同濟(jì)醫(yī)院檢驗(yàn)科ISO15189體系文件03丙型肝炎抗體(抗-HCV)測(cè)定

1、同濟(jì)大學(xué)附屬同濟(jì)醫(yī)院檢驗(yàn)科免疫組項(xiàng)目操作指導(dǎo)書(shū)TJYYJYKMY/XMZ203第2版標(biāo)題：丙型肝炎抗體(抗HCV)測(cè)定第2章 第03號(hào)第 PAGE 4 頁(yè) 共 NUMPAGES 4 頁(yè)1. 目的：檢測(cè)血清標(biāo)本中的抗HCV-IgM抗體。2. 適用范圍：同濟(jì)醫(yī)院檢驗(yàn)科免疫室。3. 項(xiàng)目名稱(chēng)：丙肝抗體測(cè)定4. 檢測(cè)方法：酶免疫分析法。5. 檢測(cè)原理：包被抗原為合成多肽抗原和基因工程抗原（包括HCV病毒結(jié)構(gòu)區(qū)核心抗原和非結(jié)構(gòu)區(qū)抗原）。待測(cè)標(biāo)本加入已包被抗原的反應(yīng)孔內(nèi)孵育，若標(biāo)本中含用HCV抗體，則該抗體與微孔內(nèi)抗原形成抗原抗體復(fù)合物，加入酶結(jié)合物，經(jīng)孵育后，酶結(jié)合物連接至抗原抗體復(fù)合物上，在TMB底物

2、參與反應(yīng)的情況下，產(chǎn)生顯色反應(yīng)。6. 試劑：購(gòu)自上?？迫A公司，每一試劑盒包含以下成分：6.1 品牌:科華實(shí)業(yè)公司。6.2 包裝規(guī)格:96人份。6.3 內(nèi)含物:每盒試劑含以下成分：6.3.1 微孔反應(yīng)條: 8孔X 126.3.2 酶聯(lián)試劑：7.5mlX2瓶；6.3.3 陽(yáng)性對(duì)照：1ml Xl瓶；6.3.4 陰性對(duì)照：1mlXl瓶；6.3.5 樣品稀釋液：20mlX1瓶；6.3.6 洗滌液 (使用前25倍稀釋)：80mlXl瓶；6.3.7 顯色劑A：8mlXl瓶；6.3.8 顯色劑B：8mlXl瓶；6.3.9 終止液：7mlXl瓶；6.3.10封片：2片。6.3.11說(shuō)明書(shū)1份。7 儀器品牌、型號(hào)

3、：意大利Alisei全自動(dòng)酶免分析儀。8 操作步驟：8.1 打印工作單:8.1.1 打開(kāi)LIS電腦及打印機(jī)電源，8.1.2 雙擊齊效檢驗(yàn)系統(tǒng)，登陸工號(hào)與密碼；8.1.3 雙擊報(bào)告處理，單擊標(biāo)本申請(qǐng)信息打開(kāi)標(biāo)本申請(qǐng)明細(xì)信息查詢(xún)，打開(kāi)左上角的所有信息，選擇未生成報(bào)告信息。8.1.4 在檢驗(yàn)項(xiàng)目處選擇HCV執(zhí)行查詢(xún)，點(diǎn)擊打印申請(qǐng)單，打印出工作單。8.2 排列待測(cè)標(biāo)本:根據(jù)工作單上的庫(kù)位號(hào)從標(biāo)本架中找出相應(yīng)標(biāo)本，并按工作單上的順序排列在A(yíng)lisei全自動(dòng)酶免分析儀的樣本架上。8.3 裝載試劑：開(kāi)啟Alisei全自動(dòng)酶免分析儀，根據(jù)待測(cè)標(biāo)本數(shù)量，點(diǎn)擊編輯工作列表，出現(xiàn)試劑及酶標(biāo)板界面。按照屏幕所示放好洗

4、板液，洗針液，標(biāo)本試管，預(yù)稀釋管和試劑。8.4 裝載酶標(biāo)板：點(diǎn)擊Alisei分析儀界面的裝卸反應(yīng)板按鈕進(jìn)行裝載反應(yīng)板，按項(xiàng)目順序進(jìn)行裝載。等所有項(xiàng)目酶標(biāo)板裝載完成后，點(diǎn)擊開(kāi)始按鈕，機(jī)器開(kāi)始檢測(cè)。8.5 Alisei分析儀檢測(cè)參數(shù)：試劑空 白陽(yáng)性對(duì)照陰性對(duì)照質(zhì)控品標(biāo) 本單 孔雙 孔雙 孔單 孔單 孔100ul樣本稀釋液100ul/孔10ul標(biāo)本+100ul樣本稀釋液37，30分鐘洗滌，洗滌液350ul/孔 5次酶結(jié)合物100ul/孔混勻，37，30分鐘洗滌，洗滌液350ul/孔 5次A液50ul/孔B液50ul/孔混勻，37，10分鐘終止液50ul/孔450/630nm讀取OD值8.6 結(jié)果：儀

5、器自動(dòng)記錄OD值并可打印測(cè)定結(jié)果，同時(shí)傳入LIS中，發(fā)送報(bào)告詳見(jiàn)免疫報(bào)告發(fā)送程序。8.7 結(jié)果判斷：陽(yáng)性對(duì)照OD值應(yīng)大于或等于0.6，若大于2.5時(shí)，按2.5計(jì)算。陰性對(duì)照OD值不得大于0.05；Cutoff Value的計(jì)算，COV=0.1陽(yáng)性對(duì)照平均OD值+陰性對(duì)照平均OD值；測(cè)試標(biāo)本的OD值COV則為HCV抗體陰性；測(cè)試標(biāo)本的OD值COV則為HCV抗體陽(yáng)性。9. 參考范圍：正常人陰性。10. 臨床意義：抗HCVIgG、IgM抗體均為非保護(hù)性抗體，急性期為IgM型，慢性期多為IgG型，恢復(fù)期患者抗HCV均為IgG型，且滴度較低。11. 病人準(zhǔn)備、標(biāo)本要求：標(biāo)本為血清時(shí)最好空腹采血，脂血、溶血不可使用。其它體液標(biāo)本無(wú)特殊要求。12. 注意事項(xiàng)：12.1 從冷藏環(huán)境中取出的試劑盒內(nèi)全部瓶裝試劑及待測(cè)標(biāo)本所需微孔反應(yīng)條應(yīng)在室溫平衡30分鐘后方可使用，余者應(yīng)及時(shí)封存于冰箱中，以備后用。12.2 使用前試劑液為綠色，加入血清或血漿時(shí)變?yōu)樗{(lán)紫色；當(dāng)加入非血清或血漿時(shí)不變色或變?yōu)槠渌伾?，不影響檢測(cè)結(jié)果。樣品稀釋液不宜長(zhǎng)時(shí)間暴露于空氣中，每次使用樣品稀釋液后，請(qǐng)盡快蓋好瓶蓋。12.3 手工操作時(shí)，封片不能反復(fù)使用。12.4 若洗滌液出現(xiàn)結(jié)晶，可置37使