總糖的測(cè)定方法

1、鐵氰化鉀滴定法準(zhǔn)確稱取經(jīng)105C烘干并冷卻之后的樣品5.000g,用少量水溶解并移入500ml容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻。取出此液50ml于100ml容量瓶中，加鹽酸5ml搖勻，置6570C水浴上加溫30min,取出，迅速冷卻至室溫。用30%氫氧化鈉溶液中和，加水至刻度，搖勻,倒入滴定管中。吸取已配制好的鐵氰化鉀溶液5ml于150ml三角瓶中，加入2.5mll0%氫氧化鈉溶液、12.5ml水和潔凈的玻璃珠數(shù)個(gè)，于石棉網(wǎng)上加熱至沸騰，保持1min。然后加入次甲基藍(lán)指示劑1滴，立即以樣品液滴定至藍(lán)色消失為止，記錄用量。正式滴定時(shí)，先加入比預(yù)實(shí)驗(yàn)少0.5ml的樣品液，煮沸1min，加入次甲基藍(lán)指

2、示劑1滴，再用樣品液滴定至無(wú)色。按下述公式計(jì)算鐵氰化鉀的濃度：廠訓(xùn)乂C-1000X0.95式中C：相當(dāng)于5ml鐵氰化鉀溶液的轉(zhuǎn)化糖的重量(g)；V：滴定時(shí)消耗樣品液的體積(ml)；W：稱取的樣品重量(g)；0.95：換算系數(shù)(1g蔗糖可轉(zhuǎn)化為0.95g轉(zhuǎn)化糖)稱取樣品510g(視含糖量多少而增減)，用200ml左右的水洗入250ml容量瓶?jī)?nèi)(樣品中如含有較多的蛋白質(zhì)、色素、膠體等可逐漸加入20%醋酸鉛溶液1015ml,至沉淀完全為止。并加入1015ml10%磷酸二氫鈉溶液，至不再產(chǎn)生沉淀為止)。加水至刻度，搖勻過(guò)濾。吸取濾液50ml于100ml容量瓶中，按上述鐵氰化鉀標(biāo)定方法進(jìn)行轉(zhuǎn)化、中和及滴

3、定(以樣液代替糖液，其余操作相同)。按下述公式計(jì)算總糖含量：式中A：相當(dāng)于5ml鐵氰化鉀溶液的轉(zhuǎn)化糖的重量(g)；V：滴定試樣液消耗體積(ml)。蔥酮比色法測(cè)總糖實(shí)驗(yàn)五總糖的測(cè)定蔥酮比色法一、目的：掌握蔥酮法測(cè)定可溶性糖含量的原理和方法。學(xué)習(xí)植物可溶性糖的一種提取方法。二、原理：糖類在較高溫度下可被濃硫酸作用而脫水生成糠醛或羥甲基糖醛后,與蔥酮(CHO)脫水縮合，形成糠醛的衍生物，呈藍(lán)綠色。該物質(zhì)在620nm處有最大吸1410收，在150pg/ml范圍內(nèi)，其顏色的深淺與可溶性糖含量成正比。這一方法有很高的靈敏度，糖含量在30pg左右就能進(jìn)行測(cè)定，所以可做為微量測(cè)糖之用。一般樣品少的情況下，采用

4、這一方法比較合適。三、儀器、試劑和材料儀器：電熱恒溫水浴鍋，分光光度計(jì)，電子天平，容量瓶，刻度吸管等試劑：（1）葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液：100pg/ml（2）濃硫酸（3）蔥酮試劑：0.2g蔥酮溶于100ml濃HSO中。當(dāng)日配制使用。24材料：甜糜秸稈四、操作步驟葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作取7支大試管，按下表數(shù)據(jù)配制一系列不同濃度的葡萄糖溶液：管號(hào)1234567葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液（ml）00.10.20.30.40.60.8蒸餾水（ml）10.90.80.70.60.40.2葡萄糖含量（pg）0102030406080在每支試管中立即加入蔥酮試劑4.0m1,迅速浸于冰水浴中冷卻，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加蓋，

5、以防蒸發(fā)。自水浴重新煮沸起，準(zhǔn)確煮沸10min取出，用冰浴冷卻至室溫，在620nm波長(zhǎng)下以第一管為空白，迅速測(cè)其余各管吸光值。以標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖含量（pg）為橫坐標(biāo)，以吸光值為縱坐標(biāo)，作出標(biāo)準(zhǔn)曲線。植物樣品中可溶性糖的提?。簩悠芳羲橹?mm以下，105C烘干至恒重，精確稱取15g，置于50ml三角瓶中，加沸水25m1，加蓋，超聲提取10min，冷卻后過(guò)濾（抽濾），殘?jiān)梅姓麴s水反復(fù)洗滌并過(guò)濾（抽濾），濾液收集在50m1容量瓶中，定容至刻度，得提取液。稀釋：吸取提取液2m1，置于另一50m1容量瓶中，以蒸餾水稀釋定容，搖勻。測(cè)定吸取1ml已稀釋的提取液于試管中，加入4.Oml蔥酮試劑，平行三份；空白

6、管以等量蒸餾水取代提取液。以下操作同標(biāo)準(zhǔn)曲線制作。根據(jù)A平均值在標(biāo)620準(zhǔn)曲線上查出葡萄糖的含量（pg）。五、結(jié)果處理CXVXD總樣品含糖量（%）=X100WXVX106測(cè)其中：C在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出的糖含量（pg）,V總提取液總體積（ml）,總V測(cè)測(cè)定時(shí)取用體積（ml）,測(cè)D稀釋倍數(shù)，W樣品重量（g），106樣品重量單位由g換算成卩g的倍數(shù)六、注意事項(xiàng)：該法的特點(diǎn)是幾乎可測(cè)定所有的碳水化合物,不但可測(cè)定戊糖與已糖,且可測(cè)所有寡糖類和多糖類,包括淀粉、纖維素等（因?yàn)榉磻?yīng)液中的濃硫酸可把多糖水解成單糖而發(fā)生反應(yīng)）,所以用蒽酮法測(cè)出的碳水化合物含量,實(shí)際上是溶液中全部可溶性碳水化合物總量。在沒(méi)有必要細(xì)致劃分各種碳水化合物的情況下,用蒽酮法可以一次測(cè)出總量,省去許多麻煩,因此,有特殊的應(yīng)用價(jià)值,但在測(cè)定水溶性碳水化合物時(shí),則應(yīng)注意切勿將樣品的未溶解殘?jiān)尤敕磻?yīng)液中,否則會(huì)因?yàn)榧?xì)胞壁中的纖維素、半纖維素等與蒽酮試劑發(fā)生反應(yīng)而增加了