高效液相色譜法測定淫黃膠囊中淫羊藿苷的含量

1、高效液相色譜法測定淫黃膠囊中淫羊藿苷的含量【摘要】目的建立淫黃膠囊中淫羊藿苷的含量測定方法。方法采用高效液相色譜法。色譜柱為zrbaxsb-18(2504.6,5)；流動相為乙腈-水(2575,v/v),流速1.0l/in；檢測波長270n。結(jié)果淫羊藿苷的進樣量與其峰面積積分值在0.099840.59904g范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系(r0.9998),平均加樣回收率為97.77%,rsd1.77%(n6)。結(jié)論本法簡便可行,準確可靠,可用于淫黃膠囊中淫羊藿苷的含量測定?！娟P(guān)鍵詞】淫羊藿苷；淫黃膠囊；高效液相色譜法abstrat：bjetivetestablishanhplethdfrdeteri

2、natinfthententfiariininyinhuangapsules.ethdsthehplassayasperfrednazrbaxsb-18lun(2504.6,5)iththebilephasefaetnitrile-aquus(2575,v/v)ataflratef1.0l/in,andthedetetiveavelengthas270n.resultsagdlinearityfiariinasbtainedintherangef0.099840.59904g(r0.9998).theaveragereveryas97.77%andrsdas1.77%(n6).nlusinth

3、eethdissiple,feasible,aurateandreliable.itanbeappliedtthedeterinatinfiariininyinhuangapsules.keyrds：iariin；yinhuangapsules；hpl淫黃膠囊是由淫羊藿、黃芪組成的中藥復(fù)方制劑,具有補氣健腎之功,主要用于治療腎病綜合征。該制劑中主要藥味淫羊藿主要含有黃酮類、多糖,其中黃酮類成分淫羊藿苷為淫羊藿的主要特征性有效成分。為了有效控制該制劑的質(zhì)量,本實驗建立了以高效液相色譜法測定制劑中淫羊藿苷含量的方法。1儀器與試藥agilent1100高效液相色譜系統(tǒng)(自動脫氣機、vd檢測器,美國產(chǎn)

4、)。淫羊藿苷對照品(中國藥品生物制品檢定所提供,批號0737-200111,供含量測定用)；淫黃膠囊(本院中藥藥劑實驗室研制,批號20220509、20220523、20220606)。乙腈為色譜純(美國tedia公司)；水為注射用水；其余試劑均為分析純。2方法與結(jié)果2.1色譜條件色譜柱：zrbaxsb-18(2504.6,5)；流動相：乙腈-水(2575,v/v)；流速：1.0l/in；檢測波長：270n。理論塔板數(shù)按淫羊藿苷計算不低于2500。2.2檢測波長確實定取淫羊藿苷對照品適量,用50%乙醇溶解、稀釋成濃度約為1g/l的溶液,以50%乙醇為空白,在400200n波長范圍內(nèi)掃描,結(jié)果淫

5、羊藿苷在270n波長處有最大吸收。2.3標準曲線的制備精細稱取淫羊藿苷對照品10.40g,置50l量瓶中,加50%乙醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,得濃度為208.0g/l的對照品儲藏液。分別從中精細汲取0.6、1.2、1.8、2.4、3.0、3.6l置于25l量瓶中,加50%乙醇稀釋至刻度,搖勻,得系列濃度的對照品溶液。分別精細汲取各濃度對照品溶液20l,注入液相色譜儀,按上述色譜條件測定峰面積。以淫羊藿苷進樣量為橫坐標,以峰面積積分值為縱坐標,進展線性回歸,得回歸方程為：y5.9532107.944x,r0.9998。結(jié)果說明,淫羊藿苷進樣量在0.099840.59904g范圍內(nèi)與其峰面積積分值

6、有良好的線性關(guān)系。2.4供試品溶液的制備取淫黃膠囊10粒內(nèi)容物,研細,取細粉約0.2g,精細稱定,置具塞錐形瓶中,精細參加50%乙醇20l,稱定重量,超聲處理(功率200,頻率59khz)45in,放置,冷至室溫,稱定重量,用50%乙醇補足減失的重量,搖勻,濾過,精細量取續(xù)濾液4l置水浴上蒸干,加水10l溶解,以乙酸乙酯萃取3次,每次10l,合并乙酸乙酯萃取液,減壓回收溶劑至干,殘渣加50%乙醇溶解并定容至25l量瓶中,搖勻,即得供試品溶液。2.5陰性干擾試驗按處方制法制備缺淫羊藿的陰性對照樣品,按供試品溶液的制備方法制備陰性對照溶液。分別汲取淫羊藿苷對照品溶液(14.976g/l)、供試品溶

7、液、陰性對照溶液各20l,注入液相色譜儀,按上述色譜條件測定,記錄色譜圖(見圖1)。結(jié)果說明,在淫羊藿苷色譜峰位置處陰性無干擾。2.6精細度試驗精細汲取淫羊藿苷對照品溶液(14.976g/l)20l,注入液相色譜儀,重復(fù)進樣5次。結(jié)果峰面積積分值rsd1.03%,說明精細度良好。2.7穩(wěn)定性試驗取同一份供試品溶液(批號20220509),分別于0、2、4、6、8h時進樣20l,按上述色譜條件測定,峰面積積分值rsd1.39%。結(jié)果說明,供試品溶液中淫羊藿苷至少在8h內(nèi)穩(wěn)定性良好。2.8重復(fù)性試驗取同一批淫黃膠囊(批號20220509)5份,分別按“2.4項下方法制備供試品溶液,進樣20l,按上

8、述色譜條件測定,計算淫羊藿苷含量,結(jié)果rsd2.92%。2.9加樣回收率試驗取已測定含量的淫黃膠囊(批號20220509)內(nèi)容物,研細,稱取6份,各約0.1g,精細稱定,分別精細參加淫羊藿苷對照品儲藏液(208.0g/l)5l,按“2.4項下方法制備供試品溶液,依法測定,計算回收率。結(jié)果見表1。表1加樣回收率試驗結(jié)果略2.10樣品測定取淫黃膠囊樣品3批,按“2.4項下方法制備供試品溶液,進樣20l,按上述色譜條件測定,采用外標法計算淫羊藿苷含量,結(jié)果見表2。結(jié)合?中華人民共和國藥典?標準規(guī)定淫羊藿藥材中淫羊藿苷含量不低于0.5%1,暫定本品每1g含淫羊藿苷不低于8g。表2淫羊藿苷含量測定結(jié)果略3討論在供試品溶液制備中,曾分別比擬了不同提取方式(回流法提娶超聲法提取)及其不同提取時間(15、30、45、60in)對淫黃膠囊樣品中淫羊藿苷的提取效率,結(jié)果兩種方式提取的效果根本一致。文中所選用的超聲法提取操作簡便,超聲45in可將樣品所含的淫羊藿苷提取完全。因該超聲提取法同時提取出較多雜質(zhì),本試驗根據(jù)淫羊藿苷的溶解性質(zhì)2,再將提取液以乙酸乙酯提娶純化,結(jié)果能使供試品溶液中雜質(zhì)大大減少,在保證被測成分提取完全的同時,減少了樣品對色譜柱的污染。對于流動相,將?中華人民共和國藥典?1中淫羊藿藥材含量測定項中的流動相調(diào)整為乙腈-水(2575,v/v),即可得到滿意的色譜別離效果。本試驗所建