結核病痰涂片及 質(zhì)量保證

1、結核病痰涂片檢查及質(zhì)量保證1一、痰涂片檢查2（一）結核病細菌實驗室布局原則1、結核病細菌學檢查要有獨立的實驗室，不得與其他實驗室混用，最好為P3級實驗室；2、培養(yǎng)基制備、洗刷等相對潔凈的操作與涂片鏡檢、培養(yǎng)前處理、藥敏試驗等污染操作要有獨立分開的場所，最好分別在專用的房間進行；33、基層只從事涂片鏡檢的實驗室只擁有一間獨立房舍的情況下，相對潔凈區(qū)（鏡檢區(qū)、登記區(qū)）與污染區(qū)（涂片、染色區(qū)）要有明顯區(qū)分。4（二）痰標本的收集和運送干酪痰、血痰或粘液痰為合格標本，量應為3-5毫升。難以獲得合格標本時，也應進行細菌學檢查，但應注明標本性狀，以供分析結果時參考。收集標本的容器應采用國家參比室推薦的標準痰

2、瓶，或采用直徑4厘米、高2厘米的廣口塑料（或蠟紙）的或密閉容器。5容器上應注明與檢驗單一致的病人姓名、編號及日期。需送上一級實驗室檢查的痰標本應置4冰箱保存，外送前認真核對檢驗單與痰瓶上標注，放專用的冰盒內(nèi)運送，或用紙袋、塑料袋封扎牢后順序放入包裝盒，盒外注明請勿倒置標志。6（三）痰涂片操作流程及顯微鏡檢報告方式直接涂片法操作流程：1、涂痰膜（大小1020），自然干燥2、復紅加熱初染5分鐘3、流水沖洗4、鹽酸酒精脫色3分鐘(必要時重復脫色，但不要過度）5、流水沖洗6、美蘭復染30秒7、流水沖洗8、自然干燥，鏡檢7顯微鏡檢報告方式：0條/300視野：萋-尼氏抗酸桿菌陰性1-8條/300視野：實報

3、菌數(shù)并重檢3-9條/100視野：萋-尼氏抗酸桿菌陽性（+）1-9條/10視野：萋-尼氏抗酸桿菌陽性（2+）1-9條/1視野：萋-尼氏抗酸桿菌陽性（3+） 10條/1視野：萋-尼氏抗酸桿菌陽性（4+）8（四）細菌學常規(guī)檢查的注意事項選擇痰標本中膿性、血樣、干酪樣的部分涂片陽性率較高；一張玻片只涂一份標本，玻片一次性使用，防止交叉污染；打開痰盒、涂抹痰膜、燒灼接種環(huán)時容易產(chǎn)生氣溶膠，應注意正確操作和自身防護；石炭酸復紅初染時必須加溫。9常見誤差原因見下表10常見類型可能原因建議假陽性（FP）1.例如染料沉渣或結晶等被誤識為抗酸桿菌2.原始報告后著色的抗酸桿菌退色1.對技術人員復訓2.對假陽性涂片重

4、新染色并復檢假陰性（FN）1.觀察涂片的視野數(shù)量不夠2.鏡檢技術能力差3.染色操作不規(guī)范4.顯微鏡存在問題5染液質(zhì)量差1.2.3.對技術人員復訓4.現(xiàn)場檢查顯微鏡狀態(tài)5.重新購置質(zhì)量合格的染料并重新配制染液量化誤差（QE）1.觀察涂片的視野數(shù)量不夠2.陽性涂片的分級報告標準掌握差3.鏡檢技術能力差4.顯微鏡存在問題1.2.3.對技術人員復訓4.現(xiàn)場檢查顯微鏡工作狀態(tài)11(六)廢棄標本和污染物的處理廢棄標本、痰盒和污染物均須經(jīng)高壓蒸汽滅菌后方能丟棄或清洗；如需焚燒處理，須置于焚燒爐內(nèi)徹底焚化。焚化不徹底或暴露焚燒是危險的；專業(yè)處理：試驗操作工作面應以3%石炭酸或其他可靠的消毒液擦拭，再用紫外線滅

