標(biāo)準(zhǔn)菌株的管理與控制

1、Word文檔 標(biāo)準(zhǔn)菌株的管理與控制！ 一、目的 規(guī)范用于微生物試驗(yàn)質(zhì)量掌握和操作評(píng)估的標(biāo)準(zhǔn)菌株管理與使用程序，盡量削減交叉污染確保試驗(yàn)結(jié)果牢靠與試驗(yàn)室平安。二、范圍本工作指引適用于微生物試驗(yàn)室全部標(biāo)準(zhǔn)菌株的管理與使用。三、參考四、內(nèi)容4.1 程序1.標(biāo)準(zhǔn)菌株的復(fù)壯a(bǔ).將復(fù)壯所用的0.5-1ml液體培育基（如TS或BPW）置于室溫；b.將標(biāo)準(zhǔn)菌株從冰箱取出置于室溫；c.無(wú)菌操作去除菌株的包裝物；d.無(wú)菌操作敬液體培育基導(dǎo)入菌株容器；或者無(wú)菌操作剪開菌株包裝物，將菌株倒入液體培育基；e.將試管在37下放置一段時(shí)間后，使菌種完全溶解到培育基中；f.輕輕搖動(dòng)試管形成懸浮液；g. 從菌種懸浮液中接種幾環(huán)

2、到培育基平板（如養(yǎng)分瓊脂）劃線培育；h. 將接種過(guò)的平板置于合適的溫度和條件下培育復(fù)壯。2. 從培育過(guò)的平板或斜面上挑取幾個(gè)菌落，根據(jù)相應(yīng)的LI接種到選擇性培育基上。3. 將選擇出的菌落根據(jù)相應(yīng)的LI進(jìn)行菌種確認(rèn)。進(jìn)行革蘭氏染色或者鏡檢，并純化后根據(jù)相應(yīng)的LI進(jìn)行生化試驗(yàn)確認(rèn)。記錄下全部的現(xiàn)象。4. 在每年復(fù)壯或者買入是都要進(jìn)行菌種確認(rèn)試驗(yàn)。5. 菌種確認(rèn)達(dá)到要求后，使用Microbank Frozen Beads標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株。a.取肯定量的標(biāo)準(zhǔn)菌株培育物（18-24h），無(wú)菌操作接種到裝有小珠的小瓶?jī)?nèi)并加入肉湯（BPW）。關(guān)緊小瓶并顛倒4-5次乳化培育物。不要猛烈搖擺，避開液體灑出；b.將多

3、余的液體吸出。關(guān)緊小瓶；c.在小瓶上貼上標(biāo)簽，標(biāo)明菌種名稱和預(yù)備日期；d.小瓶在冷凍條件下（大約-20）可儲(chǔ)存一年；e.從Microbank中預(yù)備工作菌株：從小瓶中無(wú)菌操作取出一個(gè)小珠，接種到非選擇性培育基平板或斜面，或者放入液體培育基中。小珠從小瓶中取出后決不行以再放回。馬上將小瓶放回冷凍；f. 接種過(guò)的平板、斜面或者肉湯放在37培育24-48h。一旦發(fā)覺(jué)平板、斜面或者肉湯有微生物生長(zhǎng)后馬上從培育箱取出；g.在平板、斜面或者肉湯上粘貼標(biāo)簽，注明菌種名稱、預(yù)備日期和有效期。放在冰箱大約4儲(chǔ)存。6. 每次使用一支工作菌株，頻率根據(jù)工作需要，通常為一個(gè)星期。一旦發(fā)覺(jué)菌株有污染現(xiàn)象后馬上處理掉并使用

4、新的工作菌株。工作菌株在冰箱內(nèi)保存不超過(guò)兩個(gè)星期。7. 重復(fù)5-6步驟可更新工作菌株。8. 一旦標(biāo)準(zhǔn)菌株用完或者表現(xiàn)不滿足時(shí)，重復(fù)1-4步驟更新標(biāo)準(zhǔn)菌株。4.2 儲(chǔ)存1.選購(gòu)回來(lái)的標(biāo)準(zhǔn)菌株需單獨(dú)鎖在-20的冰箱內(nèi)。2.未使用的Microbank小珠放在小瓶?jī)?nèi)儲(chǔ)存在4避開陽(yáng)光直射。一旦發(fā)覺(jué)Microbank有以下狀況時(shí)不得使用：發(fā)覺(jué)小瓶有泄露現(xiàn)象；儲(chǔ)存液發(fā)覺(jué)渾濁可能表示已經(jīng)被污染；過(guò)了有效期。3. 全部的選購(gòu)、復(fù)壯、使用和銷毀必需記錄并由主管確認(rèn)。五、工作流程1.選購(gòu)回的標(biāo)準(zhǔn)菌株可放在-20儲(chǔ)存，直到過(guò)期。2. 使用Microbank Frozen Beads system 制備儲(chǔ)存標(biāo)準(zhǔn)菌株。3.在小瓶上注明標(biāo)準(zhǔn)菌株的名稱、預(yù)備日期和有效期。-20可保存一年。4