血型與輸血技術(shù)系統(tǒng)和要求

1、血型與輸血技術(shù)系統(tǒng)和要求HLA系統(tǒng) 在研究組織移植過程中發(fā)現(xiàn)，移植物賴以存活的基礎(chǔ)由供者和受者細(xì)胞表面的抗原決定。這種引起移植物排斥反應(yīng)的抗原稱為移植抗原。亦稱為組織相容性抗原（histocompatibility antigen)。概述 根據(jù)其抗原的強弱和誘發(fā)排斥反應(yīng)的程度，分為主要組織相容性抗原（major histocompatibility antigen）和次要組織相容性抗原（minor histocompatibility antigen），其中能引起快而強排斥應(yīng)答的抗原系統(tǒng)稱為組織相容性系統(tǒng)（ major histocompatibility system,MHS），編碼MHS的

2、基因群稱為主要組織相容性復(fù)合體（ major histocompatibility complex,MHC）。 HLA抗原：是糖蛋白抗原。概述II類基因區(qū)III類基因區(qū)I類基因區(qū)人類HLA復(fù)合體集中在第6號染色體短臂。MHC的基因結(jié)構(gòu)：II類基因區(qū)III類基因區(qū)I類基因區(qū)編碼編碼HLA-II類分子HLA-I類分子補體成分等Nature,1999,401(28):9226號染色體短臂21、31區(qū)全長3,600Kb，占人基因組1/3000224個基因座位，128個功能基因，96個假基因40%功能基因具有免疫功能MHC-I類基因經(jīng)典(HLA-Ia):HLA-A,HLA-B,HLA-C 非經(jīng)典(HLA

3、-Ib):HLA-E,HLA-F,HLA-GMHC-II類基因經(jīng)典：HLA-DP,HLA-DQ,HLA-DR 非經(jīng)典： HLA-DO,HLA-DM,TAP1,TAP2; LMP2,LMP7MHC-III類基因血清補體成分編碼基因炎癥相關(guān)基因連鎖不平衡： 兩個或兩個以上基因座位的等位基因同時出現(xiàn)在一同一條染色體上的幾率高于或低于隨機出現(xiàn)頻率的現(xiàn)象。 指單倍型基因呈非隨機分布的現(xiàn)象，即某些基因總是經(jīng)常在一起出現(xiàn)，其單倍型頻率（實際檢測數(shù)值）比理論數(shù)值（各種等位基因頻率的乘積）要顯著增高，而另一些基因又較少出現(xiàn)在一起，這種非自由組合現(xiàn)象稱為連鎖不平衡 連鎖不平衡現(xiàn)象的可能原因某些單體型可能具有選擇優(yōu)

4、勢群體遷移和混雜基因隨機漂移近親繁殖 單元型遺傳： HLA的等位基因在同一條染色體上的特定組合稱為單元型。在遺傳過程中單元型作為一個完整遺傳單位由親代傳給自子代的現(xiàn)象。 在遺傳過程中，HLA復(fù)合體是以單元型作為一個完整的遺傳單位由親代傳給子代的，稱單元型遺傳。親子間有50%單元型相同；同胞間單元型完全相同或不同的機率為25%；一個單元型相同的為50%。HLA的多態(tài)性 (polymorphism )： 指在一隨機婚配的全體中，染色體同一基因座位有兩種以上的基因型，即可能編碼兩種以上的產(chǎn)物。 產(chǎn)生機制復(fù)等位基因 ( multiple allele ) 共顯性 ( codominance) HLA-

