藥物分析液相色譜基礎(chǔ)

1、液相色譜基礎(chǔ)知識關(guān)于色譜色譜是一種分離工具，而不是傳統(tǒng)意義上的分析儀器常見的分離方式：蒸餾、離心、電泳、過濾、超濾等等色譜是其中一種分離工具色譜法簡介色譜法（Chromatography）溯源俄國科學(xué)加1903年發(fā)現(xiàn)色譜的吸附原理，開創(chuàng)了應(yīng)用吸附原理分離植物色素的新方法并見諸于俄文的文獻(xiàn)1906年正式命名（見諸文獻(xiàn)）色譜法；Chromatography50年代開始廣泛研究和應(yīng)用主要是氣相色譜及薄層色譜高效液相色譜法的廣泛應(yīng)用始于70年代色譜的發(fā)明人俄國科學(xué)家：M. S. Tswett正式命名“色譜”的文獻(xiàn)一、色譜起源石油醚碳酸鈣顆粒色素玻璃柱經(jīng)典液相色譜色譜分離的機(jī)理分離是一個物理的過程流動相

2、（Mobile Phase）固定相（Stationary Phase）樣品（溶解于流動相中的溶質(zhì)）什么是液相色譜氣相色譜：流動相是氣相液相色譜：流動相是液相什么是高效液相色譜High Performance Liquid Chromatography高效液相色譜法，簡稱：HPLC是一種區(qū)別于經(jīng)典液相色譜；基于儀器方法的高效能分離手段：高性能的色譜柱，高精度、耐高壓的輸液泵以及高靈敏度的檢測器廣泛應(yīng)用于各個領(lǐng)域：醫(yī)藥 / 環(huán)保 / 石化 / 生命科學(xué) / 食品及農(nóng)業(yè)在技術(shù)，理論及應(yīng)用上仍處于發(fā)展階段液相色譜的基本流程圖流動相 泵色譜柱檢測器 泵輸液分離 檢測 記錄AEGBCDF進(jìn)樣閥進(jìn)樣HPLC

3、的儀器配置色譜泵自動進(jìn)樣器色譜柱及柱溫箱檢測器數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)溶劑HPLC的應(yīng)用在食品研究中的分析應(yīng)用食品中的天然成分碳水化合物類脂化合物、甘油三酸酯、膽固醇脂肪酸和有機(jī)酸蛋白、肽、氨基酸食品添加劑酸味劑、甜味劑、香精、乳化劑抗氧化劑、防腐劑顏料和染料（色素維生素污染物霉菌（黃曲霉毒素農(nóng)藥和獸藥殘留多環(huán)芳烴（PAHS和亞硝酸HPLC的應(yīng)用在獸藥研究中分析應(yīng)用在醫(yī)藥研究中分析應(yīng)用 藥物分析有USP、BP、CP等標(biāo)準(zhǔn)常用藥物研究中的應(yīng)用：解熱鎮(zhèn)痛藥、鎮(zhèn)靜藥、安定藥、心血管藥、磺胺類消炎藥等。甾體藥物研究中的應(yīng)用：腎上腺皮質(zhì)激素、雄性激素、雌性激素和孕激素等。抗菌素類藥物研究中的應(yīng)用：青霉素、頭孢菌素、

4、慶大毒素、四環(huán)素、氯霉素、諾氟沙星等。中草藥研究中的應(yīng)用：生物堿、甙類(皂甙、強(qiáng)心甙、黃酮甙等)、萜類手性藥物研究中的應(yīng)用：光學(xué)異構(gòu)體的拆分(如解毒劑D-青霉胺毒性小，L-異構(gòu)體毒性很強(qiáng))醫(yī)療藥物的檢測、新藥研究、藥物代謝、藥代動力學(xué)研究。HPLC 的應(yīng)用在生物化學(xué)和生物工程中的應(yīng)用氨基酸、多肽和蛋白質(zhì)的分析研究核堿、核苷、核苷酸和核酸的分析研究生物胺的分析研究（兒茶酚胺類) 在精細(xì)化工分析中的應(yīng)用醇、醛和酮、醚的分離分析酸和酯的分離分析表面活性劑的分析聚合物的分析研究藥物、農(nóng)藥、染料、炸藥等工業(yè)產(chǎn)品在無機(jī)離子分析中應(yīng)用飲用水、酸雨、土壤中陰離子和陽離子分析 HPLC的應(yīng)用在公安、刑警破案工作

