同濟(jì)醫(yī)院檢驗(yàn)科ISO15189體系文件17.抗堿血紅蛋白測定

1、同濟(jì)大學(xué)附屬同濟(jì)醫(yī)院檢驗(yàn)科血液組項(xiàng)目操作指導(dǎo)書TJYYJYKMY/XMZ117第2版標(biāo)題: 抗堿血紅蛋白測定第1章 第17節(jié)第 PAGE 4 頁 共 NUMPAGES 4 頁 目的：保證抗堿血紅蛋白測定結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。 適用范圍；檢測抗堿血紅蛋白 項(xiàng)目名稱：抗堿血紅蛋白測定（抗堿Hb） 檢測方法：比色法 原理：受檢血液置于堿性溶液0.083mol/l NaOH中，作用1分鐘。用酸化的半飽和硫 酸銨溶液終止反應(yīng)，混勻過濾，檢測濾液中抗堿血紅蛋白的含量。HbF具有抗堿能力，在堿性溶液中不變性，加入硫酸銨不沉淀，過濾后濾液中，HbF的量呈正相關(guān)。HbA無抗堿能力，在堿性濾液中變性，加入硫酸銨沉淀，過

2、濾除去。 試劑：6.1 品牌： NaOH 上海試劑三廠 硫酸銨 上海試劑三廠 生理鹽水 上海同濟(jì)醫(yī)院 6.2 貨號(hào) NaOH 13-2010278125II 硫酸銨 13-001-0802-113II 生理鹽水 B916.3 包裝規(guī)格： NaOH 500mL 硫酸銨 50g 生理鹽水 500mL6.4 內(nèi)含物： 0.083mol /L NaOH 飽和硫酸溶液：硫酸銨 390g 蒸餾水 加至500ml 酸性半飽和硫酸銨溶液：飽和硫酸銨 200ml 1mol/L HCL 10ml 加蒸餾水至400ml 儀器：分光光度儀 操作步驟：8.1 標(biāo)本為05真空管采集的抗凝血3mL制備成10%Hb溶血液。（

3、同Hb電泳）8.2 取一支試管，加入0.083mol/LnaOH1.6ml,加入10%Hb溶血液0.1ml,同時(shí)開動(dòng)秒表用吸管上下吸勻56次，隨即輕輕搖動(dòng)試管10秒鐘，使血紅蛋白液和NaOH溶液充分混勻。8.3 準(zhǔn)備至1分鐘，加入酸性半飽和硫酸銨溶液3.4ml,立即顛倒混勻56次，靜置10分鐘后，用定量濾紙過濾。此管為測定管，每個(gè)標(biāo)本做2管取平均值。8.4 另取一支試管，加入H2O 5.05ml,再加入0.05mlHb溶血液，充分混勻，此管為100%血紅蛋白管為對(duì)照管。8.5 用蒸餾水調(diào)零，在540nm波長處比色。 計(jì)算： 測定管OD值抗堿Hb(%)=100% 100%測定管OD值X2 線性范

4、圍：無10. 參考范圍：正常人的HbF濃度在2%以下 不同年齡的HbF含量年齡 抗堿Hb含量（%） 年齡 抗堿Hb含量（%）早生兒 70.691.4 13 1.024.73足月兒 4589 46 0.93.18新生兒 48.492.8 711 0.41.713月 7.4981.7 1216 0.41.546月 2.4339.4 成年人 2712月 1.377.811. 臨床意義：抗堿血紅蛋白增高可見于：B地中海貧血、遺傳性胎兒血紅蛋白持續(xù)增高癥及白血病、再障、鐵粒幼細(xì)胞性貧血，PNH，MDS，惡性貧血。 病人準(zhǔn)備標(biāo)本要求：無溶血無脂血 注意事項(xiàng)： Hb溶液必須當(dāng)天新鮮配制。13.2 試驗(yàn)時(shí)濃度應(yīng)控制在201,溫度過低，Hb變性不完全，結(jié)果偏高。13.4 嚴(yán)格控制