細(xì)胞培養(yǎng)操作守則

1、細(xì)胞培養(yǎng)基本操作守則潔凈室必備物品：專用白大衣，拖鞋；保潔要求：非本中心工作人員不得進(jìn)入細(xì)胞培養(yǎng)室的潔凈操作區(qū)；本中心細(xì)胞培養(yǎng)人員進(jìn)入潔凈區(qū)，必須更換專用白大衣和拖鞋，專用白大衣每周必須清洗一次，并用紫外燈照射消毒；原則上每日早8：30-9：00，下午5：00-5：30為細(xì)胞培養(yǎng)間的消毒時(shí)間。75%乙醇擦洗實(shí)驗(yàn)臺(tái)面，用1：200的84消毒液擦拭潔凈區(qū)地面，紫外燈照射30分鐘；每?jī)尚瞧谶M(jìn)行一次房間的徹底打掃，包括儀器、實(shí)驗(yàn)臺(tái)面以及地面，以消滅衛(wèi)生死角。超凈工作臺(tái)限放物品:酒精燈、火柴、鑷子、滅菌Ep管及TIP頭， 加樣器（1套，包含5ul-1000ul各量程）、電動(dòng)移液槍、裝有75%乙醇浸泡的脫

2、脂棉球的試劑瓶、廢物罐及備用的垃圾袋；保潔要求：每次實(shí)驗(yàn)完畢，用75%乙醇浸泡的脫脂棉球擦拭工作臺(tái)面；每周末進(jìn)行徹底清潔，主要進(jìn)行工作臺(tái)面的消毒，玻璃的擦拭。注：從工作臺(tái)中取用物品，需戴手套進(jìn)行；工作臺(tái)中放置的物品不得隨意取出，如需遇特殊情況必須取出，務(wù)必放回，在放回時(shí)需紫外燈照射15-20分鐘；公用物品用盡時(shí)，應(yīng)主動(dòng)配制或添加。二氧化碳培養(yǎng)箱 保潔要求：每月用75%的乙醇擦洗二氧化碳培養(yǎng)箱一次；每?jī)芍芨鶕?jù)實(shí)際情況更換或添加培養(yǎng)箱中的貯水，為防止霉菌污染，貯水應(yīng)使用高壓滅菌的蒸餾水；應(yīng)隨時(shí)檢查二氧化碳的儲(chǔ)備量。顯微鏡： 保潔要求：使用前，應(yīng)確認(rèn)培養(yǎng)瓶（或培養(yǎng)皿）底部沒有污物和水漬；使用中，需調(diào)

3、節(jié)高度或水平位置時(shí)，應(yīng)使用相應(yīng)的調(diào)節(jié)旋鈕，不得用手直接強(qiáng)拉硬拽；使用后，應(yīng)及時(shí)關(guān)閉電源，調(diào)節(jié)載物臺(tái)到最低位置，并使其擋住物鏡鏡頭，以免落上灰塵。細(xì)胞培養(yǎng)間使用要求操作前，打開紫外燈照射超凈工作臺(tái)15-20分鐘；對(duì)實(shí)驗(yàn)中需要使用、但屬于工作臺(tái)非限放的物品，在使用之前，也應(yīng)放入工作臺(tái)用紫外燈照射15-20分鐘。入潔凈室之前，應(yīng)用肥皂將手洗凈；進(jìn)入后，需更換專用的白大衣和拖鞋、戴手套。開始實(shí)驗(yàn)操作后，點(diǎn)燃酒精燈(內(nèi)裝95%或100%乙醇)，用75%乙醇浸泡的脫脂棉球擦拭所用加樣器的外口，一切操作均需在火焰近處并經(jīng)過燒灼進(jìn)行，取用物品應(yīng)用鑷子進(jìn)行。操作結(jié)束后，立即將所有非限放物品和垃圾袋攜出工作臺(tái)，按相應(yīng)的垃圾處理規(guī)則處理；廢物罐用75%乙醇浸泡的脫脂棉球擦拭外周，及時(shí)更換新的垃圾袋。操作完畢時(shí)，用75%乙醇浸泡的脫脂棉球擦拭工作臺(tái)面的原則是由內(nèi)向外，順序操作，以去除殘留的污染物。對(duì)培養(yǎng)箱中已經(jīng)沒有實(shí)驗(yàn)價(jià)值的培養(yǎng)物，應(yīng)及時(shí)清理、消除污染隱患。細(xì)胞需要進(jìn)行凍存時(shí)，應(yīng)先與細(xì)胞庫管理員聯(lián)系，由其安排液氮罐中的存放地址，操作者按分配的地址存放凍存物。在存放或取用凍存物時(shí)，應(yīng)將存放盒移出液氮罐外操作，并盡可能快速操作，以免影響其他凍存物。細(xì)胞培養(yǎng)過程中出現(xiàn)一切不正?，F(xiàn)象，如：液氮罐內(nèi)承載的液氮液面過低、凍存物