5、需要毒品分析等在環(huán)境污染分析中的應(yīng)用廢氣、廢水、廢渣中多環(huán)芳烴、多氯聯(lián)苯、農(nóng)藥殘留、酚類和胺類的檢測 * 2004年獲悉，世界上化合物總數(shù)達(dá)到4700萬，其中絕大部分是有機(jī)化合物，而大約有70以上是不揮發(fā)的。對HPLC來說，只要被分析物質(zhì)在流動相溶劑（各種各樣中有一定的溶解度便可分析。所以，HPLC在各行各業(yè)有著廣泛的應(yīng)用潛力。高效液相色譜基本概念色譜圖：HPLC圖形結(jié)果（Chromatogram）色譜圖即色譜柱流出物通過檢測器時所產(chǎn)生的響應(yīng)信號對時間的曲線圖，其縱坐標(biāo)為信號強(qiáng)度，橫坐標(biāo)為保留時間。 色譜峰保留時間（分）基線峰高峰寬響應(yīng)值液相色譜圖相關(guān)術(shù)語色譜峰 Peak色譜柱流出組分通過檢測

6、器時產(chǎn)生的響應(yīng)信號的微分曲線峰底 Peak Base峰的起點(diǎn)與終點(diǎn)之間連接的直線峰高 Peak Height峰最大值到峰底的距離峰寬 Peak Width在峰兩側(cè)拐點(diǎn)處所作切線與峰底相交兩點(diǎn)之間的距離半（高）峰寬 Peak Width at Half Height通過峰高的中點(diǎn)作平行于峰底的直線，其與峰兩側(cè)相交兩點(diǎn)之間的距離液相色譜圖相關(guān)術(shù)語峰面積 Peak Area峰與峰底之間的面積,又稱響應(yīng)值標(biāo)準(zhǔn)偏差； Standard Error0.607倍峰高處所對應(yīng)峰寬的一半拖尾峰 Tailing Peak后沿較前沿平緩的不對稱峰前伸峰 Leading Peak前沿較后沿平緩的不對稱峰鬼峰 Ghos

7、t Peak并非由試樣所產(chǎn)生的峰；亦稱假峰液相色譜圖相關(guān)術(shù)語基線 Baseline在正常操作條件下，僅由流動相所產(chǎn)生的響應(yīng)信號的曲線基線飄移 Baseline Drift基線隨時間定向的緩慢變化基線噪聲；N Baseline Noise由各種因素所引起的基線波動譜帶擴(kuò)展 Band Broadening由于縱向擴(kuò)散,傳質(zhì)阻力等因素的影響,使組分在色譜柱內(nèi)移動過程中譜帶寬度增加的現(xiàn)象液相色譜圖相關(guān)術(shù)語死時間，t0 Dead time不被固定相滯留的組分，從進(jìn)樣到出現(xiàn)峰最大值所需的時間保留時間，tR Retention time組分從進(jìn)樣到出現(xiàn)峰最大值所需的時間死體積，V0 Dead volume不

8、被固定相滯留的組分，從進(jìn)樣到出現(xiàn)峰最大值所需的流動相體積保留體積，VR Retention volume組分從進(jìn)樣到出現(xiàn)峰最大值所需的流動相體積液相色譜應(yīng)用：制備型液相色譜分離及純化樣品是液相色譜原理的直接利用 對分離及純化的要求化合物的穩(wěn)定性樣品的復(fù)雜性制備量的要求純度的要求，及純度的鑒定方法的安全性液相色譜應(yīng)用：分析型液相色譜定量分析主要基于與標(biāo)準(zhǔn)品的比較是其最大應(yīng)用領(lǐng)域定性分析；不是色譜的強(qiáng)項(xiàng)基于樣品的保留時間比較借助于和其聯(lián)用的紫外、質(zhì)譜或其他檢測器對定量及定性分析的要求靈敏度、精度及準(zhǔn)確度的要求樣品量的要求；復(fù)雜樣品的分析能力容易使用液相色譜實(shí)驗(yàn)所需的基本參數(shù)液相色譜實(shí)驗(yàn)所需的基本參數(shù)流動相：種類及配比，等度或梯度固定相：色譜柱類型及內(nèi)徑、長短流動相輸送系統(tǒng)參數(shù)：流速檢測器參數(shù)：紫外檢測波長，靈敏度等溫度控制進(jìn)樣量以上參數(shù)即構(gòu)成一個具體的HPLC方法；亦稱色譜條件評價液相