細胞培養(yǎng)操作守則

1、細胞培養(yǎng)基本操作守則潔凈室必備物品：專用白大衣，拖鞋；保潔要求：非本中心工作人員不得進入細胞培養(yǎng)室的潔凈操作區(qū)；本中心細胞培養(yǎng)人員進入潔凈區(qū)，必須更換專用白大衣和拖鞋，專用白大衣每周必須清洗一次，并用紫外燈照射消毒；原則上每日早8：30-9：00，下午5：00-5：30為細胞培養(yǎng)間的消毒時間。75%乙醇擦洗實驗臺面，用1：200的84消毒液擦拭潔凈區(qū)地面，紫外燈照射30分鐘；每兩星期進行一次房間的徹底打掃，包括儀器、實驗臺面以及地面，以消滅衛(wèi)生死角。超凈工作臺限放物品:酒精燈、火柴、鑷子、滅菌Ep管及TIP頭， 加樣器（1套，包含5ul-1000ul各量程）、電動移液槍、裝有75%乙醇浸泡的脫

2、脂棉球的試劑瓶、廢物罐及備用的垃圾袋；保潔要求：每次實驗完畢，用75%乙醇浸泡的脫脂棉球擦拭工作臺面；每周末進行徹底清潔，主要進行工作臺面的消毒，玻璃的擦拭。注：從工作臺中取用物品，需戴手套進行；工作臺中放置的物品不得隨意取出，如需遇特殊情況必須取出，務必放回，在放回時需紫外燈照射15-20分鐘；公用物品用盡時，應主動配制或添加。二氧化碳培養(yǎng)箱 保潔要求：每月用75%的乙醇擦洗二氧化碳培養(yǎng)箱一次；每兩周根據(jù)實際情況更換或添加培養(yǎng)箱中的貯水，為防止霉菌污染，貯水應使用高壓滅菌的蒸餾水；應隨時檢查二氧化碳的儲備量。顯微鏡： 保潔要求：使用前，應確認培養(yǎng)瓶（或培養(yǎng)皿）底部沒有污物和水漬；使用中，需調(diào)

3、節(jié)高度或水平位置時，應使用相應的調(diào)節(jié)旋鈕，不得用手直接強拉硬拽；使用后，應及時關(guān)閉電源，調(diào)節(jié)載物臺到最低位置，并使其擋住物鏡鏡頭，以免落上灰塵。細胞培養(yǎng)間使用要求操作前，打開紫外燈照射超凈工作臺15-20分鐘；對實驗中需要使用、但屬于工作臺非限放的物品，在使用之前，也應放入工作臺用紫外燈照射15-20分鐘。入潔凈室之前，應用肥皂將手洗凈；進入后，需更換專用的白大衣和拖鞋、戴手套。開始實驗操作后，點燃酒精燈(內(nèi)裝95%或100%乙醇)，用75%乙醇浸泡的脫脂棉球擦拭所用加樣器的外口，一切操作均需在火焰近處并經(jīng)過燒灼進行，取用物品應用鑷子進行。操作結(jié)束后，立即將所有非限放物品和垃圾袋攜出工作臺，按相應的垃圾處理規(guī)則處理；廢物罐用75%乙醇浸泡的脫脂棉球擦拭外周，及時更換新的垃圾袋。操作完畢時，用75%乙醇浸泡的脫脂棉球擦拭工作臺面的原則是由內(nèi)向外，順序操作，以去除殘留的污染物。對培養(yǎng)箱中已經(jīng)沒有實驗價值的培養(yǎng)物，應及時清理、消除污染隱患。細胞需要進行凍存時，應先與細胞庫管理員聯(lián)系，由其安排液氮罐中的存放地址，操作者按分配的地址存放凍存物。在存放或取用凍存物時，應將存放盒移出液氮罐外操作，并盡可能快速操作，以免影響其他凍存物。細胞培養(yǎng)過程中出現(xiàn)一切不正?，F(xiàn)象，如：液氮罐內(nèi)承載的液氮液面過低、凍存物