免疫原和抗血清的制備課件

1、動物免疫和多克隆抗體的制備多克隆抗體的產生示意圖多克隆抗體(polyclonal antibody,pcAb)：天然抗原刺激多種B淋巴細胞克隆產生的多種抗體的混合物 多克隆抗體的制備 將制備好的免疫原按照一定的免疫程序接種給所選擇的動物，該動物在含有多種抗原表位的抗原刺激下，體內多個B細胞克隆被激活并產生針對某一抗原多種不同表位的抗體，其混合物為多克隆抗體 抗原來源與動物種屬的關系 種屬差異越遠，免疫原性越強 動物個體的選擇 適齡、健康、體重符合要求 抗原的性質一、免疫動物的選擇多克隆抗體制備的步驟抗原制備免疫動物采血收集血清免疫方法常用注射方法皮下注射注射到皮下組織內 皮內注射注入表皮與真皮

2、之間足底注射肌肉注射靜脈注射腹腔注射單克隆抗體單克隆抗體是指由一個B細胞分化增殖的子代細胞（漿細胞）產生的針對單一抗原決定簇的抗體這種抗體的重鏈、輕鏈及其V區(qū)獨特型的特異型性、親和力、生物學性狀及分子結構均完全相同性 質常規(guī)血清抗體單克隆抗體無關的Ig多少或幾乎無其它血清蛋白有少，培養(yǎng)物上清常有10胎牛血清Ag-Ab結合免疫原的全部成分的全部抗原決定簇免疫原中的一種成分的一個抗原決定簇特異性親和力的重復性不同批號間有變化無變化與其它抗原的交叉反應與帶有共同抗原決定簇的抗原有部分交叉一般無。結合到共同決定簇則是完全的免疫球蛋白的種類與亞類完全是混合的只是一種或幾種單抗與多抗免疫原的劑量 中間劑量

3、范圍內，免疫原劑量增加可獲得高效價抗體 免疫間隔時間 第一次和第二次間隔兩周左右，二次免疫后2周左右采血，檢測抗體水平免疫途徑 皮內、皮下、肌肉、靜脈、腹腔、淋巴結 二、免疫程序抗體的鑒定和保存28保存：短期保存冰凍保存：保存1-5年真空干燥保存：保存510年抗體的保存目的1、掌握免疫原的制備方法2、掌握家兔背部皮下多點注身免 疫的方法實驗材料 新西蘭大白兔 ISA206佐劑抗原 注射器、毛剪等佐劑的作用方法形成抗原貯存庫，使抗原緩慢釋放，延長抗原在局部組織的滯留時間，較長時間使抗原與免疫細胞接觸并激發(fā)對抗原的應答增加抗原的表面積，增高抗原的免疫原性，輔助抗原暴露并將能刺激特異性免疫應答的抗原

4、表位遞呈給免疫細胞促進局部的炎性反應，增強吞噬細胞的活性，促進免疫細胞的增殖與分化，誘導細胞因子的分泌油水乳劑水包油乳劑流動性高，有良好的相容性，可誘導強而短期的免疫反應油包水乳化劑能誘導強而長期的免疫，免疫過程只需要一次注射即可維持整個生長期的保護，但有時能引起局部反應。水包油包水乳化劑粘度低，能提高短期和長期的免疫反應，外部水相中的抗原就象水制劑一樣可立即作用于免疫系統，而內部水相的抗原就象在油包水乳劑中一樣緩慢釋放。弗氏佐劑弗氏完全佐劑： 礦物油（液體石蠟）+乳化劑（羊毛脂）+滅活的結核分枝桿菌或卡介苗弗氏不完全佐劑： 不含結核桿菌步 驟1、培養(yǎng)細菌，甲醛0.8%滅活，37，24h2、滅活菌經PBS洗滌兩遍（4 ，5000rpm，10min），加等量PBS重懸3、加佐劑充分乳化：混合前將抗原與佐劑預熱致相同的溫度，注射器來回推動25次4、兔背部剪毛，4x10cm25、背部皮下多點注射：20點，0.05ml/點6、在初次免疫高峰后加強免疫7、加強免疫后7-1