5、MHC 基因多態(tài)性多態(tài)性的意義： （1）賦于種群適應(yīng)多變環(huán)境的能力：抵御各種病原體的侵襲。 （2）調(diào)控機體免疫應(yīng)答的能力：MHC控制機體對特定抗原是否應(yīng)答以及應(yīng)答的強度。 （3）個體的終身遺傳標(biāo)志：無親緣個體間出現(xiàn)MHC型別完全相同的機率極低。 （4）尋找同種器官移植供體的依據(jù)：根據(jù)HLA配型結(jié)果篩選適宜供體，是尋找器官移植供體的唯一方法。 共顯性遺傳 每對等位基因所編碼的抗原都表達于細(xì)胞膜上，無隱性基因，也無等位基因排斥現(xiàn)象。 復(fù)等位基因 在同一基因位點存在兩個以上的基因。由于各個座位上等位基因是隨機組合的，故人群的基因型可達108。 1、 HLAI分子的結(jié)構(gòu)一、 HLAI類分子肽結(jié)合區(qū)：與

6、抗原肽結(jié)合部分，具有 多態(tài)性。Ig樣區(qū)：是TC細(xì)胞CD8分子對I類分子 識別結(jié)合的部位。 2m由15號染色體編碼，起穩(wěn)定分子構(gòu)型作用?？缒^(qū)：將I類分子錨定在細(xì)胞膜上。胞漿區(qū)：參與細(xì)胞內(nèi)外跨膜信號的 傳遞。鏈2m二、MHC分子的結(jié)構(gòu)：MHC-I類分子二、 HLA-類分子1、 HLA-的結(jié)構(gòu) 肽結(jié)合區(qū)：與抗原肽結(jié)合部 分， 具有多態(tài)性。Ig樣區(qū)：是TH細(xì)胞CD4分子識別結(jié)合的部位?？缒^(qū)： 將II類分子錨定在細(xì) 胞膜上。胞漿區(qū)：參與細(xì)胞內(nèi)外跨膜信號 的傳遞。二、MHC分子的結(jié)構(gòu)：MHC-II類分子兩條多肽鏈鏈：1和 2功能區(qū)鏈：1和 2功能區(qū)四個功能區(qū)肽結(jié)合區(qū)： 1 和1組成Ig樣區(qū)： 2和2組

7、成跨膜區(qū)胞漿區(qū) MHC-I類分子表達于除成熟紅細(xì)胞、滋養(yǎng)層細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞之外的各種有核細(xì)胞、血小板和網(wǎng)織紅細(xì)胞表面。MHC-II類分子主要表達于B細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、單核/巨噬細(xì)胞和活化的T細(xì)胞表面。一、MHC分子的分布： MHC-III類分子主要是一些存在于血清及其其他體液中的可溶性分子。（3）約束免疫細(xì)胞間相互作用（1）參與抗原加工和提呈，MHC和MHC不同（2）參與免疫應(yīng)答的遺傳控制HLA的功能：（4）參與免疫細(xì)胞的分化（一）參與加工提呈抗原抗原提呈細(xì)胞T淋巴細(xì)胞HLA抗原肽T細(xì)胞受體抗原（二）、參與T細(xì)胞限制性識別抗原肽HLAT細(xì)胞受體CD4/CD8(HLA-II/I類抗原識別受體)抗原

8、提呈細(xì)胞T細(xì)胞（三）參與T細(xì)胞分化及自身耐受的建立HLA分化免疫細(xì)胞帶自身抗原的細(xì)胞T建立中樞性自身耐受T正常T細(xì)胞自身反應(yīng)性T細(xì)胞（四）參與免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)調(diào)控HLA分子的表達水平活化活化抗原提呈細(xì)胞T淋巴細(xì)胞兩種抗原處理與遞呈途徑的比較II類MHC分子遞呈途徑 I類MHC分子遞呈途徑抗原的主要來源蛋白處理酶抗原處理細(xì)胞MHC抗原肽結(jié)合部位MHC分子遞呈對象吞噬的外來或自身抗原，在循環(huán)的膜表面自身抗原溶酶體中的溶酶體酶專業(yè)APC吞噬溶酶體II類CD4+T細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)合成的自身抗原或微生物抗原胞漿中的蛋白酶體所有的有核細(xì)胞粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)I類CD8+T細(xì)胞HLA臨床應(yīng)用HLA與器官 移植 HLA表達異常

