DB32-T 3762.5-2020新型冠狀病毒檢測技術(shù)規(guī)范 第5部分：血清IgM和IgG抗體酶聯(lián)免疫吸附檢測程序-（高清現(xiàn)行）

1、ICS 11.020C 62DB32江蘇省地方標(biāo)準(zhǔn)DB 32/T 3762.52020 新型冠狀病毒檢測技術(shù)規(guī)范第 5 部分：血清 IgM 和 IgG 抗體酶聯(lián)免疫吸附檢測程序Technical specifications for SARS-CoV-2 detectionPart 5: Serum IgM and IgG antibodies test procedure by ELISA 2020 - 03 - 02 發(fā)布2020 - 03 - 03 實(shí)施江蘇省市場監(jiān)督管理局發(fā) 布DB32/T 3762.52020I 目 次 HYPERLINK l _bookmark0 前 言II HYP

2、ERLINK l _bookmark1 1 范圍1 HYPERLINK l _bookmark2 2 規(guī)范性引用文件1 HYPERLINK l _bookmark3 3 術(shù)語和定義1 HYPERLINK l _bookmark4 4 環(huán)境與設(shè)施1 HYPERLINK l _bookmark5 5 設(shè)備與耗材1 HYPERLINK l _bookmark6 6 試劑與材料1 HYPERLINK l _bookmark7 7 樣本采集2 HYPERLINK l _bookmark8 8 樣本運(yùn)輸2 HYPERLINK l _bookmark9 9 酶聯(lián)免疫吸附檢測步驟2 DB32/T 3762.5

3、2020II 前 言DB32/T 3762新型冠狀病毒檢測技術(shù)規(guī)范目前分為以下部分：第1部分：生物樣本采集、運(yùn)輸和保存；第2部分：病毒分離與鑒定；第3部分：核酸熒光PCR檢測程序；第4部分：重組酶介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增程序；第5部分：血清IgM和IgG抗體酶聯(lián)免疫吸附檢測程序；第6部分：血清IgM和IgG抗體膠體金免疫層析檢測程序；第7部分：空氣樣本檢測與評估；第8部分：物體表面檢測與評估；第9部分：醫(yī)務(wù)人員職業(yè)暴露檢測與評估。本部分為DB32/T 3762 的第5部分。本部分按照GB/T 1.1-2009 給出的規(guī)則起草。本部分由江蘇省衛(wèi)生健康委員會提出。本部分由江蘇省衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會歸口。本部分

4、主要起草單位：江蘇省疾病預(yù)防控制中心、南京醫(yī)科大學(xué)、蘇州第五人民醫(yī)院、蘇州大學(xué)附二院、昆山市疾病預(yù)防控制中心。本部分主要起草人：曾曉燕、朱寶立、焦永軍、郭喜玲、遲瑩、吳斌、程軍平、徐佳南、錢志遠(yuǎn)、羅曉明、沈歡喜。DB32/T 3762.52020 PAGE 2 新型冠狀病毒檢測技術(shù)規(guī)范第 5 部分：血清IgM 和IgG 抗體酶聯(lián)免疫吸附檢測程序范圍本部分規(guī)定了新型冠狀病毒者血清中 IgM 和 IgG 抗體酶聯(lián)免疫吸附檢測的環(huán)境與設(shè)施、設(shè)備與耗材、試劑與材料、血清樣本采集、酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)操作。本部分適用于新型冠狀病毒感染確診病例、疑似病例以及確診病例的密切接觸者血清學(xué)檢查。規(guī)范性引用文件下列文

5、件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。Doc9284-AN/905 危險(xiǎn)品航空安全運(yùn)輸技術(shù)細(xì)則術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件3.1IgM 和 IgG 抗體 IgM and IgG antibodiesSARS-CoV-2感染人體后，除了對靶器官產(chǎn)生致病過程外，病毒基因組編碼的結(jié)構(gòu)蛋白、非結(jié)構(gòu)蛋白還刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)，產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答，分泌病原體特異性IgM和IgG抗體至血液循環(huán)中。環(huán)境與設(shè)施在BSL-2級實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。設(shè)備與耗材設(shè)備：生物安全柜、洗板機(jī)、酶標(biāo)儀（含有 450

6、nm 波長濾光片）、高壓鍋、生物安全運(yùn)輸箱、水浴鍋。耗材：個(gè)人防護(hù)裝備：N95 及以上防護(hù)口罩、護(hù)目鏡、一次性防護(hù)面罩、醫(yī)用無紡布帽、連體防護(hù)服、一次性手術(shù)衣、乳膠手套、 防水靴套、真空釆血管、無菌螺旋口塑料管。試劑與材料新型冠狀病毒人IgM抗體ELISA檢測試劑盒、新型冠狀病毒人IgG抗體ELISA檢測試劑盒。樣本采集用真空負(fù)壓采血管采集血液樣本5mL，室溫靜置30分鐘，1500rpm2000rpm離心10分鐘，收集血清于無菌螺口塑料管中。樣本運(yùn)輸同本標(biāo)準(zhǔn) 第1部分6.1和6.2。酶聯(lián)免疫吸附檢測步驟酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)-IgM (間接法)根據(jù)樣本數(shù)量取出一定量的預(yù)包被抗原的酶標(biāo)板并平衡至室溫，

7、每次實(shí)驗(yàn)設(shè)陰、陽和空白復(fù)孔對照；向板中加入 100L/管樣本稀釋液，然后向其中加入 1L 的待測血清（根據(jù)需要添加陽性、陰性參考對照），將酶標(biāo)板用封板膜封閉，置 37孵箱中孵育 30 分鐘；取出酶標(biāo)板置于洗板機(jī)上用洗液洗滌（或者用洗瓶手工洗滌）5 次后，甩干孔內(nèi)殘留液或倒扣酶標(biāo)反應(yīng)板在吸水紙上拍去孔內(nèi)殘留液；于各孔中加入HRP 標(biāo)記的抗人 IgM 工作液 100L/孔，置 37孵箱中孵育 30 分鐘；9.1.5 重復(fù) 8.1.3 步驟；將顯色液A、B 液按 1:1 混合后取混合顯色液每孔加 100L，輕拍酶標(biāo)反應(yīng)板，混勻后置室溫 5分鐘；于各孔中加入終止液 50L/孔，輕拍混勻；將酶標(biāo)板置于酶

8、標(biāo)儀 450nm 波長下，測定各孔光吸收 OD 值；根據(jù)檢測試劑設(shè)計(jì)者的要求判斷結(jié)果。酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)-IgG (間接法)根據(jù)樣本數(shù)量取出一定量的預(yù)包被抗原的酶標(biāo)板并平衡至室溫，每次實(shí)驗(yàn)設(shè)陰、陽和空白復(fù)孔對照；向板中加入 100L/管樣本稀釋液，然后向其中加入 1L 的待測血清（根據(jù)需要添加陽性、陰性參考對照），亦可把血清在 1:100 稀釋的基礎(chǔ)上再進(jìn)行倍比稀釋。將酶標(biāo)板用封板膜封閉，置 37孵箱中孵育 30 分鐘；取出酶標(biāo)板置于洗板機(jī)上用洗液洗滌（或者用洗瓶手工洗滌）5 次后，甩干孔內(nèi)殘留液或倒扣酶標(biāo)反應(yīng)板在吸水紙上拍去孔內(nèi)殘留液；于各孔中加入HRP 標(biāo)記的抗人 IgG 工作液 100L/孔，置 37孵箱中孵育 30 分鐘；9.2.5 重復(fù) 8.2.3