5、菌燈照射30分鐘。12二、痰涂片鏡檢的實驗室質(zhì)量保證13 按照世界衛(wèi)生組織（World Health Organization)和國家結核病防治規(guī)劃(Nationaltuberculosis programme）的要求，在我國已全面推行DOTS策略或DOTS策略得到良好的貫徹執(zhí)行的地區(qū)，為了持續(xù)提高結核病實驗室痰涂片檢查的工作效率和可靠性，必須建立我國結核病實驗室質(zhì)量保證系統(tǒng)網(wǎng)絡。在實驗室內(nèi)部質(zhì)量控制的基礎上，應用實驗室間質(zhì)量檢查和評估的方法，進行實驗室檢查系統(tǒng)的評價，并通過采用一系列措施改進和不斷提高實驗室業(yè)務總體水平。14（一）室內(nèi)質(zhì)量控制 室內(nèi)質(zhì)量控制(Quality Control,Q

6、C)指實驗室內(nèi)部的操作規(guī)程、設備和耗材、痰標本收集、染色劑制備、涂片制備和染色、顯微鏡維護、顯微鏡鏡檢、結果登記和報告、以及痰片保存等整個過程的內(nèi)部檢查和監(jiān)測。151、痰標本的收集（1）容器：采用WHO推薦的國際通用螺旋蓋痰瓶，或可密封塑料盒、蠟紙盒收集痰標本（參考規(guī)格：直徑4厘米，高度2厘米）。痰容器應標明病人姓名、日期、編號（初診病人門診序號或隨訪病人登記號）和容器序號1、2、3（1=當日即時痰，2=夜間痰，3=次日晨痰）。（2）痰標本性質(zhì)：干酷痰、血痰、粘液痰為合格標本；唾液或口水為不合格標本，除照常進行涂片檢查外，應要求患者重新送檢。16（3）初診病人應收集3份痰標本（當日即時痰、夜間

7、痰或次日晨痰），治療中或復診隨訪病人按期每次收集2份痰標本（當日即時痰、當日痰或次日晨痰）。（4）對當日不能進行涂片檢查的痰標本，須置于4冰箱保存，注意防止痰液干涸或污染。172、抗酸染色液制備（1）有染色液制備配方和配制紀錄。（2）染色液試劑瓶須標明染色液名稱、濃度和制備時間。（3）染色液置于棕色瓶內(nèi)存放，避光保存。183、載玻片（1）新載玻片應經(jīng)95%乙醇脫脂，檢查無劃痕后，方可使用。（2）一張載玻片只能涂抹1份痰標本。（3）載玻片只允許一次性使用，嚴禁清洗后重復使用。（4）載玻片只允許左側1/3處標注實驗室序號。（5）載玻片正面右側2/3中央處均勻涂抹成面積為10 20mm的卵圓形痰膜。

8、194、染色（1）肉眼觀察染色后的痰膜應呈均勻亮藍色，無紅色斑塊。（2）將染色后的玻片放置在報紙上，如果透過痰膜不能分辨報紙上的文字，則表明該玻片涂抹過厚。（3）染色后的痰膜脫落部分應小于整個涂抹面積的10%。205、鏡檢要求（1）為防止抗酸桿菌的交叉污染，嚴禁油鏡頭直接接觸涂片上的痰膜。（2）仔細觀察300視野。（3）每個工作日，一名鏡檢人員的涂片閱讀量不應超過25張。（4）連續(xù)閱讀10-20張涂片后，應休息20分鐘左右。（5）采用自查和互查方式，至少抽查復檢當日10%涂片，并填寫室內(nèi)質(zhì)控登記表。216、登記報告（1）登記前應對檢驗單、標本盒、涂片上的標注進行反復核對。（2）檢查后的第一張涂