9、與疾病的關(guān)系HLA與疾病的相關(guān)性HLA親子鑒定和法醫(yī)學(xué)HLA與輸血一、HLA與器官移植 進行組織器官移植時，往往因供受者之間的HLA型別不同而發(fā)生移植排斥反應(yīng)，其排斥反應(yīng)的強弱依次為：無親緣關(guān)系者親屬同胞同卵孿生兒HLA是決定移植手術(shù)是否成功的主要因素；移植物的存活率和存活時間與供者和受者之間HLA匹配程度密切相關(guān)；腎移植中，重要性依次為HLA-DR、HLA-B、HLA-A；人類HLA等位基因組合總數(shù)超過百萬億；HLA與器官移植 HLA表達異 常與疾病的關(guān)系HLA與疾病的相關(guān)性HLA親子鑒定和法醫(yī)學(xué)HLA與輸血 HLA 與疾病關(guān)聯(lián)研究熱點據(jù)不完全統(tǒng)計 , 大約有 50 多種疾病與 HLA 密切

10、相關(guān) , 目前 HLA與疾病關(guān)聯(lián)的研究熱點主要集中在兩方 面 : 一是 IDDM(I 型糖尿病 ) 與 DQ 的關(guān)聯(lián)，另一熱點是強直性脊椎炎 (ankihsing spongdility,AS) 與 HLA-B27 的關(guān)聯(lián) ,AS 患者90%95% 帶有 B27 抗原 , 而正常人群 B27的基因頻率約為 0.034, 因此對于臨床上懷疑為 AS 的患者檢查 B27 抗原具有診斷價值 。HLA異常表達與臨床疾病 腫瘤細(xì)胞因缺乏HLA-I類抗原，所以細(xì)胞毒性T細(xì)胞（CTL）對腫瘤細(xì)胞不能識別和殺傷。腫瘤細(xì)胞細(xì)胞毒性T細(xì)胞CD8CTL 舉例： 惡性腫瘤細(xì)胞 HLA-類分子表達減少或缺乏腫 瘤細(xì)胞逃

11、逸免疫監(jiān)視； 糖尿病異常表達HLA導(dǎo)致免疫細(xì)胞攻擊胰島細(xì)胞；HLA與疾病的關(guān)聯(lián) 如：90%以上的強直性脊柱炎患者帶有HLA-B27抗原。RR=1 時 , 無區(qū)別 ; RR4 時 , 相關(guān)較為肯定 ;RR1, 表示負(fù)相關(guān) , 是一種保護而不是易感。 HLA與法醫(yī)學(xué)做個HLA親子鑒定吧？ HLA 與親子鑒定和個體識別的關(guān)系 親子鑒定的基本原理有以下兩點 在肯定孩子的某個血型基因是來自生父 (biolog- cal father), 而假設(shè)父親 (alleged father) 并不帶有這個基因的情況下可以排除他是孩子的生 父。 在肯定孩子的某些血型基因是來自生父 , 而假設(shè)父親也帶有這些基因的情況

12、下 , 不能 排除他是孩子的生父。這時我們 可以計算他是孩子生父的可能性究竟有多大。 HLA 是人類最具遺傳多態(tài)性的血型系統(tǒng) , 其表型數(shù)以億計 , 除同卵雙生子外 , 兩個不同 個體問 HLA 全相合的概率極低 , 而且終生不變。因此 ,HLA 檢測在法醫(yī)學(xué)親子鑒定和個體 識別方面意義相當(dāng)大 , 表現(xiàn)在 : 由于HLA 具有單倍型遺傳的特點 , 每個子代均從其父母處得 到一條單倍型 , 因此可用于親子鑒定 ; 如用分子生物學(xué)的檢測方法 , 尚可對極少量的血痕進 行檢測 , 在法醫(yī)學(xué)上可用于兇犯或死者的身份鑒定。 通過檢測 HLA-A,B 和 Rh,MN,P,ABO 共 5 個血型系統(tǒng) , 可

