薄膜脫落。97、鏡檢一般使用油鏡（100倍）觀察細(xì)菌個體形態(tài)。要觀察染色結(jié)果并繪圖。操作步驟（continued） 6、干燥自然干燥或用電吹風(fēng)吹干，也可用吸水紙吸干。Notes: 必須等涂片完全干后才可滴加香柏油10 單染色法只能觀察微生物的大小、形狀、和細(xì)胞排列狀況，但不能鑒別微生物以及它的特殊構(gòu)造等。復(fù)染色法：用兩種或兩種以上染色液進(jìn)行染色，有協(xié)助鑒別微生物的作用，故也稱鑒別染色法。常用的有：革蘭氏染色法、芽孢染色法、抗酸染色法等2、革蘭氏染色11細(xì)菌細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)12G細(xì)胞壁的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)致密，交聯(lián)度高，用乙醇處理后，發(fā)生脫水作用，肽聚糖層孔徑縮小，透性降低，故

5、細(xì)菌仍保留初染時的紫色。 G肽聚糖層較薄，交聯(lián)度低，含較多類脂質(zhì)，故用乙醇處理后，類脂質(zhì)被溶解，細(xì)胞壁孔徑變大，通透性增加，使初染的結(jié)晶紫和碘的復(fù)合物易于滲出，細(xì)胞被脫色，經(jīng)沙黃復(fù)染呈紅色。革蘭氏染色的實驗原理結(jié)晶紫初染碘液媒染乙醇脫色番紅復(fù)染涂片固定13革蘭氏染色的步驟1. 涂片2. 初染：滴加草酸銨結(jié)晶紫染液，染1分鐘，傾去染液，流水沖洗至無紫色。3. 媒染：先用新配的路哥氏碘液沖去殘水，而后用其覆蓋涂面1分鐘，后水洗。4. 脫色：除去殘水后，滴加95%酒精進(jìn)行脫色約1520秒后，立即用流水沖洗。5. 復(fù)染：滴加番紅染色液，染35分鐘，水洗后用吸水紙吸干。 6. 鏡檢：觀察染色結(jié)果并繪圖。

6、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、自己接種的斜面培養(yǎng)物14Figure 1 - A Gram stain of Gram + Staphylococcus cells. Figure 2 - Gram stain of Gram E. coli cells153 枯草桿菌芽孢的染色枯草芽孢桿菌2（24h培養(yǎng)物）1、制備菌液：加4-6滴蒸餾水于小試管中，用接種環(huán)從斜面挑取菌體3-5環(huán)于試管中充分混勻。（7人一組）2、染色：加孔雀綠5滴于小試管中。3、加熱：沸水浴，15-20分鐘。4、涂片：用接種環(huán)從小試管中取一環(huán)菌涂于一干凈載玻片上，制成涂片。5、干燥、火焰固定6、水洗：用水洗至流出的水中無綠色為止。7、復(fù)染：加復(fù)紅染色1-2分鐘，水洗，吸水紙吸干。、鏡檢：10 x ，40 x 、100X（油鏡）觀察。繪圖164 細(xì)菌莢膜的染色莢膜負(fù)染色法：膠質(zhì)芽胞桿菌1、制片：取潔凈的載玻片一塊，加一滴黑墨水，取少量的菌體放入墨水滴中混勻并涂片。（也可用刮片法：另取一載玻片，以三十度角將其邊緣浸入黑素中向右端拖動，將黑素涂成一薄層。）2、鏡檢：10 x ，40 x 物鏡觀察（注意物鏡不要接觸黑素，不要用油鏡觀察）17實驗報告1、細(xì)菌簡單染色、革蘭氏染色的原理、方法和步驟。2 記錄所觀察到的染色結(jié)果，