9、片結果，應按規(guī)定準確記錄在“結核病細菌學實驗室登記本”上。（3）鏡檢結果報告應及時發(fā)出，以便盡早為臨床提供診斷依據(jù)。227、痰涂片保存（1）鏡檢后的涂片應及時用浸滿二甲苯（分析純）的擦鏡紙揭取數(shù)次，徹底祛除涂片上的鏡油。（2）涂片脫去鏡油后，必須再次核對實驗室登記本與每張涂片實驗序號。（3）涂片上嚴禁標記鏡檢的陰、陽性結果。（4）全部涂片按實驗室登記本序號連續(xù)排列，存放于玻片盒中。23（5）涂片保存與實驗室登記本記錄應保持一致。初診病人第一張涂片存入涂片盒后需預留出兩個空位置，以備第二張、第三張涂片檢查后放入；隨訪病人每一張涂片存入涂片盒后需預留出一個空位置，以備每二張涂片檢查后放入。（6）按

10、規(guī)定數(shù)量保存的用于室間質(zhì)量評估的涂片，未經(jīng)上級質(zhì)控單位準許不能自行銷毀。（7）裝滿涂片的玻片盒，需用標簽注明涂片實驗序號區(qū)間和日期區(qū)間，以便日后盲法復檢或現(xiàn)場評價時抽樣。24（二）室間質(zhì)控評估室間質(zhì)量評估是根據(jù)與其它網(wǎng)絡實驗室（中間級實驗室和中心實驗室）比較批量測試和盲法復檢結果評價基層實驗室能力的過程。EQA包括實驗室現(xiàn)場評估以評價操作質(zhì)量并且也包括現(xiàn)場對涂片的復讀。EQA是國際肺病和防癆聯(lián)合會描述的熟練度檢測的擴大。251、現(xiàn)場評估（1）要求： 國家參比室每年對省級參比室至少進行1次現(xiàn)場評價，同時每省至少抽查一個市及縣級結核病實驗室 省級參比室每年對所轄地（市）級實驗室至少進行1次現(xiàn)場評價

11、，同時每地（市）抽查1-2縣級實驗室；必要時，對同批量測試或盲法存在問題的市、縣實驗室，適當增加現(xiàn)場評價頻率。 市（地）級實驗室每年對所轄縣（區(qū)）實驗室每年至少進行2次現(xiàn)場評價。26 對批量測試或盲法復檢存在總是的縣級實驗室必須盡快查找原因 ，提高涂片鏡檢質(zhì)量。 現(xiàn)場督導員應由經(jīng)驗豐富的實驗室技術人員擔任，必須經(jīng)高一級實驗室有資格督導員培訓后方可上崗。 現(xiàn)場評價要按本操作細則所列項目順序進行，評價結果可結合當?shù)亟Y核病控制工作考核評比給分。27現(xiàn)場督導員的主要責任是通過現(xiàn)場評價發(fā)現(xiàn)問題，提出正確的建議解決問題，提高痰涂片鏡檢質(zhì)量。 上級實驗室對下級進行督導的時候，應當核對調(diào)查表和被評估實驗室實際情況，為此各級調(diào)查表應當保存五年以上。282、檢查步驟：現(xiàn)場評價操作步驟試劑供應實驗室安全顯微鏡用于室間質(zhì)量保證的玻片儲存涂片、染色和鏡檢現(xiàn)場復檢督導小組檢查和/或復檢印象盲法復檢痰片抽樣現(xiàn)場評估概述 292、盲法復檢30盲法復檢原則：從各個實驗室抽取的涂片樣品必須是隨機選出的，并能代表整個實驗室的操作水平。負責抽樣的督導員，必須保證復檢技術人員不知道初檢結果，以確保盲法復檢真實性。嚴格按照隨機原則抽取涂片，以保證抽取的樣本在統(tǒng)計學上真正代表被評估實驗室的整體水平。涂片初檢結果與第一復檢者盲法復檢結果之間的分歧，由第