13、使系統(tǒng)總的排除率達到 97.37% 左右。但 HLA檢測等不能鑒定陳舊、微量檢材 , 鑒別能力有限 , 目前國際上一般采用在法醫(yī)個體識別中起重要作用的VNTR(vamble number tadem repeat) 和SFIR(short tandem repeat) 座位用于親子鑒定 。 HLA 與人類研究 關(guān)于種族起源的人類學(xué)研究可從歷史、文化、語言、體質(zhì)和基因等多方面進行 , 只有基因受環(huán)境影響的程度最低 , 因此研究價值較大。由于HLA 具有連鎖不平衡的遺傳特點 , 某些 基因或單倍型在不同種族或地區(qū)人群的頻率分布存在明顯的不同 , 故在人類學(xué)研究中可為 探討人類的起源和民族的演變提供

14、頗有價值的資料。HLA 系統(tǒng)與輸血 為了合理使用血液 , 現(xiàn)代輸血提倡 “ 成分療法 ”, 即對病人輸入單一的血液成分。一些接受化療、放療的癌癥患者或骨髓移植病人 , 也往往需要血小板或白細(xì)胞等血液制劑 , 為了達 到療效 , 應(yīng)在同胞或隨機人群中選擇 HLA完 全相合的獻血員 。目前 , 臨床輸血中的發(fā)熱反應(yīng) , 大部分是 HLA抗體引起的 , 特別是多次輸血病人 , 很容易產(chǎn)生 HLA 抗體 , 而在非溶血性輸血 反應(yīng)中 70% 左右是發(fā)熱反應(yīng)。粒細(xì)胞血型分布：中性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞。分類：. HNA-1抗原：目前發(fā)現(xiàn)的唯一具有多態(tài)性的粒細(xì)胞抗原系統(tǒng)。. HNA-2抗原：其

15、中HNA-2 a具有臨床意義。 .HNA-3抗原：其中HNA-a表達于淋巴細(xì)胞、血小板、內(nèi)皮細(xì)胞、脾臟、腎臟、胎盤細(xì)胞，是粒細(xì)胞聚集因子，與輸血相關(guān)性肺損傷相關(guān)。1. 血清學(xué)方法：a.粒細(xì)胞凝集試驗b.單克隆抗體特異性粒細(xì)胞抗原捕獲試驗c.粒細(xì)胞免疫熒光試驗d.流式細(xì)胞術(shù)2. DNA分型技術(shù): PCR-RFLP、PCR-SSP等。粒細(xì)胞抗原抗體檢測方法粒細(xì)胞抗體的臨床應(yīng)用.新生兒同種免疫粒細(xì)胞減少癥2. 非溶血性發(fā)熱性輸血反應(yīng)3. 輸血相關(guān)性肺損傷4. 粒細(xì)胞輸注無效5. 自身免疫性粒細(xì)胞減少癥血小板血型系統(tǒng)血小板固有抗原HLA-類抗原：抗原性強紅細(xì)胞血型抗原：ABO分類HPA-1a, HPA

16、-1bHPA-2a, HPA-2bHPA-3a, HPA-3bHPA-4a, HPA-4bHPA-5a, HPA-5bHPA-6a, HPA-6bHPA-15a, HPA-15betc.Zwa/b, PLA1/A2Koa/b, SibaBaka/b, LekaYuka/b, Pena/bBra/b, Zava/b, HcaCaa, TuaGova/betc.命名：現(xiàn)名稱 / 原名稱抗原系統(tǒng)抗原決定簇定位抗原頻率（%）白人日本人HPA-1aGPa97.599.9HPA-1b26.53.7HPA-2aGPb99.3未測HPA-2b14.625.4HPA-3aGPb87.725.4HPA-3b64.178.9HPA-4aGPa99.999.9HPA-4b0.21.7HPA-5aGPa99.2未測HPA-5b20.6未測血小板特異性抗原 血小板輸注后無效 1、反復(fù)輸血小板患者血清中產(chǎn)生血